免疫组操作规程.doc

南通医学院附属医院检验科质量手册 第1版免疫篇作业指导书免疫专业组作业指导书两对半测定标准操作程序(SOP-301)1目的：定性或半定量检测临床血液标本中乙肝病毒的标志物（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）。2SOP-301变动程序：由操作者提出并经科主任审核。3范围：适用于血清或血浆类标本用于乙型肝炎的辅助诊断及疗效观察。4溯源：全国临床检验操作规程（第二版）。5. 操作程序 本实验用“深圳月亮湾生物工程有限公司” 提供的试剂盒，采用ELISA原理来检测乙肝标志物五项。适用于血清或血浆类标本。5.1实验原理： 以检测乙肝表面抗原为例。采用单克隆抗-HBs包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗-HBs-HRP,当标本中存在HbsAg时，该HbsAg与包被抗-HBs结合，并与抗-HBs-HRP结合，形成抗-HBs-HbsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应。5.2试剂盒组成：5.2.1 微孔反应板：96人份，可根据标本多少拆分使用。5.2.2酶结合物、阳性对照、阴性对照。5.2.3显色剂A，显色剂B，终止液，封片。5.2.4洗涤液20ml/1瓶，用前以蒸馏水做20倍稀释。5.2.5表面抗原质控品（1/ml）,由卫生部临床检验中心提供。5.3测定步骤： 采用意大利Alisei全自动免疫分析仪进行分析检测。仪器自动进行加样、稀释、洗板、比色、分析结果、打印报告。 仪器检测过程如下：5.3.1根据试剂盒说明书编排检测程序（包括样品用量、试剂用量、孵育时间、 洗板次数、比色波长、结果判断标准等）。5.3.2输入工作表。5.3.3分离血清，将血清样品装入样品盘。5.3.4根据仪器要求的位置和用量装载各种试剂、质控及阴、阳性对照。5.3.5根据仪器要求装载酶标板5.3.6在一切准备充分之后，按动“start”，仪器自动进行加样、稀释、孵育、洗板、比色、判断结果、最终打印报告。5.4结果判断： 采用双波长比色，比色波长450nm，参考波长630nm，比色后仪器自动作出判断。 正向2.10.05 附：HbsAg：正向2.10.05 HbsAb：正向2.10.05 HbeAg：正向2.10.05 HbeAb：反向NC0.2 HbcAb：反向NC0.2。5.5注意事项：5.5.1试剂5.5.1.1从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37平衡30分钟后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。5.5.1.2试剂盘上的各种试剂、质控及阴、阳性对照需及时补充和定期更换。5.5.1.3做完后及时将试剂盘放入4冰箱保存。5.5.1.4不同批号的试剂不可混用，所用试剂必须在有效期内。5.5.2 标本5.5.2 1建议空腹抽血，采血时避免溶血。5.5.2 2注意将样品放置实验室固定样品区。5.5.2 3当天不能检测的样品应编号分离血清，存放在4冰箱，以防止溶血。5.5.2 4每份化验单都需要分类保存，所有化验单都需网上确认。5.5.2 5待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。5.5.3结果5.5.3.1 报告前做好三查四对。5.5.3.2 出现HBeAb、HBcAb阳性结果而HBsAg呈阴性时，需用定量法复查，以免HBsAg过剩，强阳性漏检。5.5.3.3 单HBsAg、HBsAg和HBeAg或HBsAg和HBeAb阳性或其他可疑结果时，用定量法重做。5.6乙肝标志物报告及临床意义：序号HBsAg抗HBse抗原抗HBe抗HBc说明1+-+-+急肝，慢性活动期，有传染性2+-+恢复期，弱传染性3-+恢复期，弱传染性4+-+急肝或慢性HBsAg携带者5-+-+康复期6-+-+既往感染过，仍有免疫力7-+-康复期，主动，被动免疫后8-未感染过HBV授权人质量负责人部门负责人操作人员姓名日期乙型肝炎病毒HBc-IgM测定标准操作程序(SOP-302)1. 目的：定性或半定量检测临床血清中乙型肝炎病毒HBc-IgM。2SOP-302变动程序：由操作者提出并经科主任审核。3范围：适用于血清或血浆类标本，用于乙型肝炎早期诊断。4. 溯源：全国临床检验操作规程（第二版）。5操作程序： 本实验用“深圳月亮湾生物工程有限公司” 提供的试剂盒，采用ELISA 捕获法检测乙型肝炎IGM型核心抗体。