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动物细胞培养习题名词解释 1、细胞工程:广义的遗传工程,是以细胞生物学和分子生物学为基础理论，采用原生质体、细胞或组织培养等试验方法或技术，将一种生物细胞中携带的全套遗传信息的基因或染色体整个导人另一种生物细胞，在细胞水平上研究改变生物遗传特性，以获得具有新性状的细胞系或生物体以及生物的次生代谢产物，并发展有关理论和技术方法的学科。2、细胞培养:将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术称为细胞培养。3、细胞核移植:利用显微操作技术将一个细胞的细胞核移植到另一个细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换，从而可能创造无性杂交生物新品种的一项技术。4、染色体工程：是人们按照一定的设计,有计划地消减,添加或代换同种或异种染色体,从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。5、胚胎工程:指在胚胎发育过程中进行的生物技术。包括：胚胎移植、胚胎融合、胚胎分割、胚胎冷冻、胚胎性别鉴定、胚胎细胞核移植、转基因操作。6、干细胞:即起源细胞。在细胞的分化过程中，细胞往往由于高度化分而完全失去了再分裂的能力，最终衰老死亡。机体在发展适应过程中为了弥补这一不足，保留了一部分未分化的原始细胞。7、组织工程:应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理状况下哺乳动物组织的结构、功能和生长的机制，研究开发能够修复、维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。 8、初代培养:即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。特点：细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。与体内原组织在形态结和功能活动上相似性大。是药物测试很好的对象。9、继代培养:对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代的培养。10、酶连免疫吸附测定:将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。是酶免疫测定技术中应用最广的技术。11、抗原：指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞结合，发生免疫效应的物质。12、抗体：指机体在抗原刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。13、单克隆抗体：只针对某一抗原决定簇的抗体分子。14、多克隆抗体：由同一抗原诱导而产生的针对多个抗原决定族的抗体。15、动物细胞与组织培养:是动物细胞工程的重要技术基础。指从动物体内取出细胞或组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富营养条件下，使离体细胞或组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。16、传代:当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代。17、原代培养:即直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的首次培养物。一旦已进行传代培养的细胞，便不再称为初代培养，而改称为细胞系。18、细胞系:由原代培养经初步纯化，获得的以一种细胞为主的能在体外长期生存的不均一的细胞群体。19、细胞株:细胞系经过进一步的克隆化，得到的由一种细胞组成的细胞株。20、胚胎移植:又称受精卵移植，俗称人工授胎或借腹怀胎，是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。