构象受限的主链环化的促生长素抑制素类似物.doc

构象受限的主链环化的促生长素抑制素类似物摘要本发明公开了新的肽类似物。新的肽是构象受限的主链环化的促生长素抑制素类似物。也公开了合成这些促生长素抑制素类似物及制备这些促生长素抑制素类似物库的方法。此外,还公开了含有该促生长素抑制素类似物的药物组合物,以及应用这样的组合物治疗内分泌失调,肿瘤和代谢失调的方法。权利要求(18)1具有通式()的主链环化的促生长素抑制素类似物：未提供图片。查看 PDF式()其中：a-c各自独立地代表1-8或0的整数；(AA)代表氨基酸残基，其中每条链中的氨基酸残基可以相同或不同；Q代表H或酰基；E代表羟基，羧基保护基或氨基，或者末端羧基可以还原为CH2-OH；R1和R2各自代表任选与特定保护基团键合的氨基酸侧链；线代表下式桥基：-(CH2)x-M-(CH2)v-；M选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物；x和y各自独立地代表1-10的整数。2具有通式(a)的权利要求1的主链环化的促生长素抑制素类似物：未提供图片。查看 PDF式(a)其中m和n是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R5不存在或者是Gly,(D)-或(L)-Ala,Phe,Nal和-Asp(Ind)；R6和R11独立地是Gly或(D)-或(L)-Phe；R7是Phe或Tyr；R10不存在或者是Gly,Abu,Thr或Val；R12不存在或者是Val,Thr或Nal，和Y2选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。3具有通式(b)的权利要求2的主链环化的促生长素抑制素类似物：未提供图片。查看 PDF式(b)其中m和n是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R6和R11独立地是Gly或(D)-或(L)-Phe；R7是Phe或Tyr；R10不存在或者是Gly,Abu,Thr或Val；和Y2选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。4具有下面结构的权利要求3的主链环化的促生长素抑制素类似物环NPhe-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-NPhe-Thr-X其中X代表羧基末端酸，酰胺，酯或醇。5具有下面结构的权利要求4的主链环化的促生长素抑制素类似物未提供图片。查看 PDF其中X代表羧基末端酸，酰胺，酯或醇。6具有下面结构的权利要求3的主链环化的促生长素抑制素类似物环NPhe-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-NPhe-Val-X其中X代表羧基末端酸，酰胺，酯或醇。7具有下面结构的权利要求6的主链环化的促生长素抑制素类似物未提供图片。查看 PDF其中X代表羧基末端酸，酰胺，酯或醇。8具有通式()的权利要求1的主链环化的促生长素抑制素类似物：式未提供图片。查看 PDF其中i和j独立地是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R5是(D)-Phe或(L)-Phe,Ala或Lys；R6不存在或者是Phe；R7是Tyr或Phe；R10不存在或者是Thr,Val,Ser或Abu；R11是Phe,Gly或Ala；R12是Trp,Thr,Val,2-Nal或(D)-2-Nal；和Y1选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。9具有通式()的权利要求1的主链环化的促生长素抑制素类似物：未提供图片。查看 PDF式其中i和j独立地是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R5是Phe,(L)2-Nal或(D)-2-Nal；R6是Phe,Gly或Ala；R7是(D)Phe,pCl(D)Phe,pNH2Phe或(D)Tyr；R10是(D)Thr,(D)Val,(D)Ala,(D)Leu或(D)Glu；R11是Phe,Gly或Ala；R12不存在或者是Thr或Val；和Y1选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。10具有通式()的权利要求1的主链环化的促生长素抑制素类似物：未提供图片。查看 PDF式其中i和j独立地是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R5不存在或者是(D)Phe或2-Nal；R6是Phe,Gly或Ala；R7是(D)Phe,pCl(D)Phe,pNH2Phe或(D)Tyr；R8是(D)或(L)Trp；R10是(D)Thr,(D)Val,(D)Ala,(D)Leu或(D)Glu；R11是Phe，Gly或Ala；R12是Thr,Val,Ala,-Ala,(L)2-萘基丙氨酸或(D)2-萘基丙氨酸；和Y1选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。11具有通式()的权利要求1的主链环化的促生长素抑制素类似物：未提供图片。