5.1实验原理： 用抗人链抗体包被酶标板，用以捕获血清中IGM类抗体，再加HBcAg与特异性抗HBc-IgM结合，而后加HRP-抗HBc与HBcAg相结合，最后加底物显色。显色的深浅与HBc-IgM的含量成正比。5.2试剂盒组成 96人份5.2.1抗人链包被干板条 12孔8条5.2.2阳性对照 150l1瓶5.2.3阴性对照 1ml1瓶5.2.4核心抗原 （HBcAg） 6ml1瓶5.2.5酶结合物 6ml1瓶5.2.6浓缩洗涤液 20ml1瓶5.2.7显色剂A 6ml1瓶5.2.8显色剂B 6ml1瓶5.2.9终止液 6ml1瓶5.3测定步骤： 采用意大利Alisei全自动免疫分析仪进行分析检测。仪器自动进行加样、稀释、洗板、比色、分析结果、打印报告。 仪器检测过程如下：5.3.1根据试剂盒说明书编排检测程序（包括样品用量、试剂用量、孵育时间、洗板次数、比色波长、结果判断标准等）。5.3.2 输入工作表。5.3.3 分离血清，将血清样品装入样品盘。5.3.4 根据仪器要求的位置和用量装载各种试剂、质控及阴、阳性对照。5.3.5 根据仪器要求装载酶标板5.3.6在一切准备充分之后，按动“start”，仪器自动进行加样、稀释、孵育、洗板、比色、判断结果、最终打印报告。5.4结果判断： 正向：Cut off=0.052.1。5.5注意事项：5.5.1试剂5.5.1.1从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37平衡30分钟方可使用，余者及时封存于冰箱中以备后用。5.5.1.2试剂盘上的各种试剂、质控及阴、阳性对照需及时补充和定期更换。5.5.1.3做完后及时将试剂盘放入4冰箱保存。5.5.1.4不同批号的试剂不可混用，所用试剂必须在有效期内。5.5.1.5试剂盒应按含有传染性材料对待。5.5.2 标本5.5.2.1建议空腹抽血，采血时避免溶血。5.5.2.2注意将样品放置实验室固定样品区。5.5.2.3当天不能检测的样品，应编号，分离血清，存放在4冰箱，以防止溶血。5.5.2.4每份化验单都需要分类保存，所有化验单都需网上确认。5.5.2.5待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。5.5.3 结果5.5.3.1报告前做好三查四对。5.5.3.2阳性结果要手工复试。5.6临床意义： HBc-IgM是HBcAg相应抗体，也是HBV感染后血清中最早出现的HBV标志性抗体。HBc-IgM在乙肝急性期或慢性肝炎活动期出现。在HBV感染的“窗口期”，HBc-IgM常常是唯一可测出的HBV血清标志物。授权人质量负责人部门负责人操作人员姓名日期丙型肝炎病毒（HCV）抗体检测标准操作程序(SOP-303)1 目的：定性或半定量检测临床血清标本中的丙型肝炎病毒抗体。2 SOP-303变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。3 范围：适用于丙型肝炎的辅助诊断，疗效观察及输血前的筛查。4 溯源：全国临床检验操作规程（第二版）。5 操作程序： 本实验用“深圳月亮湾生物工程有限公司” 提供的试剂盒，采用ELISA原理来检测丙型肝炎抗体。5.1实验原理 本试剂盒系采用ELISA间接法检测血清或血浆中丙型肝炎病毒抗体。所用包被抗原为合成多肽抗原和基因工程抗原（含HCV病毒结构区核心抗原和非结构区抗原），以辣根过氧化物酶（HRP）标记抗人IgG为酶标记抗体，四甲基联苯胺（TMB）为底物，产生显色反应。5.2试剂盒组成 96人份5.2.1 预包被HCV板条 12孔8条5.2.2 标本稀释液 11ml1瓶5.2.3 阳性对照 1ml1瓶5.2.4 阴性对照 1ml1瓶5.2.5 酶结合物 11ml1瓶5.2.6 显色剂A 6ml1瓶5.2.7 显色剂B 6ml1瓶5.2.8 终止液 6ml1瓶5.2.9 浓缩洗涤液 40ml1瓶5.2.10 HCV抗体质控品（含量2ICU/ml）,由卫生部临床检验中心提供。5.3测定步骤： 采用意大利Alisei全自动免疫分析仪进行分析检测。仪器自动进行加样、稀释、洗板、比色、分析结果、打印报告。 仪器检测过程如下：5.3.1根据试剂盒说明书编排检测程序（包括样品用量、试剂用量、孵育时间、洗板次数、比色波长、结果判断标准等）。5.3.2输入工作表。5.3.3分离血清，将血清样品装入样品盘。5.3.4根据仪器要求的位置和用量装载各种试剂、质控及阴、阳性对照。5.3.5根据仪器要求装载酶标板5.3.6在一切准备充分之后，按动“start”，仪器自动进行加样、稀释、孵育、洗板、比色、判断结果、最终打印报告。