分光光度法测定大黄中大黄素的含量.doc

分光光度法测定大黄中大黄素的含量杜永峰,等:分光光度法测定大黄中大黄素的含量43分光光度法测定大黄中大黄素的含量杜永峰许丽梅姚秉华(西安理工大学理学院应用化学系,西安710054)摘要建立了10倍量90%乙醇回流提取,15倍量乙酸乙脂二次回流提取,最后用碱提酸沉法制备高纯度大黄素的方法.用改进的分光光度法对纯化后产品进行测定,大黄素含量达85.41%.显色剂为5mol/L的NaOH溶液,检测波长为530nm,该显色体系的线性范围为1400g/mL,相关系数为0.9993,平均回收率为99.57%,RSD为1.31%(n=4).关键词大黄素纯化分光光度法大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠,凉血解毒,逐瘀通经等功效.其主要有效成分为蒽醌衍生物,主要有大黄素,大黄酸,大黄酚,芦荟大黄素等.现代药理实验研究表明,大黄素为大黄中药理活性成分,大黄素具有广泛的生理活性,可用于保护肝肾,清除自由基,改善微循环等.最新研究表明,大黄素具有很强的抑菌活性.为了提高大黄素纯度,以便使该药物得到进一步的利用,笔者建立了提取与纯化大黄素的新方法,纯度达到85.41%,本法避免了氯仿,苯等有毒试剂的使用以及树脂柱吸附法的操作繁冗J.在文献3,4的基础上对大黄素含量测定方法进行了改进,选用乙醇作溶剂,以提高大黄素的溶解度,再使用5mol/L的NaOH溶液作为显色剂,对显色体系起到了增溶增敏的效果,提高了方法的检出限.显着地改进了大黄素分光光度法测定条件.1实验部分1.1测定原理大黄素几乎不溶于水,易溶于乙醇,NaOH水溶液中,微溶于乙醚,氯仿,苯.由于天然大黄中大黄素含量较少,而且杂质多,测定方法较复杂.实验发现,大黄素在NaOH水溶液中的平衡随着pH的变化而可逆,图1为大黄素在NaOH水溶液中的平衡方程.OHOOH一嫩iOHOOH珊OO图1大黄素在NaOH中的平衡方程图1表明,当NaOH过量时,大黄素结构中蒽醌上3个羟基完全质子化,加上共轭环上有甲基的推电子作用,共轭体系内电子云流动增加.大黄素与NaOH反应生成稳定红色络合物,在一定波长下有最大吸收,可用分光光度法进行测定.当提高酸度,一0一得质子,溶液又恢复至黄色,反应前后,大黄素结构未发生变化.1.2主要仪器与试剂紫外可见分光光度计:uV一2102型,上海仪器有限公司;可见分光光度计:2100型,上海仪器有限公司;酸度计:PHB一4型,上海精密科学仪器有限公司;电子天平:AY120型,日本岛津公司;电热恒温水浴锅:天津市泰斯特仪器有限公司;大黄粗粉:陕西瑞康生物医药有限公司;大黄素标准样品:纯度98%.陕西瑞康生物医药有限公司;大黄素标准溶液:500g/mL.精密称取0.0500g大黄素标准样品,配制成500g/mL大黄素标准品的乙醇溶液;无水乙醇,乙酸乙酯,碳酸钠,盐酸,NaOH:均为分析纯,西安化学试剂厂;实验用水为去离子水.1.3样品处理精密称取大黄粗粉20g于500mL圆底烧瓶中,加10倍量90%乙醇,置沸水浴中回流提取1.5h,趁热过滤,滤液静置2h,抽滤,得沉淀,合并静置3次后的沉淀.移取提取物的十分之一,以15倍量乙酸乙酯溶解,5%Na:CO,溶液萃取数次,合并萃取液,加10%盐酸至酸性,得橙黄色沉淀.用冰乙酸重收稿Et期:2007-09-01化学分析计量2007年,第l6卷,第6期结晶,得到大黄素纯化品.1.4样品测定精密称取大黄素纯化品0.0515g,置于100mL容量瓶中,加乙醇溶解,定容,摇匀.移液管移取该溶液1mL,加入1mL5mol/L的NaOH溶液,去离子水稀释至10mL,摇匀,放置10rain,以空白溶液为参比,在530nm处测定吸光度.2结果与讨论2.1标准曲线取大黄素标准溶液依次稀释至浓度为4,20,40,80,100,150,200,250,300,350,400,420,450g/mL系列溶液.分别移取1mL于10mL比色管中,加入1mL5mol/L的NaOH溶液,去离子水稀释至刻度,摇匀,放置10rain,以空白溶液为参比,在530nm处用紫外可见分光光度计测定吸光度.