查看 PDF式其中i和j独立地是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R1是Ala或(D)-2-Nal；R3是Phe,Gly,Ala或Lys；R4是Lys或Arg；R5是(L)Asn或(D)Asn；R7是Phe,Gly,Ala或Lys；和Y1选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。12药物组合物，含有权利要求1-11任一项的促生长素抑制素类似物和制药可接受载体或稀释剂。13权利要求12的药物组合物，其中促生长素抑制素类似物是环NPhe-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-NPhe-Thr-X其中X代表羧基末端酸，酰胺，酯或醇。14单位剂量形式的权利要求13的药物组合物。15权利要求12的药物组合物，其中促生长素抑制素类似物是环NPhe-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-NPhe-Val-X其中X代表羧基末端酸，酰胺，酯或醇。16单位剂量形式的权利要求15的药物组合物。17治疗内分泌失调，肿瘤或代谢失调的方法，包括对需要治疗的个体施用治疗有效量的权利要求1-11任一项的促生长素抑制素类似物。18权利要求1-11任一项的促生长素抑制素类似物在制备治疗内分泌失调，肿瘤或代谢失调的药物中的用途。说明构象受限的主链环化的促生长素抑制素类似物发明领域本发明涉及通过新的键环化的构象受限的N主链环化的促生长素抑制素类似物，涉及这些主链环化的肽类似物的制备方法，涉及应用这些肽类似物的方法，以及涉及含有该肽类似物的药物组合物。发明背景促生长素抑制素类似物促生长素抑制素是在中枢神经系统和外周组织中发现的环十四肽。其最早是从哺乳动物下丘脑分离的，并且鉴定为生长激素从垂体前叶分泌的重要的抑制剂。其多生物活性包括对从胰腺分泌胰高血糖素和胰岛素的抑制作用，对大多数内脏激素的调节作用，以及对贯穿中枢神经系统的运动活性和认识过程所涉及的其它神经递质的释放的调节作用(参见综述Lamberts，内分泌研究(Endocrine Rev.,)9:427,1988)。另外，促生长素抑制素及其类似物是治疗各类型肿瘤的潜在的有用的抗增殖剂。天然的促生长素抑制素(也称为促生长素释放抑制因子，SRIF)具有下面的结构式：H-Ala1-Gly2-Cys3-Lys4-Asn5-Phe6-Phe7-Trp8-Lys9-Thr10-Phe11-Thr12-Ser13-Cys14-OH其最早由Guillemin及其同事分离到(Bruzeau等，科学，179:78.1973)。其通过与受体家族的相互作用而显示其作用。最近已经鉴定和克隆了五种受体亚类，称之为SSTR1-5。促生长素抑制素以其天然的形式作为治疗剂具有有限的用途，因为其具有两种所不期望的性质：不好的生物利用率和短的作用持续时间。为此原因，在过去的二十年间已经进行了很大努力来发现有关对生长激素，胰岛素或胰高糖素抑制作用的药效，生物稳定性，作用持续时间或选择性具有优越性的促生长素抑制素类似物。结构-活性相关研究，光谱技术，例如圆二色性和核磁共振，以及分子模型研究出以下结论：天然促生长素抑制素的环部分的构象很有可能是反向平行的-片层；Phe6和Phe11通过两个芳香环之间的疏水性相互作用而在稳定药效团构象中起重要作用；反向平行的-片层中-转角周围的4个氨基酸Phe7-Trp9-Lys9-Thr11对于药效团是基本的；对于促生长素抑制素受体亚型2至5的相互作用(D)，Trp8优于(L)Trp8。然而，含有通过二硫桥连接的该4个氨基酸的六肽促生长素抑制素类似物在体外和体内几乎是灭活的：未提供图片。查看 PDF尽管其具有置换天然促生长素抑制素中Phe6-Phe11疏水性相互作用的共价二硫桥的优点。为了提高该六肽促生长素抑制素类似物的活性进行了4方面主要研究。(1)通过促进顺式-酰胺键的环化作用，或者通过对分子进行第二环化作用得到二环类似物，来置换二硫化物桥。两种情况下，得到的类似物具有减小数值的自由度构象度。(2)用其它天然或非天然氨基酸置换Phe7-(D)Trp8-Lys9-Thr10序列中原残基，例如用Thr7置换Phe7和用Val10置换Thr10。(3)插入另外的来自天然促生长素抑制素的官能基团，注意这些新的元素要对与受体的相互作用起作用。(4)删除4个氨基酸Phe7-(D)Trp8-Lys9-Thr10中的一个，假设该类似物会更有选择性。促生长素抑制素类似物，MK-678：环(N-Me-Ala6-Tyr7-(D)Trp8-Lys9-Val10-Phe)是用上述头三项研究设计的强有力的促生长素抑制素类似物的例子(Veber等，生活科学(Life Science,)34:371,1984)。在该六肽类似物中，顺式-酰胺键位于N-Me-Ala和Phe11之间，Tyr7和Val10分别置换Phe7和Tyr10，并且从天然促生长素抑制素结合Phe11。另一组促生长素抑制素类似物(美国专利4310518和4235886)包括Octreotide：未提供图片。查看 PDF其是迄今可购得的唯一许可的促生长素抑制素类似物。其是用上述第三项研究开发出来的。在这里，假设(D)Phe5和还原的C-末端Tyr12-CH2OH分别占据天然Phe6和Tyr12的构象空间的一部分。化合物TT-232：未提供图片。查看 PDF与Octreotide密切相关，并且是完成上述第四项研究的例子。缺失Tyr10可能是其关于抗肿瘤活性中高功能选择性的原因。这些高效力促生长素抑制素类似物的例子提示在位置6和11的苯丙氨酸不只是在稳定药效团构象中起重要作用，而且还在与受体的相互作用中起功能作用。还留有一个问题就是一个苯丙氨酸(或Phe6或Phe11)对于与受体的相互作用是否是足够的或者两者都是需要的。