5.4结果判断： 采用双波长，比色波长450nm，参考波长630nm，比色后仪器自动作出判断。 正向 Cut off=0.14+NC5.5注意事项：5.5.1试剂5.5.1.1从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37平衡30分钟后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。5.5.1.2试剂盘上的各种试剂、质控及阴、阳性对照需及时补充和定期更换。5.5.1.3做完后及时将试剂盘放入4冰箱保存。5.5.1.4不同批号的试剂不可混用，所用试剂必须在有效期内。5.5.2 标本5.5.2.1建议空腹抽血，采血时避免溶血。5.5.2.2注意将样品放置实验室固定样品区。5.5.2.3当天不能检测的样品，应编号，分离血清，存放在4冰箱，以防止溶血。5.5.2.4每份化验单都需要分类保存，所有化验单都需网上确认。5.5.2.5待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。5.5.3结果5.5.3.1报告前做好三查四对。5.5.3.2出现HCV阳性结果，采用另一厂家试剂盒复查，若仍为阳性做出报告，并及时报告疫情。5.5.3.3为确保实验结果的准确，阳性对照OD值与阴性对照的差值应大于或等于0.600。5.6临床意义： 抗HCV-IgG、IgM抗体均为非保护性抗体，急性期多为IgM型抗体，慢性期多为IgG型抗体，抗HCV-IgM型抗体的检测是判定急、慢性丙型肝炎的重要指标。恢复期患者多为IgG型抗体，且滴度较低。授权人质量负责人部门负责人操作人员姓名日期甲型肝炎病毒（HAV）IgM抗体标准操作程序(SOP-304)1.目的：定性检测临床血清标本中甲型肝炎病毒IgM型抗体。2.SOP-304变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。3.范围：适用于血清或血浆类标本，具有快速简便，特异性强，灵敏度高，重复性好，可分多次使用，用于甲型肝炎的早期诊断。4.溯源：全国临床检验操作规程（第二版）。5.操作程序：本实验采用“深圳月亮湾生物工程有限公司”提供的试剂盒，运用ELISA捕获法检测甲型肝炎IgM抗体。5.1实验原理：用抗人链抗体包被酶标板，用以捕获血清中IgM类抗体，然后用HAVAg特异性与IgM抗体结合，再加酶标抗HAV抗体，最后加底物显色，显色深浅与HAVIgM的含量成正比。5.2试剂盒组成5.2.1 抗-链包被干板条 412孔5.2.2 抗-HAVIgM阴性对照 1ml1瓶5.2.3 抗-HAVIgM阳性对照 1ml1瓶5.2.4 HAAg 2.6ml1瓶5.2.5 酶结合物 2.6ml1瓶5.2.6 浓缩洗涤液 20ml1瓶 （用蒸馏水1：20稀释）5.2.7 显色剂A 3ml1瓶5.2.8 显色剂B 3ml1瓶5.2.9 终止液 3ml1瓶5.3操作步骤5.3.1将微孔条固定在支架上，按顺序编号。5.3.2分别将待测标本，阴、阳性对照50l（1滴）加入相应的孔中，设空白对照孔（加50l洗涤液）。置3730分钟。5.3.3洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置2分钟，共三次，每次洗后均需扣干。5.3.4每孔加HAAg50l，酶结合物50l（空白对照除外），振荡混匀，置3730分钟。5.3.5洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置2分钟，共三次，每次洗后均需扣干。5.3.6显色：每孔加显色剂A液50l（1滴），再加显色剂B液50l（1滴），振荡混匀，置3715分钟。5.4结果判定： 酶标仪读数：每孔加终止液50l（1滴）在450nm波长读数，与阴性对照比较，P/N值2.1者判为阳性，2.1者为阴性，（当阴性对照孔OD值小于0.05时，按0.05计算）。 标本OD值 P/N比值= 阴性对照OD值5.5注意事项：5.5.1试剂：5.5.1.1从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37平衡30分钟后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。5.5.1.2使用前试剂应摇匀，并弃去1-2滴后垂直滴加。5.5.1.3封片不能重复使用，试剂盒应放在2-8环境中保存。5.5.1.4不同批号的试剂不可混用5.5.1.5孵育时，微孔板应漂浮于37水面上，以保证各孔的均一受热。5.5.1.6本试剂盒应视为传染性物质，并按传染病实验室检查规程处理。