《基因工程3受体》PPT课件.ppt

1 大肠杆菌受体系统 基因复制原核细胞2 芽孢杆菌受体系统扩增场所受体系统3 其他细菌受体系统 外源基因表达场所1 酵母菌受体系统真核细胞2 哺乳动物细胞受体系统受体系统3 植物细胞受体系统 受体 宿主 Host 能支持质粒 病毒进行复制的生物体 受体系统 一基因工程的基本元件 受体 一 E coli受体系统 大肠埃希氏菌 E coli 通常称为大肠杆菌 是Escherich在1885年发现的 1 E coli受体系统的特点 遗传背景清楚 繁殖快 含有质粒 3 E coli受体系统的缺点 表达产物存在于细胞内安全性欠佳缺乏基因产物表达后加工机制 基因型 F endA1glnV44thi 1recA1relA1gyrA96deoRnupG 80dlacZ M15 lacZYA argF U169 hsdR17 rK 特点 一种常用于质粒克隆的菌株 其 80dlacZ M15基因的表达产物与pUC载体编码的 半乳糖苷酶氨基端实现 互补 可用于蓝白斑筛选 用途 分子克隆 质粒提取 DH5 菌株 基因型 endA1glnV44thi 1relA1gyrA96recA1mcrB lac proAB e14 F traD36proAB lacIqlacZ M15 hsdR17 rK mK 特点 部分抗性缺陷 适合重复基因表达 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选 用途 分子克隆 质粒提取 JM109菌株 基因型 F ompTgaldcmlonhsdSB rB mB DE3 lacIlacUV5 T7gene1ind1sam7nin5 特点 该菌株用于以T7RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主 T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于 噬菌体DE3区的lacUV5启动子 该区整合于BL21的染色体上 该菌适合于非毒性蛋白的表达 用途 蛋白质表达 BL21 DE3 菌株 ompT mutationinoutermembraneproteinproteaseVII reducingproteolysisofexpressedproteins 基因型 F ompTgaldcmlonhsdSB rB mB DE3 pLysS cmR 特点 该菌株带有pLysS 具有氯霉素抗性 此质粒还有表达T7溶菌酶的基因 T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平 但不干扰IPTG诱导的表达 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达 用途 蛋白质表达 BL21 DE3 ply菌株 四 酵母菌受体系统 食品级真核单细胞微生物适合于真核基因表达基因产物外分泌遗传背景较清楚具基因表达后加工机制 1 酵母菌受体系统的特点 2 常用酵母菌受体系统 酿酒酵母甲醇酵母 酿酒酵母 酿酒酵母 Saccharomycesserevisiae 又名面包酵母 它是单细胞真核微生物 一直以来酿酒酵母被称为真核生物中的 大肠杆菌 1 酿酒酵母表达系统表达外源基因的优点 工艺简单 可快速大规模生产 它不会产生毒素 安全可靠 适合于表达真核生物基因 外源基因可在酿酒酵母中分泌表达酿酒酵母的遗传背景