现在已经知道，促生长素抑制素受体构成五种不同受体亚型族(Bell和Reisine，神经科学动态(Trends Neurosci.),16,34038,1993)，其可以根据其组织特异性和/或生物活性来区分。本领域已知的促生长素抑制素类似物可能不能提供足够的选择性或受体亚型选择性，特别是作为抗肿瘤剂(Reubi和Laissue,TIPS,16,110-115,1995)。与转移类癌瘤肿瘤相关的症状(发烧和腹泻)和与分泌血管作用肠肽(VIP)的腺癌相关的症状(水样腹泻)用促生长素抑制素类似物治疗。也已经证明用促生长素抑制素治疗严重的肠胃出血。促生长素抑制素由于其抗分泌活性也可以用于其它分泌激素肿瘤(例如胰岛细胞肿瘤和肢端肥大症)和依赖激素的肿瘤(例如软骨肉瘤和骨肉瘤)的缓和治疗。肽模拟物作为有机化学和分子生物学主要研究的结果，现在很多生物活性肽可以以对于药物和临床应用足够的量制备。因此在最近几年，对于处理和治疗涉及肽的病状已经建立起新的方法。但是，由于下列原因，肽作为药物使用是有限的：a)其对于在胃肠道和血清中的蛋白酶解的低的代谢稳定性；b)其口服吞下后不好的吸收作用，特别是由于其相对高的分子量或者缺少特异的运送系统，或者两者兼而有之；c)其通过肝和肾的快的排泄作用；和d)其在非靶物器官系统中的不期望的副作用，因为肽受体可以广泛分布于生物中。此外，除少数例外外，小至中等大小(少于30个氨基酸)的天然肽在稀释的水溶液中在多构象时在可以导致受体选择性缺乏，代谢不稳定性和对测定生物活性构象努力的阻碍的动态平衡方面显示出不规则性。如果肽本身具有生物活性构象，即受体结合构象，则预期有提高的对受体的亲和性，因为结合熵的减小比结合揉性肽更小。因此其对于努力和开发有序的，均匀的，且生物活性的肽是重要的。最近几年，已经进行了大量研究来开发比其原型天然肽具有更好的药物性能的肽模拟物或肽类似物。药物性能已经是最优化的天然肽本身一般作为开发这些肽模拟物的前导。但是，开发这些药剂的主要问题在于测定生物活性肽的活性区。例如，常常只有少数氨基酸(通常4-8个)负责受体对肽配体的识别。一旦测定了该生物活性位点，则可以将用于开发肽模拟物的前导结构最优化，例如，通过结构活性关系研究。这里所使用的“肽模拟物”是作为受体配体的化合物，其可以在受体水平上模拟(激动剂)或阻断(拮抗剂)肽的生物作用。应该考虑下面的因素来完成最好的可能的激动剂肽模拟物：a)代谢稳定性，b)好的生物利用率，c)高受体亲和性和受体选择性，和d)最小的副作用。最近已经研究出开发尽可能近地模拟内源肽的受体结合构象的受限肽模拟物的一般性可应用和成功的方法(Rizo和Gierasch，生物化学年度评述(Ann.Rev.Biochem.),61:387,1992)。对这些类型类似物的研究表明其具有提高的对蛋白酶的抗性，即代谢稳定性的提高，以及提高的选择性，从而更少的副作用(Veber和Friedinger，神经科学动态，p.392，1985)。一旦制备出具有稳固构象的这些肽模拟物化合物，则通过研究结构-活性关系选择最有活性的结构。这样的构象受限物可包括结构的局部修饰或整体构象受限物(有关综述参见Giannis和Kolter,Angeu.Chem.Int.Ed.Engl.32:1244,1993)。构象受限肽类似物肽中两个相邻氨基酸之间成桥导致局部构象修饰，与正常二肽相比，其揉性(flexibility)受限。生成这样的桥的一些可能性包括插入内酰胺和哌嗪酮。-内酰胺和-内酰胺在某种程度上被设计成“反转模拟”；在一些情况下，将这样的结构插入到肽中，产生生物活性化合物。通过环化来限制肽链的揉性，肽构象中的整体受限是可能的(Hruby等，生物化学杂志(Biochem.J.).268:249,1990)。不仅仅是生物活性肽的环化作用改善其代谢稳定性和受体选择性，环化作用还对增强构象均匀性的受限施加影响，而有利于构象分析。环化的一般模式与自然存在的环肽所发现的相同。这包括侧链与侧链的环化作用或者支链与终端基团的环化作用。为此目的，受体识别中所没有涉及的氨基酸侧链相互连接或者与肽主链连接。另一种常见的环化作用是终端与终端的环化作用。这些环化作用经典模式的主要限制是他们为了实现环化而需要氨基酸侧链的取代作用。另一种关于肽构象受限的概念性探讨是由Gilon等介绍的(生物聚合物(Bio-polymer)31:745,1991)，其提议肽主链与主链环化。该策略理论上的优点包括通过肽主链的碳或氮影响环化而不干扰对与给定肽的特异受体的相互作用是关键的侧链的能力。尽管该概念设想是应用于所有感兴趣的线性肽，但是，事实是建议的方案中的限制因素是必须用来置换通过桥基连接的氨基酸的合适的结构单元的可用性。实施主链环化该概念的实际的还原作用被不能设计任何制备除甘氨酸以外的氨基酸结构单元的实际方法所阻碍(Gilon等有机化学杂志(J.Org.Chem),587:5687,1992)。在Gilon,EPO申请No.564739A2；和有机化学杂志(J.Org.Chem)，57:5687,1992中，描述了两种合成结构单元的基础方法。第一种用二胺与溴酸反应开始。选择性保护胺，并且进一步修饰保护基团，得到适合Boc化学肽合成的结构单元。第二种方法从选择性保护二胺，并且产物与氯乙酸反应开始，得到适合Fmoc肽合成的保护的甘氨酸衍生物。应用主链环化肽类似物概念的其它模式公开于WO95/33765，其也提供了合成除甘氨酸以外的结构单元的新的方法。WO95/33765公开的肽类似物组是不同的促生长素抑制素类似物。该申请中公开的类似物组中没有一个表明对结合受体亚型有独特的贡献或意料不到的好处。