5.5.2 标本5.5.2.1建议空腹抽血，采血时避免溶血。5.5.2.2注意将样品放置实验室固定样品区。5.5.2.3当天不能检测的样品，应编号，分离血清，存放在4冰箱，以防止溶血。5.5.2.4每份化验单都需要分类保存，所有化验单都需网上确认。5.5.2.5待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。5.5.3结果5.5.3.1 报告前做好三查四对。5.5.3.2 阳性结果手工复查，并结合临床及时报告疫情。5.6 临床意义： 血清中HAVIgM在亚临床期即已出现，其滴度在感染后3个月持续在1：1000以上，已被公认为早期诊断甲型肝炎的依据。授权人质量负责人部门负责人操作人员姓名日期戊型肝炎病毒（HEV）IgG抗体标准操作程序(SOP-305)1 目的：定性检测临床血清标本中戊型肝炎病毒IgG抗体。2 SOP-305变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。3 范围：适用于血清或血浆类标本，用于戊型肝炎的辅助诊断。4. 溯源：全国临床检验操作规程（第二版）。5. 操作程序： 本实验采用：“上海科华生物工程股份有限公司”提供的试剂盒，运用ELISA原理来检测戊型肝炎病毒IgG抗体。5.1实验原理 采用合成多肽抗原包被反应板，加入待测标本，当待测标本中含有抗-HEV-IgG抗体时，该抗体即与合成多肽结合，再加入抗-人IgG-HRP与抗-HEV-IgG结合，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。5.2试剂盒组成5.2.1 微孔反应板 8孔125.2.2 酶结合物 15ml1瓶5.2.3 阳性对照 0.75ml1瓶5.2.4 阴性对照 0.75ml1瓶5.2.5 洗涤液（用前以蒸馏水做25倍稀释）80ml1瓶5.2.6 样品稀释液 20ml1瓶5.2.7 显色剂A 8.0ml1瓶5.2.8 显色剂B 8.0ml1瓶5.2.9 终止液 7.0ml1瓶5.2.10封片 3片5.2.11说明书 1 份5.3测定步骤：5.3.1每次实验均需设立空白对照2孔，阳性对照2孔、阴性对照2孔。5.3.2每孔加样品稀释液100微升（阳性对照孔、阴性对照孔除外），空白对照孔直接加入样品稀释液100毫升。5.3.3加待测标本，每孔10微升。阳性对照、阴性对照不需稀释，直接加入100微升于各相应孔中。振荡摇匀，封板，置37孵育30分钟。5.3.4手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次程序后拍干。5.3.5每孔加酶结合物100微升（或2滴），封板，置37孵育30分钟 。5.3.6手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次程序后拍干。5.3.7每孔加显色剂A液、B液各50微升（或1滴），充分混匀。封板。置37孵育10分钟。5.3.8每孔加入终止液50微升，混匀。5.3.9用酶标仪读数，波长450nm，先用空白对照孔校零，然后读取各孔OD值。5.4结果判断 Cutoff Value的计算 COV=阴性对照平均OD值+0.22 标本OD值Cutoff Value为阳性 标本OD值Cutoff Value为阴性 若阴性对照平均OD0.05，按实际计，若阴性对照平均OD0.05，按0.05计。5.5 注意事项：5.5.1试剂5.5.1.1从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应在室温平衡30分钟后方可使用，余者应及时封存于冰箱中，以备后用。在平衡试剂的同时，待测标本需置室温平衡30分钟后再进行测试。5.5.1.2使用前试剂应摇匀。5.5.1.3封片不能反复使用。5.5.1.4洗涤液用前需25倍稀释，若洗涤液出现结晶，可置37使之溶解。5.5.1.5不同批号试剂不可混用。5.5.1.6使用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。5.5.2 标本5.5.2.1建议空腹抽血，采血时避免溶血。5.5.2.2注意将样品放置实验室固定样品区。5.5.2.3当天不能检测的样品，应编号，分离血清，存放在4冰箱，以防止溶血。5.5.2.4每份化验单都需要分类保存，所有化验单都需网上确认。5.5.2.5待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。5.5.3结果5.5.3.1报告前做好三查四对。5.5.3.2阳性结果手工复查，并结合临床及时报告疫情。