21、超数排卵:应用外源性促性腺激素诱发卵巢多个卵泡发育，并排出具有受精能力的卵子的方法，称为超数排卵。 22、试管动物:将供体的精子和卵子在体外受精、体外培养胚胎，然后将发育到一定程度的胚胎移植入受体，可以得到各种动物。由于体外受精一般在试管中进行，所以称为试管动物，也称“体外受精动物”。简答题1、你怎样理解有菌环境和无菌环境？2、采用高压蒸汽锅高压灭菌时，应注意哪些事项?答：(1)高压灭菌锅使用前要水加到水位线；（2）将需灭菌的培养基、蒸馏水或其它器皿放入灭菌锅内，关闭锅盖，检查排气阀、安全阀状态（上下排气阀打开安全阀关合然后加热，方便空气排出，上、下排气阀都同时处于开启状态待有水蒸汽从上、下阀溢出，此状态保持7、8分钟后，即排出空气后上排气阀关合，下排气阀调小，安全阀保持关合状态 ）；（3）打开电源，检查参数设置是否正确，然后按下“work”键，灭菌锅开始工作；自动派冷气，到105时，底部排气阀门自动关闭，然后压力开始上升；（4）压力升至 0.15MPa（121）时，灭菌锅再次自动放气，然后开始记时，一般培养基灭菌20min，蒸馏水灭菌30min；（5）达到规定的灭菌时间后，关闭电源，打开放气阀缓慢放气；当压力指针降至 0.00MPa时，放气阀无蒸汽排除时，方可开启锅盖。（6）汽未放尽前，不得开启高压锅；（7）如果灭菌后的培养基在锅内不及时拿出，需在蒸汽放尽后将锅盖打开，切忌将培养基封闭在锅内过夜。（8）压力表指针在0.05MPa以上时，不能过快放汽，以防止压力急速下降，液体滚沸，从培养容器中溢出。（9）操作过程，请注意安全，小心烫伤。3、实验人员进入接种室接种之前，应做哪些准备工作?答：工作人员在进入接种室之前在缓冲间内更换衣服，鞋帽、戴上口罩、防尘帽才能进入接种区，进入接种区后随手把活动门关上。4、请讲述无菌操作接种的全过程。5、简述分离单细胞的方法？并比较其优缺点答：要从完整植物器官中分离单细胞，通常采用机械法和酶解法。机械法分离叶肉细胞是先把叶片轻轻研碎，然后通过过滤和离心净化细胞。该方法具有的优点： 细胞不会受到酶的伤害； 不需质壁分离，有利于进行生理和生化研究。用机械分离细胞容易伤害细胞结构，获得完整细胞团或细胞数量极低，虽然分离的细胞能够分裂并形成愈伤组织，但仍不普遍适用。酶解法分离细胞是利用果胶酶、纤维素酶处理，分离出具有代谢活性的细胞，该法不仅能降解中胶层，而且还能软化细胞壁。所以在用酶解法分解细胞的时候，必须对细胞给予渗透压保护。6、何谓动物组织培养、细胞培养、器官培养？各有何特点？答：动物组织培养；将活体的一小片组织放在盛有培养液的玻璃或塑料培养器皿中，待组织块粘着后，沿底面平面移动生长的过程称为组织培养。从组织块中生长出来的仍然是细胞，细胞在生长的同时也发生移动，至使组织培养难以长时间维持其原有结构，结果也就成了细胞培养。细胞培养：将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术称为细胞培养。器官培养：指采取某些措施使器官的原基、器官的一部分或整个器官在体外存活、生长，并保持其原有结构和功能的培养技术。7、动物细胞培养的方式有几种？答：一、动物细胞培养的传统方法 ：1培养瓶培养方法：指将培养对象直接接种于培养瓶内培养。 2培养板培养法:又称微量培养法，一般是一次性使用。3悬滴培养法 :又称植块悬滴培养法，即将组织或器官植块接种在一张盖玻片上，滴上一滴培养液，然后翻转盖玻片使植块及营养液悬挂于盖玻片下，再置于一凹形载玻片上，最后用熔蜡密封后放于培养箱中培养。4旋转管培养法:是培养中组织块或细胞交替地与培养液和空气直接接触。5灌注小室培养法:在盖玻片悬滴法基础上发展而来，可用于连续观察细胞动态变化，研究各种因素影响作用及活细胞反应。二、动物细胞大规模培养技术 1悬浮培养技术 2微载体培养技术 3多孔载体培养 4微囊化培养技术 5中空纤维法 8、原代细胞培养方法有那些？答：1）、组织块培养法：无菌取出目的组织 用利刀无菌切割成1-2mm小块 以Hanks液漂洗干净,低速离心，弃上清，移入培养瓶，加入适当培养基浸润 培养瓶翻转1800，置15-30分，使其贴壁 培养瓶翻回，置于37培养 2）组织消化培养（单层培养法）：无菌取出目的组织 用利刀无菌切割成细块 胰蛋白酶液消化 Hanks液漂洗两次，低速离心弃上清 吸管吹打分散细胞 移入培养瓶薄层培养9、单克隆抗体大量生产有哪几种方法？