主链环化肽类似物库如上所述，线性肽作为有效力的药物具有一些严重的不足，如其在体内的众所周知的不稳定性，经常缺乏结合其受体的高亲和性，常常缺乏对一种受体的选择性，并且通常具有不好的口服生物利用率，如此之多。为了克服这些问题，也可以应用与合成的肽库相关研究出的方法来产生环肽，新的生物聚合物，还有新的支化的低聚物化合物的集合(Zuckermann的综述，结构生物学的最新观点(Current Opinion in Structural Biology)3,580-584,1993)。环肽库的产生除了所有上述考虑外，要求环化反应要以高产率进行，并且要有最少的附加操作。令人遗憾的是，经典的环化反应从期望的产率来考虑是高度序列依赖性的，使得肽混合物的不均匀环化是不可靠的。直接在固体载体上的肽环化的最新研究改良了合成方法，甚至以已知的环化方案为基础使环化反应自动完成。过去，环化作用一般在溶液中在高度稀释条件下进行。聚合物作载体的环化作用即避免潜在的副作用，例如低聚合作用，又有利于产物的纯化。例如，在树脂上的环化方法最近已经被用来制备带有两个侧链之间硫醚，二硫化物，或内酰胺，氨基末端和侧链之间的内酰胺，和氨基和羧基末端之间的内酰胺生成的桥的环肽(Zuckermann的综述，结构生物学的最新观点(Current Opinion inStructural Biology)3，上文)。组合库中树脂结合环肽和游离环肽的应用公开于WO92/00091。但是，这些环肽不包含任何构象受限元素，而且实现环化的情况下，这些肽仍然选定一定数目构象，仍然有线性肽的相同的缺点。WO95/01800公开的环半无规肽库全部是含有一个或几个无规氨基酸和固定相邻氨基酸残基的-反转角的氨基酸残基例如脯氨酸形式的构象受限元素的环五肽和六肽库。这项研究的发明者强调了这些构象受限元素的优点。但是，通过向肽序列插入特定的氨基酸残基而包含这样的元素对受体识别或其它生物活性所必需的那些残基有不利的影响。此外，在该说明书中(WO95/01800)，环化反应只是另一种偶联反应，其中线性链肽的末端氨基与该肽的末端羧基偶联。发明概述根据本发明，制备出新的肽模拟化合物，其特征在于插入与-氨基酸的氮连接的带有桥基的新的结构单元。该项研究最引人注目的优点是：1)该方法成就肽序列的环化作用而不影向肽的任何侧链，从而减少了损失生物识别和功能所必需的功能基的机会。2)该方法通过使变更桥长度，取向，和键的类型(例如酰胺键，二硫键，硫醚键，硫酯键等)和环中键的位置使优化肽构象。3)当应用于已知活性线性肽的环化作用时，可以以这样方式设计桥以将肽活性区和其相应受体的相互作用最小。这减少了环化臂干扰识别和功能的机会，并且也产生了适合连接标记物的位点，所述标记物例如放射性示踪剂，细胞毒性药物，光捕获物质，或者任何其它期望的标记物。本发明所公开的最新产生的库为了发现完成其作为激动剂或拮抗剂的作用的最适宜的肽主链构象而改变构象及揉性(受限)水平。这通过变化桥头的位置(即要环化的残基线性序列的位置)，以及改变这些单元之间桥的长度，取向和键型来实现。本发明另一个目的是提供主链环化的促生长素抑制素类似物，包括含有与桥基连接的肽主链的一个氮原子的肽序列，如下所述。在本发明中，一对或几对结构单元相互连接，形成环结构。因此，根据本发明的一个方面，提供具有下面通式()的主链环化的促生长素抑制素类似物：未提供图片。查看 PDF其中：a-c各自独立地代表1-8或0的整数；(AA)代表氨基酸残基，其中每条链中的氨基酸残基可以相同或不同；Q代表H或酰基；E代表羟基，羧基保护基或氨基，或者末端羧基可以还原为CH2-OH；R1和R2各自代表任选与特定保护基团键合的氨基酸侧链；线代表下式桥基：()-X-M-Y-W-Z-；或()-X-M-Z-，其中：M和W独立地选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物；X,Y和Z各自独立地选自亚烷基，取代的亚烷基，亚芳基，同型-或杂-环烯和取代的环烯。在优选实施方案中，式()末端羧基被羧基末端酰胺置换或者被还原为CH2OH基团。本发明另一个实施方案包括通式()N-主链与侧链环化的促生长素抑制素类似物：未提供图片。查看 PDF式()其中：d-f各自独立地代表1-8或0的整数；(AA)代表氨基酸残基，其中每条链中的氨基酸残基可以相同或不同；Q代表H或酰基；E代表羟基，羧基保护基或氨基，或者末端羧基可以还原为CH2-OH；R1代表任选与特定保护基团键合的氨基酸侧链；线代表下式桥基：()-X-M-Y-W-Z-；或()-X-M-Z-，其中：M和W独立地选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物；X,Y和Z各自独立地选自亚烷基，取代的亚烷基，亚芳基，同型-或杂-环烯和取代的环烯。本发明优选实施方案包括式或主链环化的促生长素抑制素类似物，其中线代表式-(CH2)x-M-(CH2)v-桥基；M选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物；x和y各自独立地代表1-10的整数。此外优选的是式或主链环化的促生长素抑制素类似物，其中R1和R2不是氢，例如CH3,(CH3)2CH-,(CH3)2CHCH2-,CH3CH2CH(CH3)-,CH3S(CH2)2-,HOCH2-,CH3CH(OH),HSCH2-,NH2C(=O)CH2-,NH2C(=O)(CH2)2-,NH2(CH2)3-,HOC(=O)CH2-,HOC(=O)(CH2)2-,NH2(CH2)4-,C(NH2)2NH(CH2)3-,HO-苯基-CH2-，苄基，甲基吲哚和甲基咪唑。