5.5.3.3在加入显色剂后10分钟内终止反应。5.5.3.4若实验结果阴、阳性对照有疑问，该实验视为无效，需重做。5.6 临床意义 HEV属杯状病毒科。所致戊型肝炎的临床症状和流行病学都与甲肝相似，其急性肝炎的死亡率高，孕妇可达20%，戊肝的血清学诊断为检测HEV抗体。所用抗原多为合成多肽或单克隆表达的融合蛋白。抗原序列多选基因组开放读码框ORF2和ORF3，确诊试验一般用蛋白质（免疫）印迹技术。授权人质量负责人部门负责人操作人员姓名日期戊型肝炎病毒（HEV）IgM抗体测定操作程序(SOP-306)1 目的：定性检测临床血清标本中戊型肝炎病毒IgM抗体。2 SOP-306变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。3 范围：适用于血清或血浆类标本，用于戊型肝炎的早期诊断。4. 溯源：全国临床检验操作规程（第二版）。5. 操作程序： 本实验采用“上海飞龙医用诊断用品有限公司”提供的试剂盒，运用ELISA的捕获法检测戊型肝炎IgM抗体。5.1实验原理 采用兔抗人-IgM链包被反应板，加入待测标本，再加入酶标记的HEV抗原（基因工程抗原），如待测标本中有抗-HEV-IgM抗体时，就能被兔抗人-IgM链捕获，并且与酶标记的HEV抗原结合成复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。5.2试剂盒组成： 96人份5.2.1 微孔反应板 1块5.2.2 抗-HEV-IgM阴性对照 1.0ml1瓶5.2.3 抗-HEV-IgM阳性对照 1.0ml1瓶5.2.4 酶标记抗原 6.2ml1瓶5.2.5 底物稀释液 7.0ml1瓶5.2.6 TMB底物 7.0ml1瓶5.2.7 洗涤液（蒸馏水25倍稀释后使用） 80ml1瓶5.2.8 终止液 7.0ml1瓶5.2.9封片 3张5.2.10说明书 1份5.3测定步骤5.3.1设阴性和阳性对照各2孔、每孔加入阴性、阳性对照各50微升，空白对照1孔，其余孔加入待测样品50微升，充分混匀，封板，置37环境中孵育30分钟。5.3.2手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次程序后拍干。5.3.3每孔（空白对照孔除外）加入酶标记抗原溶液50微升（或1滴），充分混匀，封板，置37环境中孵育30分钟。5.3.4手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次程序后拍干。5.3.5每孔加入底物稀释液TMB底物各50微升（或各1滴），充分混匀，封板，置37环境中孵育10分钟。5.3.6每孔加入终止液50微升，混匀。5.3.7用酶标仪读数，取波长450nm。5.4结果判定 Cutoff Value的计算 COV=0.1+阴性对照平均A值 若阴性对照A值小于0.05以0.05计算，若阴性对照A值大于0.05以实际A值计算。 样品A值COV为阳性，样品A值COV为阴性。5.5 注意事项5.5.1试剂5.5.1.1从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应在室温平衡30分钟后方可使用，余者应及时封存于冰箱中，以备后用。在平衡试剂的同时，待测标本需置室温平衡30分钟后再进行测试。5.5.1.2使用前试剂应摇匀。5.5.1.3封片不能反复使用。5.5.1.4不同批号试剂不可混用，所有试剂必须在有效期内。5.5.1.5使用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。5.5.1.6孵育时，微孔板应漂浮于37水面上，以保证各孔的均一受热。5.5.2 标本5.5.2.1建议空腹抽血，采血时避免溶血。5.5.2.2注意将样品放置实验室固定样品区。5.5.2.3当天不能检测的样品，应编号，分离血清，存放在4冰箱，以防止溶血。5.5.2.4每份化验单都需要分类保存，所有化验单都需网上确认。5.5.2.5待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。5.5.3结果5.5.3.1 报告前做好三查四对。5.5.3.2 阳性结果手工复查，并结合临床及时报告疫情。5.5.3.3 在加入显色剂后10分钟内终止反应。5.6 临床意义： HEVIgM为戊肝感染后产生的早期抗体，用于HEV感染的早期诊断。授权人质量负责人部门负责人操作人员姓名日期丁型肝炎病毒（HDV）抗原测定标准操作程序(SOP-307)1 目的：定性检测临床血清标本中丁型肝炎病毒抗原。