以吸光度值对浓度c进行线性回归,大黄素的线性回归方程为A=0.0074c+0.0227,相关系数为0.9993.2.2溶剂大黄素属于蒽醌衍生物,几乎不溶于水,易溶于乙醇,NaOH溶液等,微溶于乙醚,氯仿,苯等.表1为大黄素溶解度测定结果.由表1可知,大黄素在乙醇中的溶解度最高,故选用乙醇作为溶剂.表1-大黄素在不同溶剂中的溶解度测定溶剂大黄素质量/g滤渣质量/g溶解度/%无水乙醇0.50540.250550.4-45mol/LNaOH水溶液0.5O420.288442.805%Na2CO3水溶液0.50l80.3l6536.93乙酸乙酯0.503l0.3O6439.09乙醚0.50350.452710.09正丁醇0.50l70.424515.39分别测定体系I,体系的吸光度,结果列于表2.试验表明,选用乙醇作为溶剂,对体系有增色作用,原因是大黄素在乙醇中溶解性较好,能促进大黄素与NaOH反应生成稳定的红色络合物.表2不同体系的吸光度体系体系配方吸光度I100g/mL的大黄素0.5475moI/L的NaOH溶液100mL的大黄素乙醇0.822溶液+5mol/L的NaOH溶液2.3测定波长在450600nm波长范围内每隔5nm测定一次吸光度,绘制吸收曲线,如图2所示.从图2看出,大黄素标准品和样品的吸收曲线形状相同,最大吸收峰都在530nm,故确定530nm为测定波长.1大黄素标准品;2一大黄素样品图2大黄素的吸收曲线2.4显色剂用量当5mol/L的NaOH用量不同时测定体系的吸光度,试验结果表明,NaOH用量为14mL时,吸光度最大且稳定.本实验选择5mol/L的NaOH用量为1mL.2.5稳定性实验按1.4测定方法,考察显色时间的影响,结果表明,吸光度在24h内基本稳定不变,本实验取显色时间为10rain.表3不同显色时间的吸光度显色时间I5rainl10minI30rainI60rainI5hI12hl24hl30h吸光度10.46710.82210.820l0.81410.813l0.80610.798l0.7522.6加标回收试验精密称取4份纯化后大黄素适量,分别置于100mL容量瓶中,分别加入大黄素标准溶液(15.82g/mL)1,2,3,4mL,进行加标回收试验,结果列于表4.表4加标回收试验结果本底值/加标量/测得量/回收,率/平均回收I-J,g?mLlI-I,g?mLlI.J,g?mL一%率/%l0o.25l5.82ll5.8898.7999.5931.64l31.1499.7299.5798.6447.46145.8799.5ll0o.8463.28164.52l0o.252.7样品测定表5是纯化后大黄素纯品中大黄素含量的测定结果,由表5可知,本法测定结果的相对标准偏差为1.31%,表明方法的精密度较高.表5大黄素纯品中大黄素的测定结果纯化后产品/测定值/含量/平均含量/RSn/%gg?mLlI.J,g?mLl%0.05l8144.2585.580.0508143.8985.3285.411.310.0497l43.4985.290.0515144.1885,4-4杜永峰,等:分光光度法测定大黄中大黄素的含量453结论建立了纯化大黄素的新方法,并改进了分光光度法测定大黄素含量的方法.测定结果准确,设备简单,成本低廉,实用性强,适合大批量样品的测试.参考文献1钟芳芳,李芸芳,陈玉,等.虎杖中大黄素的分离及抗菌活性的初步研究.中南民族大学(自然科学版),2006,25(1):4142.2张新乐,吴铁,许碧莲,等.加碱提取何首乌中大黄素工艺的探讨,现代医药卫生,2007,23(7):394395.3杨成勇,刘峰,刘丽娜.分光光度法测定决明子中大黄素的含量.山东医药工业,2001,20(6):1516.4陈军,方芸,刁雨辉.