本发明另一个优选方面是涉及产生位置6和11之间连接，留有未连接苯丙氨酸侧链的新的促生长素抑制素类似物的主链环化作用。该构象稳定作用比天然促生长素抑制素中Phe6,Phe11疏水性相互作用稳定得多，并且对于还原-氧化反应比Cys-Cys二硫桥更稳定。换句话说，第一次实现了稳定的共价键桥，同时保留了原Phe6和Phe11之一或两者。此外，主链环化作用还可以用来固定-转角，不只是在位置6和11，而且还在Phe7-(D)Trp8-Lys9-Thr10的活性反应中，得到具有优选构象的单环类似物或者非常刚性的二环类似物。在这里，药物活性氨基酸的侧链保持不连接，并且唯一的变化是在限制的构象空间。如这里和下面的权利要求书中所使用的，更优选的主链环化的肽类似物中，氨基酸后面的上脚注指其在天然促生长素抑制素中的位置数。更优选的主链环化的促生长素抑制素类似物是式(a)：未提供图片。查看 PDF式(a)最优选的类似物具有式(b)：未提供图片。查看 PDF式(b)其中m和n是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R5不存在或者是Gly,(D)-或(L)-Ala,(D)-或(L)-Phe,Nal和-Asp(Ind)；R6和R11独立地是Gly或(D)-或(L)-Phe；R7是Phe或Tyr；R10不存在或者是Gly,Abu,Thr或Val；R12不存在或者是Val,Thr或Nal，和Y2选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。在这些单环促生长素抑制素类似物中，主链环化取代了Cys6-Cys11二硫桥，留下和在天然促生长素抑制素中一样的苯丙氨酸侧链。还更优选的是其中Phe7被Tyr7置换和Thr10被Val10置换的类似物。除了在位置6和11之外在活性区中的位置中固定分子的另一种优选的单环类似物是式(a和b)和(a-c)：未提供图片。查看 PDF式(a)未提供图片。查看 PDF式(b)未提供图片。查看 PDF式(a)未提供图片。查看 PDF式(b)未提供图片。查看 PDF式(c)其中i和j独立地是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R5不存在或者是(D)-或(L)-Phe,Nal和-Asp(Ind)；R6是(D)-或(L)-Phe；R10不存在或者是Gly,Abu，或Thr；R11是(D)-或(L)-Phe；R12不存在或者是Thr或Nal，和Y1选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。还有其它优选的类似物如在式中在位置6和11加入主链环化，与如式和中的主链环化一起，得到刚性二环类似物。其它更优选的二环类似物与式-的不同在于形成二硫键的半胱氨酸取代了位置6和11的氨基酸，在式(a和b)和(a和b)中只留下一个主链环化：未提供图片。查看 PDF式(a)未提供图片。查看 PDF式(b)未提供图片。查看 PDF式(a)，和未提供图片。查看 PDF式(b)其中i和j独立地是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R5不存在或者是(D)-或(L)-Phe,Nal和-Asp(Ind)；R6和R11独立地是Gly或Phe；R10不存在或者是Gly,Abu，或Thr；R12不存在或者是Thr或Nal；和Y1选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。本发明最优选的实施方案是：未提供图片。查看 PDF(即，环NPhe-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-NPhe-Thr-X：记为PTR 3046)未提供图片。查看 PDF(即，环NPhe-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-NPhe-Val-X：记为PTR 3040)其中X代表羧基末端酸，酰胺，酯或醇。这两种类似物显示出由于其对特定的促生长素抑制素受体亚型的选择性而具有出人意料的有用的性能。更优选的单环促生长素抑制素类似物也可以制备成活性类似物库，其特别用于筛选最适宜的构象体。根据本发明的还更优选的促生长素抑制素类似物包括式至的组成：未提供图片。查看 PDF式其中i和j独立地是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R5是(D)-Phe或2-Nal；R6是Phe,Gly或Ala；R7是Tyr或pClPhe；R10是Thr,Ser或Abu；R11是Phe,Gly或Ala；R12是Thr Val,2-Nal或(D)-2-Nal；和Y1选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。式未提供图片。查看 PDF其中i和j独立地是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R5是(D)-Phe或(L)-Phe,Ala或Lys；R6不存在或者是Phe；R7是Tyr或Phe；R10不存在或者是Thr,Val,Ser或Abu；R11是Phe,Gly或Ala；R12是Trp,Thr,Val,2-Nal或(D)-2-Nal；和Y1选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。式未提供图片。