答：1）体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从一清液中获取单克隆抗体。但此方法产量低，一般培养液内抗体含量为1060g/ml,如果大量生产，费用较高。（2）体内接种杂交瘤细胞，制备腹水或血清。实体瘤法：腹水的制备 (书上p85)10、培养基、培养器皿和植物材料通常怎样灭菌?答：培养基、培养器皿一般采用高温蒸汽灭菌11、体细胞杂种的鉴定方法有哪几种？举例说明。答：通过形态学、细胞学、分子生物学和生物化学、抗性鉴定、育性鉴定、叶绿体DNA、线粒体DNA、核DNA、RuBp羧化酶分析和同工酶谱分析等方法，对获得的再生植株进一步分析和鉴定，以证实再生植株杂种的真实性。12. 体细胞杂交和原生质体融合有哪些类型？其产物和再生个体有何特点？答：体细胞杂交类型：常用的体细胞杂交、配子间细胞杂交、配子体细胞杂交。原生质体融合类型：体细胞杂交可建立细胞株，长期保存，进行各种正常和病理研究。原生质体融合后的细胞比平时细胞大一些。表现出两种植物体的优良性状。13. PEG融合法的技术关键是什么？答：融合液：CaCl22H2O 810mmol、KH2PO4 0.7mmol、甘露醇或山梨醇 0.51.0mol、pH 5.6诱导液：融合液PEG 2045稀释液：A液（g/100ml）pH6.0、B液（g/100ml）pH10.5、葡萄糖 7.21、甘氨酸 0.375、CaCl22H2O 0.79、NaOH 0.169、DMSO 10ml14. 电融合的技术参数指的是什么？答：电融合中的主要参数包括交流电压、交变电场的振幅频率、交变电场的处理时间；直流高频电压、脉冲宽度、脉冲次数等。15. 电融合的关键技术是什么？答：细胞膜的接触：当原生质体置于电导率很低的溶液中时，电场通电后，电流即通过原生质体而不是通过溶液，其结果是原生质体在电场作用下极化而产生偶极子，使原生质体紧密接触排列成串；膜的击穿：原生质体成串排列后，立即给予高频直流脉冲就可以使原生质膜击穿，从而导致两个紧密接触的细胞融合在一起。 论述题1、细胞工程是什么 它包括哪些研究内容 举例说明它在实践中的应用。答：细胞工程：广义的遗传工程,是以细胞生物学和分子生物学为基础理论，采用原生质体、细胞或组织培养等试验方法或技术，将一种生物细胞中携带的全套遗传信息的基因或染色体整个导人另一种生物细胞，在细胞水平上研究改变生物遗传特性，以获得具有新性状的细胞系或生物体以及生物的次生代谢产物，并发展有关理论和技术方法的学科。根据研究对象不同分为微生物细胞工程、根据技术范围分细胞与组织培养植物细胞工程、细胞融合（细胞杂交）、动物细胞工程、细胞核移植、染色体工程、胚胎工程、干细胞与组织工程、转基因生物与生物反应器；根据研究水平划分细胞水平、组织水平、细胞器水平、基因水平等2、胚胎培养技术在育种工作中有哪些应用？答：克服杂种胚的败育,获得稀有杂种获得单倍体和多倍体植株打破种子休眠,促进胚萌发快速繁殖良种,缩短育种周期克服种子生活力低下和自然不育性,提高种子发芽率提高后代抗性,改良品质种子活力的快速测定种质资源的搜集和保存研究胚胎发育的过程和控制机制3、请阐述单克隆抗体的制备过程答：免疫动物细胞融合。将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化。单克隆抗体的大量制备。4、请阐述动物克隆的程序答：取妊娠期的6岁母绵羊（Finn Dorset白品种母羊）的乳腺细胞作核供体细胞，用饥饿法使其进入休眠状态而使全部基因具有活性。注射促性腺激素，促使母羊（Sottish Blackface黑面母绵羊）排卵，2833小时取其未受精卵，快速去核，放入10%FCS、1%FCS和0.5%FCS连续5天，使其进入G0期做受体细胞。乳腺细胞与无核卵放入同一培养皿中，在微电流的作用下，将乳腺细胞融入卵中，形成一个含有新的遗传物质的卵细胞。新的卵细胞植入羊的结扎的输卵管内，6天后发育为桑椹胚或囊胚（816个细胞）。将此早期胚胎移入假孕母羊子宫中，产下多利即为6岁母羊的复制品，也为白色。5、请你设计一个植物细胞工程实验室，都需要哪些仪器设备，说明你设