2 SOP-307变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。3 范围：适用于血清或血浆类标本，用于丁型肝炎病毒（HDV）感染的早期诊断。4. 溯源：全国临床检验操作规程（第二版）。5. 操作程序： 本实验采用“深圳月亮湾生物工程有限公司”提供的试剂盒，运用ELISA原理检测丁型肝炎抗原。5.1 实验原理 采用ELISA夹心法原理，用抗-HDV包被反应板，加入待测标本，同时加入抗HDV-HRP，当标本中存在HDVAg时，该HDVAg与包被抗HDV结合，并与抗HDV-HRP结合形成抗HDV-HDVAg-抗HDV-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应，显色的深浅与HDVAg的含量成正比。5.2 试剂盒组成 48人份5.2.1 预包被干板条 12孔4条5.2.2 酶结合物 3ml1瓶5.2.3 阳性对照 0.5ml1瓶5.2.4 阴性对照 0.5ml1瓶5.2.5 脱壳剂 3ml1瓶5.2.6 浓缩洗涤液 20ml1瓶（用蒸馏水1：20稀释）5.2.7 显色剂A 3ml1瓶5.2.8 显色剂B 3ml1瓶5.2.9 终止液 3ml1瓶5.3 操作步骤5.3.1将微孔条固定于支架，按顺序编号。5.3.2分别加入待测血清（或血浆）和阴、阳性对照50l（1滴）于相应孔中，设空白对照孔（加50l洗涤液）。5.3.3除空白对照孔外、每孔加入脱壳剂50l（1滴）。5.3.4振荡均匀，置371小时。5.3.5洗涤：甩去孔内液体，扣干，用洗涤液注满各孔，静置2分钟，共三次，每次洗后均需扣干。5.3.6除空白对照孔外，每孔加入酶结合物50l（1滴）。置3720分钟。5.3.7洗涤：甩去孔内液体，扣干，用洗涤液注满各孔，静置2分钟，共三次，每次洗后均需扣干。5.3.8每孔加入显色剂A、B各50l（1滴），振荡混匀，置3715分钟。5.4 结果判断 酶标仪读数：每孔加入终止液50l（1滴）。振荡均匀，在450nm波长读数P/N值2.1者判为HDVAg阳性（+），2.1者判为阴性(-),(阴 性对照孔OD值小于0.05时以0.05计)。 标本OD值 P/N比值= 阴性对照OD值5.5 注意事项5.5.1试剂5.5.1.1试剂盒应于4存放。5.5.1.2微孔条须密封防潮，从冷藏环境中取出时，应在室温中平衡至潮气尽干后方可开封起用，余者及时放回铝膜带中用胶带封口。5.5.1.3滴加试剂前，轻摇滴瓶，使液体混匀，滴加时瓶身应保持垂直，先滴去1-2滴，以使滴量准确。5.5.1.4显色剂用前先平衡至室温。5.5.1.5样品加样头不能混用。5.5.1.6不同批号试剂不可混用，所有试剂必须在有效期内。5.5.2标本5.5.2.1建议空腹抽血，采血时避免溶血。5.5.2.2注意将样品放置实验室固定样品区。5.5.2.3当天不能检测的样品，应编号，分离血清，存放在4冰箱，以防止溶血。5.5.2.4每份化验单都需要分类保存，所有化验单都需网上确认。5.5.2.5待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。5.5.3结果5.5.3.1报告前必须三查四对。5.5.3.2阳性结果必须复试才能报告。5.5.3.3结果观察在规定时间内进行。5.6 临床意义： HDVAg在HDV感染早期出现于患者血循环中，可持续很长时间，是诊断HDV感染最常用的指标。授权人质量负责人部门负责人操作人员姓名日期丁型肝炎病毒（HDV）IgM型抗体测定操作程序(SOP-308)1.目的：定性检测临床血清标本中丁型肝炎病毒IgM抗体。2.SOP-308变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。3.范围：适用于血清或血浆类标本，用于丁型肝炎病毒（HDV）感染早期或持续感染的诊断。4.溯源：全国临床检验操作规程（第二版）。5.操作程序： 本实验用“深圳月亮湾生物工程有限公司” 提供的试剂盒，采用ELISA捕获法检测丁型肝炎IGM型核心抗体。5.1实验原理 用抗人链抗体包被酶标板,用以捕获血清中IgM类抗体,再加HDVAg与抗HDV-IgM特异性结合,而后与加入的HRP-抗-HDVAg结合,最后加底物显色,显色深浅与HDVIgM的含量成正比.5.2 试剂盒组成 48人份5.2.1预包被干板条 12孔4条5.2.2酶结合物 3ml1瓶5.2.3阳性对照 0.5ml1瓶5.2.4阴性对照 0.5ml1瓶5.2.5抗原试剂 3ml1瓶5.2.6浓缩洗涤液 20ml1瓶（用蒸馏水1：20稀释）5.2.7显色剂A 3ml1瓶5.2.8显色剂B 3ml1瓶5.2.9终止液 3ml1瓶5.3 操作步骤5.3.1将微孔条固定于支架，按顺序编号。