查看 PDF其中i和j独立地是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R5是Phe,(L)2-Nal或(D)-2-Nal；R6是Phe,Gly或Ala；R7是(D)Phe,pCl(D)Phe,pNH2Phe或(D)Tyr；R10是(D)Thr,(D)Val(D)Ala,(D)Leu或(D)Glu；R11是Phe,Gly或Ala；R12不存在或者是Thr或Val；和Y1选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。式未提供图片。查看 PDF其中i和j独立地是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R5不存在或者是(D)Phe或2-Nal；R6是Phe,Gly或Ala；R7是(D)Phe,pCl(D)Phe,pNH2Phe或(D)Tyr；R8是(D)或(L)Trp；R10是(D)Thr,(D)Val,(D)Ala,(D)Leu或(D)Glu；R11是Phe,Gly或Ala；R12是Thr,Val,Ala,-Ala,(L)2-Nal或(D)2-Nal；和Y1选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。式未提供图片。查看 PDF其中i和j独立地是1-5；X代表羧基末端酰胺或醇；R1是Ala或(D)-2-Nal；R3是Phe,Gly,Ala或Lys；R4是Lys或Arg；R5是(L)Asn或(D)Asn；R7是Phe,Gly,Ala或Lys；和Y1选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物。本发明另一方面是制备通式()环肽的方法：未提供图片。查看 PDF式()其中：a-c各自独立地代表1-8或0的整数；(AA)代表氨基酸残基，其中每条链中的氨基酸残基可以相同或不同；Q代表H或酰基；E代表羟基，羧基保护基或氨基，或者末端羧基可以还原为CH2-OH；R1至R4各自代表任选与特定保护基团键合的氨基酸侧链；线代表下式桥基：()-X-M-Y-W-Z-；或()-X-M-Z-，其中：M和W独立地选自酰胺，硫醚，硫酯和二硫化物；X,Y和Z各自独立地选自亚烷基，取代的亚烷基，亚芳基，同型-或杂-环烯和取代的环烯。该方法包括插入至少一个式()氨基酸的N-功能化衍生物步骤：未提供图片。查看 PDF式()其中X是选自亚烷基，取代的亚烷基，亚芳基，环烯和取代的环烯的间隔基团；R1是任选与特定保护基团键合的氨基酸侧链；B是选自烷基氧基，取代的烷基氧基或芳基羰基的保护基团；和G是选自胺，硫醇，醇，羧酸和酯，醛，醇和烷基卤化物的官能团；和A是G的特定保护基团；进入肽序列并且顺序地将官能团与所述肽序列中氨基酸的侧链之一或者与另一个-官能化氨基酸衍生物环化。优选的结构单元是共-官能化氨基酸衍生物，其中X是亚烷基；G是硫醇基团，胺基或羧基；R是苯基，甲基或异丁基；前提是当G是胺基时，R不是H。另外优选的是-官能化氨基酸衍生物，其中R用特定保护基团保护。更优选的是式()-官能化氨基酸衍生物，其中G是氨基，羧基或硫醇基：未提供图片。查看 PDF其中X,R,A和B如上定义。本发明另一方面是提供制备新的主链环化促生长素抑制素类似物的方法，包括插入至少一种氨基酸的N-官能化衍生物，进入肽序列并且顺序地将官能团与所述肽序列中氨基酸的侧链之一或者与另一个-官能化氨基酸衍生物环化。本发明主链环化的类似物可以用作药物组合物和治疗疾病的方法，所述疾病包括：术后疼痛，所有类型的炎症，特别是胰腺炎，癌症，内分泌失调和肠胃失调。因此，本发明另一个目的涉及含有根据这里所公开的方法制备的药物活性主链环化肽激动剂和拮抗剂和药学可接受载体或稀释剂的药物组合物；和用其治疗炎症，癌症或内分泌失调和肠胃失调的方法。附图的简要说明图1图示作为主链环化促生长素抑制素类似物PTR3046的浓度的函数的对促生长素抑制素(SRIF-14)结合不同SSTR亚型的抑制作用。图2图示作为主链环化促生长素抑制素类似物PTR3046和PTR3040的浓度的函数的对促生长素抑制素(SRIF-14)结合小鼠垂体AtT细胞系上促生长素抑制素受体的抑制作用。图3是Octreotide和主链环化促生长素抑制素类似物PTR3046对大鼠生长激素释放的影响的图示比较。图4是Octreotide和主链环化促生长素抑制素类似物PTR3046对大鼠胰岛素释放的影响的图示比较。图5是Octreotide和主链环化促生长素抑制素类似物PTR3046对铃蟾肽诱导后胰腺内分泌释放的影响的图示比较。图6是PTR3046和Octreotide对MiaPaca-2细胞抗增殖效果的图示比较。发明的详细描述这里所描述化合物具有不对称中心。本发明包括所有的手性，非对映异构，和外消旋形式。这里所描述的化合物中还存在很多烃的几何异构体等，本发明包括所有这样稳定的异构体。这里“稳定化合物”或“稳定结构”指足以稳定存在以从反应混合物中分离至有用程度的纯度，和配制成有效治疗药剂。如这里和权利要求书中使用的，“烷基”或“亚烷基”意指包括具有1-10个碳原子的支链和直链饱和的脂肪烃基团；“链烯基”意指包括具有2-10个碳原子和沿链任何稳定位点存在的一个或多个不饱和的碳-碳键的直链或支链的构型的烃链，例如乙烯基，丙烯基等；“炔烃基”意指包括具有2-10个碳原子和沿链任何稳定位点存在的一个或多个碳-碳三键的直链或支链的构型的烃链，例如乙炔基，丙炔基等。如这里和权利要求书中使用的，“芳基”意指任何稳定的5-至7-元单环或二环或7-至14-元二环或三环碳环，所有的环可以是饱和的，部分饱和的或芳香的，例如苯基，萘基，2,3-二氢化茚基，或十氢化萘,四氢化萘等。