比色法测定逐瘀扶正胶囊中蒽醌类成分的含量,药学实践杂志,2002,20(5):297300.DETERMINATIoNoFEMoDININRHUBARBBYSPECTRoPHoToMETRYDuYongfeng,XuLimei,YaoBinghua(DepartmentofAppliedChemist,SchoolofSciences,XianUniversityofTechnology,Xian710054,China)ABSTRACTThenewpurlfyingmethodofemodinfromrhubarbwasestablished.10一fold90%ethanoland15一foldethylacetatewereusedasthefirstandsecondcircumfluencesolvents.alkalineextractionandacidprecipitationwasfinallyusedtopurifyemodin.Thecontentofpurifiedemodindeterminedbytheimprovedspectr0photometrywas85.41%.Thecolourreagentwas5mol/LNaOH.andthedetectionwavelengthwas530nm.Thelinearrangeofsystemwas1400mL,andregressioncoefficientwas0.9993.TI1eaveragerecoverywas99.57%andtheRSDwas1.31%(n=4).KEYWORDSemodin,purification,spectrophotometryfttji我国研发出新型氧传感器及测氧仪前不久,一种结构新颖,体积小,成本低,稳定性强,使用寿命长,检测范围广,灵敏度高,具有自主知识产权的新型氧传感器及测氧仪由中科院长春应化所研发成功,并通过了吉林省科技厅组织的专家鉴定.专家认为,该新型氧传感器及测氧仪在检测氧度范围和灵敏度方面达国内领先水平.氧的分析测定广泛应用于医学,生物学,工业能源,环保等许多领域.氧气传感器的用量很大,各行业对电化学氧气传感器的需求量基本接近其他各类气体传感器的总和.同时,随着近年来人们健康意识的增强以及各国对有毒气体排放和污染物排放方面的严格立法,各种新型检测机理的气态氧或溶解氧监测装置得到越来越广泛的应用.与此相适应,新机理,新结构的氧传感器及检测仪器也迅速成为国内外传感器领域的研发热点.鉴于我国目前电化学氧传感器存在检测范围窄,灵敏度达不到检测指标,受环境制约较大等瓶颈问题尚未突破,每年不得不花大量外汇引进国外产品的现状,中科院长春应化所的科技人员同长春大学合作,于2003年承担了吉林省科技发展计划项目新型氧传感器及测氧仪的研究和开发.他们从实际应用与解决关键技术人手,创新性地突破了催化剂,分流控制气体扩散等技术难题,取得了系列创新性成果:传感器采用电化学三电极半固态设计,结构新颖,无消耗性物质,使用寿命长;采用半固态及纳米级催化剂有效地提高了传感器的灵敏度,并使检测下限达到110,进一步扩大了氧传感器的检测范围,有效解决了气体环境中检测11O氧气的难题;采用扩散垒分流控制气体扩散技术拓宽了检测上限,使检测上限达100%;采用PtFe合金技术,不仅改变了催化层结构,大幅提高了催化剂活性,提高了传感器的灵敏度,使之更适合实际检测的要求.经吉林省计量,产商品质量监督站检测,量程在50010mol/mol的低浓度Ittit,禾再it型,25%的普通浓度型和100%的高浓度型3类氧传感器的示值误差,重复性,响应时间,零点漂移,跨度漂移等主要技术指标均达到或优于标准要求.该新型传感器改变了传统意义的氧气气体传感器的设计理念,为氧气的检测提供了一种新型的技术手段,也为其他多种气体检测提供了全新的思路,满足了环境等领域的检测需求.(高)英国百灵达发明ChloroSense余氯检测仪世界领先的致力于水质检测产品的制造商英国百灵达公司不久前宣布推出了一款用于检测水中氯含量的革命性新型便携式仪器chlor0sense余氯检测仪.ThomasPalin博士5O年前始创了DPD方法,即通过溶解药片对氯含量进行检测,奠定了DPD药片检测法作为工业领域氯含量检测标准方法的地位.ChloroSense的到来具有划时代的革新意义,它打破了长期使用的传统的DPD检测方法.测试仅需要一个ChloroSense分析仪,一个一次性使用型传感器和少量检测水样.已获得专利的电化学传感器能够同时测出总余氯和游离余氯的浓度,并在1min之内把检测数据(及水样温度)记录下来.无需