5.3.2将待测血清或血浆用生理盐水1：1000稀释，然后分别加入稀释后的待测血清或血浆和阴、阳性对照50l（1滴）于相应孔中，设空白对照孔加50l洗涤液。5.3.3除空白对照孔外、每孔加入抗原试剂50l（1滴）。5.3.4振荡均匀，置3730分钟。5.3.5洗涤：甩去孔内液体，扣干，用洗涤液注满各孔，静置2分钟，共三次，每次洗后均需扣干。5.3.6除空白对照孔外，每孔加入酶结合物50l（1滴）。置3720分钟。5.3.7洗涤：甩去孔内液体，扣干，用洗涤液注满各孔，静置2分钟，共三次，每次洗后均需扣干。5.3.8每孔加入显色剂A、B各50l（1滴），振荡混匀，置3715分钟。5.4 结果判断 酶标仪读数：每孔加入终止液50l（1滴）。振荡均匀，在450nm波长读数P/N值2.1者判为抗HDV-IgM阳性（+），2.1者判为阴性(-),(阴性对照孔OD值小于0.05时以0.05计). 标本OD值 P/N比值= 阴性对照OD值5.5 注意事项5.5.1试剂5.5.1.1试剂盒应于4存放。5.5.1.2微孔条须密封防潮，从冷藏环境中取出时，应在室温中平衡至潮气尽干后方可开封起用，余者及时放回铝膜带中用胶带封口。5.5.1.3滴加试剂前，轻摇滴瓶，使液体混匀，滴加时瓶身应保持垂直，先滴去1-2滴，以使滴量准确。5.5.1.4显色剂用前先平衡至室温。5.5.1.5样品加样头不能混用。5.5.1.6不同批号试剂不可混用，所有试剂必须在有效期内。5.5.2 标本5.5.2.1建议空腹抽血，采血时避免溶血。5.5.2.2注意将样品放置实验室固定样品区。5.5.2.3当天不能检测的样品应编号，分离血清，存放在4冰箱，以防止溶血。5.5.2.4每份化验单都需要分类保存，所有化验单都需网上确认。5.5.2.5待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。5.5.3 结果5.5.3.1报告前必须三查四对。5.5.3.2阳性结果必须复试才能报告。5.5.3.3结果观察在规定时间内进行。5.6 临床意义 HDV是一种有缺陷的病毒，表面被HBV包膜蛋白包裹。HDV的致病性依赖于HBV，可与HBV重叠感染或共同感染。HDV感染与爆发型肝炎、黄疸肝炎及肝硬变密切相关。HDV感染的常用血清学检测法为测定HDV-IgG和HDV-IgM。前者阳性一般认为是既往感染，后者阳性一般认为是近期感染。授权人质量负责人部门负责人操作人员姓名日期人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体测定操作程序(SOP-309)1 目的：定性或半定量检测临床血清标本中的人类免疫缺陷病毒抗体。2 SOP-309变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。3 范围：适用于献血员筛选和临床检测。4. 溯源：全国临床检验操作规程（第二版）。5. 操作程序： 本实验采用“丽珠集团丽珠试剂厂”提供的试剂盒，运用ELISA直接法，体外定性检测人血清或血浆中抗HIV-1+2型IgG、IgM抗体。5.1 实验原理 在微孔条预包高纯度的HIV-1型和HIV-2型抗原，检测时若血样中含有HIV-1+2型抗体，与之形成特异性结合物，再加入HRP标记的高纯度的HIV-1型和HIV-2型抗原，用TMB底物显色，显色的深浅与HIV-1+2型抗体的含量成正比。5.2 试剂盒组成5.2.1 预包被微孔板条： 96孔5.2.2 阴性对照： 1瓶 1ml/瓶5.2.3 阳性对照： 1瓶 1ml/瓶5.2.4 酶标记物： 1瓶 6ml/瓶5.2.5 底物缓冲液： 1瓶 6ml/瓶5.2.6 底物液： 1瓶 6ml/瓶5.2.7 浓缩洗涤液（20X）： 1瓶 50ml/瓶5.2.8 终止液： 1瓶 6ml/瓶5.3 测定步骤： 采用意大利Alisei全自动免疫分析仪进行分析检测。仪器自动进行加样、稀释、洗板、比色、分析结果、打印报告。 仪器检测过程如下：5.3.1根据试剂盒说明书编排检测程序（包括样品用量、试剂用量、孵育时间、洗板次数、比色波长、结果判断标准等）。5.3.2输入工作表。5.3.3分离血清，将血清样品装入样品盘。5.3.4根据仪器要求的位置和用量装载各种试剂、质控及阴、阳性对照。5.3.5根据仪器要求装载酶标板。5.3.6在一切准备充分之后，按动“start”，仪器自动进行加样、稀释、孵育、洗板、比色、判断结果、最终打印报告。5.4 结果判断 采用双波长比色，比色波长450nm，参考波长630nm，比色后仪器自动作出判断。 