如这里和权利要求书中使用的，“烷基卤”意指包括具有1-10个碳原子，其中1-3个氢原子被卤原子例如Cl,F,Br和I置换的支链和直链饱和的脂肪烃基团。如这里和权利要求书中使用的，词组“治疗有效量”指对受者施用新的主链环化的肽类似物或含有该类似物的组合物以达到对于这里所描述的病症的期望的效果的量，所述病症例如但不限于炎症，癌症，内分泌失调和肠胃失调。如这里和权利要求书中使用的，术语“取代的”指指定原子上的任何一个或几个氢原子被选出的指定基团置换，前提是指定原子正常价态不过剩，并且取代结果产生稳定化合物。当任何变数(例如R,X,Z等)在任何组成或在任何结构式中存在一次以上时，各存在情况下其定义独立于任一其它存在情况下的其定义。而且只有如果组合产生稳定的化合物时才允许取代基和/或变数的组合。如这里所使用的“肽”指肽键连接的氨基酸序列。本发明促生长素抑制素肽类似物包括4-24个氨基酸残基的氨基酸序列，优选6-14个残基，每个残基的特征在于具有一个氨基和一个羧基末端。“结构单元”指通式 N-衍生的氨基酸：未提供图片。查看 PDF式()其中X是选自亚烷基，取代的亚烷基，亚芳基，环烯和取代的环烯的间隔基团；R1是任选与特定保护基团键合的氨基酸侧链；和G是选自胺，硫醇，醇，羧酸和酯，和烷基卤化物的官能团；其结合到肽序列中并且顺序地通过官能团G与所述肽序列中氨基酸的侧链之一或者与另一个-官能化氨基酸衍生物选择性环化。制备结构单元的方法公开于国际专利申请PCT/IB95/00455，其在这里全文引作参考。结构单元缩写为相应的修饰过的氨基酸的三字母码，其后接反应类型(N对于胺，C对于羧基)，和间隔亚甲基基团数的指出。例如Gly-C2指用羧基反应基和一个两个碳的亚甲基间隔修饰的Gly残基，Phe-N3指用氨基反应基和一个三个碳的亚甲基间隔修饰的苯丙氨酸基团。这里所使用的“线性肽”指只由氨基酸残基构成的并且没有任何结构单元的肽序列。这里所使用的“主链环化的肽”指含有至少一个可能已经通过肽主链的氮与另一个结构单元或者与序列中另一个氨基酸形成桥的结构单元的线性肽的类似物。这里所使用的“成环前的肽”指除了保留在非环化形式中以作为生物或其它筛选测试期间的对照物外和环类似物相同的类似物。术语非环的可以与术语成环前的互换使用。这里使用一些缩写来描述本发明和其制备和使用的方法。例如，AcOH指乙酸，Ada指金刚烷乙酰基，Adac指金刚烷羰基，Alloc指烯丙基氧基羰基，Boc指叔丁氧羰基，BOP指苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐，BSA指牛血清白蛋白，Cbz指苄氧羰基，DCC指二环己基碳化二亚胺，DCM指二氯甲烷，Dde指1-(4,4-二甲基-2,6-二氧环己基-1-亚基-乙基)，DIEA指二异丙基-乙基胺，DMF指二甲基甲酰胺，DPPA指二苯基磷酰基叠氮化物，Dtc指5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸，EDC指N-乙基-N-(二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺，EDT指乙二硫醇，Fmoc指芴基甲氧羰基，GPI指豚鼠回肠，HATU指O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基尿鎓六氟磷酸盐，HBTU指1-羟基苯并三唑基四甲基-尿鎓六氟磷酸盐，HF指氢氟酸，HOBT指1-羟基苯并三唑，HPLC指高压液相色谱，MALDI-TOF MS指基质辐助激光解吸飞行时间质谱，Mts指4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基，NBT指氮蓝四唑鎓，NMM指N-甲基吗啉，NMP指1-甲基-2-吡咯烷酮，PBS指磷酸盐缓冲盐水，Pmc指五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基，PNPP指磷酸对-硝基苯酯，PPA指1-丙磷酸环酐，PyBOP指苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷-鏻六氟磷酸盐，PyBrOP指溴-三-吡咯烷-鏻六氟磷酸盐，RT指室温，SMPS指同时发生的多肽合成，SRIF指促生长素释放抑制因子，TBTU指2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基尿鎓四氟硼酸盐，t-Bu指叔丁基，TFA指三氟乙酸，TIS指三异丙基甲硅烷，Tpr指噻唑烷-4-羧酸，Trt指三苯甲游基，Ts指甲苯磺酰基。本发明中所使用的氨基酸是商售的或者通过常规合成方法可得到的。一些残基可能需要结合到肽中的特定方法，肽序列的按顺序的，零散的和会聚性合成方法在本发明中是有用的。天然编码氨基酸及其衍生物用根据IUPAC惯例的三字母码代表。没有指明时，用的是L异构体。D异构体用残基缩写前的“D”表示。列出非编码氨基酸：Abu指2-氨基丁酸，Aib指2-氨基-异丁酸，Cha指环己基丙氨酸，Hcys指高半胱氨酸，Hyp指S-顺式-4-羟基脯氨酸，1Nal指1-萘基丙氨酸，2Nal指2-萘基丙氨酸，Nva指正缬氨酸，Oic指八氢吲哚羧酸，Phg指苯基甘氨酸，pClPhe指对-氯-苯丙氨酸，pFPhe指对-氟-苯丙氨酸，pNO2Phe指对-硝基-苯丙氨酸，Thi指噻吩基丙氨酸。合成途径根据本发明，肽类似物是通过与允许新的非肽键的氨基酸的氮连接的桥基而环化的。一般情况下，用来从其结构单元构建这样的肽类似物的方法依据已知的肽合成理论；最方便的是，根据已知的固相肽合成理论进行该方法。该新方法需要用下面通式的新的结构单元来置换肽序列中一个或多个氨基酸：未提供图片。查看 PDF其中R是氨基酸侧链，X是间隔基团，G是终端官能团，通过该官能团进行环化作用。侧链R是选择来结合到选择的肽序列中的任何天然的或合成的氨基酸的侧链。X是为了实现肽类似物合适的构象受限而选择来提供更大或更小揉性度的间隔基团。这样的间隔基团包括亚烷基链，取代的，支链的和不饱和的亚烷基，亚芳基，环烯，和不饱和的和取代的环烯。此外X和R可以结合生成杂环结构。本发明优选实施方案使用含有2-10个碳原子的亚烷基链。要用于肽类似物环化作用的末端()官能团包括但不限于：a胺，用于与亲电子试剂例如活化的羧基，醛和酮(有或没有接下来的还原作用)，和烷基或取代的烷基卤的反应。b醇，用于与亲电子试剂例如活化的羧基的反应。c硫醇，用于生成二硫键和与亲电子试剂例如活化的羧基，和烷基或取代的烷基卤的反应。d1,2和1,3二醇，用于生成缩醛和缩酮。e炔或取代的炔，用于与亲核试剂例如胺，硫醇或阴碳离子；自由基；亲电子试剂例如醛和酮，和烷基或取代的烷基卤；或者有机金属配合物反应。f. 羧酸和酯，用于与亲核试剂(有或没有事先的活化)例如胺，醇，和硫醇的反应。g烷基或取代的烷基卤或酯，用于与亲核试剂例如胺，醇，硫醇和阴碳离子(来自活化的亚甲基，例如乙酰乙酸酯或丙二酸酯)反应；和生成用于接下来的与烯烃或取代的烯烃和炔或取代的炔的反应的游离基。h烷基或芳基醛和酮，用于与亲核试剂例如胺(有或没有接下来的还原作用)，阴碳离子(来自活化的亚甲基，例如乙酰乙酸酯或丙二酸酯)，二硫醇(用于生成缩醛和缩酮)的反应。i烯或取代的烯，用于与亲核试剂例如胺，硫醇，阴碳离子，游离基，或有机金属配合物反应。j活化的亚甲基，例如丙二酸酯，乙酰乙酸酯，和其它，用于与亲电子试剂例如醛和酮，烷基或取代的烷基卤的反应。应该理解，在肽的合成中，这些末端活性基团，以及任何反应性侧链必须用合适的保护基团保护。用于胺的合适的保护基团是烷基氧基，取代的烷基氧基，和芳基氧基羰基，包括但不限于叔丁氧羰基(Boc)，芴基甲氧羰基(Fmoc)，烯丙基氧羰基(Alloc)和苄氧羰基(Z)。用于环化作用的末端羧基可以被保护成其烷基酯或取代的烷基酯或硫酯或芳基酯或取代的芳基酯或硫酯。例子包括但不限于叔丁酯，烯丙酯，苯甲酯，2-(三甲基甲硅烷基)乙酯和9-甲基芴酯。用于环化作用的硫醇基团可以被保护成其烷基硫醚或取代的烷基硫醚或二硫化物或芳基硫醚或取代的芳基硫醚或二硫化物。这样的基团的例子包括但不限于叔丁基，三苯甲游基(三苯基甲基)，苄基，2-(三甲基甲硅烷基)乙基，pixyl(9-苯基咕吨-9-基)，乙酰胺基甲基，羧基甲基，2-硫-4-硝基吡啶。另外技术人员还要理解各种反应部分要通过不同的保护基团保护，使其选择性去除。因此，当N被例如保护基团A保护时，特定的氨基酸将与其肽序列中相邻氨基酸偶联。如果胺要被用作反应方案中的环化作用的末端基团时，N将会被保护基团B保护，或者序列中所有的赖氨酸的氨基要用保护基团C保护等。正如肽合成领域所公知的，氨基酸相互偶联是作为一系列反应进行的。本发明新的结构单元，也就是N-官能化氨基酸衍生物结合到肽序列中来置换一个或多个氨基酸。如果只选择一个N-官能化氨基酸衍生物，则其将与序列中另一个氨基酸侧链环化。例如：(a)N-(-氨基亚烷基)氨基酸可以连接天冬氨酸或谷氨酸残基的羧基；(b)N-(-羧基亚烷基)氨基酸可以连接赖氨酸残基的-氨基；(c)N-(-硫代亚烷基)氨基酸可以连接半胱氨酸残基的硫醇基；等等。本发明最优选的实施方案插入两个这样的可以相互连接生成N-主链与N-主链环肽类似物的N-官能化氨基酸衍生物。三个或多个这样的结构单元可以插入到肽序列中，产生下面将利用的二环肽类似物。因此，肽类似物可以用两个或多个环化作用构建肽类似物，包括N-主链与N-主链，还有主链与侧链或者任何其它肽环化作用。如上所述，用来从新的结构单元构建本发明促生长素抑制素类似物的方法一般依据已知的肽合成理论。但是，应该理解可能需要供应本发明较大结构单元的方法。固相肽化学中氨基酸的偶联可以通过利用偶联剂来实现，偶联剂例如但不限于二环己基碳化二亚胺(DCC)，双(2-氧代-3-噁唑烷基)氯化膦(BOP-Cl)，苯并三唑基-N-氧三二甲基-氨基磷鎓六氟磷酸盐(BOP)，1-氧代-1-氯磷烷(Cpt-Cl)，羟基苯并三唑(HOBT)，或其混合物。现在已经发现将下面的氨基酸偶联到本发明大结构单元上可能需要使用另外的偶联剂，包括但不限于：偶联剂，例如PYBOp(苯并三唑-1-基-氧-三-吡咯烷-磷鎓六氟磷酸盐)，PyBrOP(溴-三-吡咯烷-磷鎓六氟磷酸盐)，HBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基尿鎓六氟磷酸盐)，TBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基尿鎓六氟硼酸盐)。可以使用新的偶联化学试剂，例如预先生成的氨基甲酸乙酯保护的N-酸酐(UNCAS)和预先形成的酰基卤最优选酰氯。这样的偶联可以在室温下发生，也可以在高温下，在溶剂中，例如甲苯，DCM(二氯甲烷)，DMF(二甲基甲酰胺)，DMA(二甲基乙酰胺)，NMP(N-甲基吡咯烷酮)或上述溶剂的混合物。本发明的一个目的是制备通式()主链环化的促生长素抑制素类似物的方法：未提供图片。查看 PDF式()其中取代基如上定义；包括插入至少两个式()氨基酸的N-官能化衍生物步骤：未提供图片。查看 PDF式()其中：X是选自亚烷基，取代的亚烷基，亚芳基，环烯和取代的环烯的间隔基团；R是任选与特定保护基团键合的氨基酸侧链例如H,C