正向Cutoff=0.15+NC。5.5 注意事项5.5.1试剂5.5.1.1从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本微孔反应条应置37平衡30分钟后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。5.5.1.2试剂盘上的各种试剂、质控及阴、阳性对照需及时补充和定期更换。5.5.1.3做完后及时将试剂盘放入4冰箱保存。5.5.1.4不同批号的试剂不可混用，所用试剂必须在有效期内。5.5.1.5本试剂的使用单位必须是当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室。5.5.1.6 HIV整个检测工作必须符合全国爱滋病检测管理规范和生物安全守则，严格防止交叉感染，操作时必须戴手套、穿工作服、严格健全和执行消毒隔离制度。5.5.1.7洗板机的时间设定每遍必须有60秒的浸泡时间。5.5.2 标本5.5.2.1建议空腹抽血，采血时避免溶血。5.5.2.2注意将样品放置实验室固定样品区。5.5.2.3当天不能检测的样品，应编号，分离血清，存放在4的专用冰箱，以防止溶血。5.5.2.4每份化验单都需要分类保存，所有化验单都需网上确认。5.5.2.5待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。5.5.2.6剩余样品及废弃物应经121高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。5.5.3 结果5.5.3.1 报告前做好三查四对。5.5.3.2初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试，按全国HIV检测管理规范的要求，须将血样或重新采血送HIV确认实验室做确认试验。5.5.3.3若阴性对照OD值、阳性对照OD值超出正常范围或其孔间之差大于30%，应重复试验。5.6 临床意义 抗HIV阳性，表明感染HIV病毒，可用于术前检查，献血员的筛查，产前检查等。授权人质量负责人部门负责人操作人员姓名日期可提取性核抗原（ENA）抗体测定标准操作程序(SOP-310)1.目的：定性检测血清中ENA抗体。2.SOP-310变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。3.范围：用于自身免疫性疾病的辅助诊断和疗效观察。如：Sharp综合征（混合性结缔组织病MCTD）、系统性红斑狼疮、干燥综合症（Sjoegrens syndrome）、进行性系统性硬化症、皮肌炎/多肌炎。4. 溯源：全国临床检验操作规程（第二版）。5. 操作程序： 本实验采用“欧蒙实验诊断有限公司”提供的试剂盒，采用免疫斑点法的原理检测临床血清标本中nRNP、Sm、SS-A、SS-B、ScL-70、Jo-1等抗体成份，用于自身免疫病的辅助诊断。5.1 实验原理：欧蒙斑点法检测试剂盒供抗nRNP、Sm、SS-A、SS-B、ScL-70和Jo-1 6种抗原的人IgG自身抗体的体外定性检测。试剂盒中的载片上每个反应区内固定了2条免疫印迹膜条。膜条上平行包被了经亲和层析纯化的抗原线。实验第一步，已稀释的病人标本与膜条温育。如果标本阳性，特异的IgG（酶结合物）进行第二步温育，然后加入酶底物以呈现颜色反应。5.2 试剂盒组成： 包被抗原反应膜条：10张载片，每张载片上有5个反应区，直接使用。阳性对照血清（人IgG）：10.2ml,直接使用。 阴性对照血清（人IgG）：10.2ml,直接使用。 酶结合物：碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG：10.5ml，用时10倍稀释。 标本缓冲液：160ml，直接使用。 清洗缓冲液：2100ml，用时10倍稀释。 底物溶液：14ml，直接使用。底物：NBT/BCIP(四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯定-磷酸盐)。5.3 测定步骤：5.3.1 血清或血浆标本用标本缓冲液1:101稀释（如10l血清+1ml样本稀释液）。5.3.2 加样：将加样板放在泡沫塑料板上，加50ul已稀释血清于加样板的每个反应区。避免产生气泡。在开始温育前加完所有标本。5.3.3温育：将载片盖在加样板的凹槽里，反应开始。确保每个标本均与载片的膜条接触，而且标本间没有互相接触。在300rpm摇床上室温温育30分钟。5.3.4清洗：将清洗缓冲液盛于烧杯中，流水冲洗载片后放入小杯的玻璃框里浸洗15分钟。5.3