Lp-PLA2(人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2)定量检测试剂盒.ppt

人血浆脂蛋白磷脂酶A2 Lp PLA2 定量测定试剂盒 中美合资 天津康尔克生物科技有限公司 125 000 受试者 在国际主流专业杂志和会议报告中 已有超过100项临床研究和综述分析的结果支持Lp PLA2作为一个心血管疾病的标志物在传统危险标志物的基础上提供了新的信息 国际研究一致结果 国际权威指南一致推荐 2010ACCF AHA无症状成人心血管风险评估指南可考虑对中等风险的无症状成人进行Lp PLA2检测以进一步评估风险 2011AHA ASA卒中一级预防指南在未有心血管疾病的患者中检测炎症指标如hs CRP或Lp PLA2可以鉴别出有较高卒中风险的患者 2012AACE高脂血症管理与动脉粥样硬化预防指南一些研究证明 在有必要进一步对患者进行风险评级时 Lp PLA2检测比hs CRP具有更高的特异性 2012ESC欧洲心血管疾病预防临床实践指南对有复发急性血栓事件的高风险患者可以检测Lp PLA2以进一步评估风险 国内专家一致认可 脂蛋白相关磷脂酶A2 Lp PLA2 是血管内皮炎症的独立危险因子 也是目前检测血管内皮炎症的新指标 对心脑血管栓塞性疾病的预测 治疗和预后的判断具有重要意义 中华医学会心血管病学分会主任委员 著名心血管专家胡大一教授 中国工程院院士 美国心脏病学院院士 著名心血管专家张运教授 脂蛋白相关磷脂酶A2 Lp PLA2 已成为AS抗炎治疗的新靶点 初步研究发现通过抑制磷脂酶A2 可以减少血管壁脂质的沉积和巨噬细胞的浸润 摘自 动脉粥样硬化不稳定斑块的研究进展 摘自2012中国脑卒中大会主题论坛报告 临床一线期待已久 心血管医生最关心的一点就是高危患者心血管事件发生风险 如果能够早期预防 在发生重大事件之前把危险控制住 那就可以减少病死率 但目前临床常用的检测指标如肌苷激酶等出现时为时已晚 而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测为临床提供了一个预警及风险评估的有力工具 北京大学第三医院心内科主任高炜 现有的检验指标如胆固醇 LDL HDL确实在心血管疾病风险评估方面发挥一定作用 但并不全面 甚至有些方法如血小板活化检测还不够稳定 因此实验室迫切需要一个方法稳定 特异性强又独立于胆固醇之外的风险评估方法 而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测就提供了这样一个方法 中国医师协会检验医师分会会长丛玉隆 我国一年心外科手术量已达到18 5万例 但还远不能满足我国患者需要 原因就在于我国心血管疾病发病率太高 每年新增冠心病患者300万 因此预防的作用比治疗更重要 并且其社会效益要远高于手术 而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测为心血管疾病预防提供了一个有力武器 中国医师协会心脏外科医师分会副会长孙立忠 2011 7 16北京钓鱼台国宾馆 国家863高科技成果中国首家和唯一上市产品 中国首家和唯一上市产品国家863科技攻关项目高科技成果快速监控和预测心脑血管栓塞性疾病填补中国心脑血管疾病快速预警检测的空白与会专家 中国人民解放军总后卫生部原副部长陈新年广东省卫生厅副厅长耿庆山中国医药生物技术协会副会长于修成科技部火炬高技术产业开发中心处长雷庆西中国医师协会心脏外科医师分会副会长孙立忠中国医师协会检验医师分会会长丛玉隆北京大学第三医院心内科主任高炜北京大学首钢医院心血管医学中心主任王宏宇卫生部北京医院心内科主任许峰 心脑血管疾病是造成人类死亡的主要病因 恶性肿瘤 心脏病 脑血管病 呼吸系统疾病 来源 2012中国卫生统计年鉴 来源 美国国家健康中心2012年统计数据 心脏猝死 经常是首次心脏病爆发 MyerburgRJetal Circulation 2012 125 1043 1052 研发背景 动脉粥样硬化 AS 是造成心脑血管疾病的主要原因AS是一种炎症反应性疾病在粥样斑块形成 进展和最终破裂的过程中均有炎性介质的参与寻找一个能够反映这种动态变化过程的炎性介质就能够检测并跟踪动脉粥样硬化的严重程度目前脂蛋白相关磷脂酶A2 Lipoprotein AssociatedPhospholipaseA2 Lp PLA2 已被国际专家公认为一种新的炎性反应标志物 内容 心脑血管疾病现状及研发背景Lp PLA2与动脉粥样硬化的关系临床研究临床意义康尔克Lp PLA2定量检测试剂盒简介产品详解与注意事项 Lp PLA2 脂蛋白相关磷脂酶A2 英文缩写Lp PLA2 又称血小板活化因子乙酰水解酶 PAF AH 分子量为45KDa 由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌 并受炎性介质的调节 水解ox LDL C上的磷脂 生成促炎物质lyso PC和ox FA 因此具有促炎症和促动脉粥样硬化的作用 Lp PLA2在粥样斑块形成中的作用 粥样斑块形成 血管腔 氧化型LDL 内膜 中膜 溶血卵磷脂氧化脂肪酸 泡沫细胞 单核细胞 粘附分子 巨噬细胞 细胞因子 稳定斑块vs易损斑块组织学特征对比 小型坏死脂质池 血栓 大型坏死脂质池 稳定斑块Lp PLA2含量较低 深色染色 纤维帽厚 胶原含量高小型坏死脂质池炎症程度较轻 易损斑块Lp PLA2含量较高 深色染色 纤维帽薄 胶原含量低大型坏死脂质池炎症程度较重 CorsonMAetal AmJCardSuppl2008 101 41F 50F 斑块易损性与其Lp PLA2含量成正比 Lp PLA2染成棕红色 早期斑块出现脂质池 稳定斑块纤维帽变薄 出现小型坏死脂质核 易损斑块薄纤维帽 破裂斑块血管中出现血栓 KolodgieF etal ArteriosclerThrombVascBiol2006 血栓 25已发表研究结果显示 Lp PLA2升高导致心血管事件风险加倍 Packard WOSCOPS NEnglJMed2000 CHDBlake WHS JAmCollCardiol2001 CHDBlankenberg AtheroGENE JLipidRes2003 CADBallantyne ARIC Circulation2004 CHDLDL 130Winkler JClinEndocrinologyandMetabolism2004 CHDOei Rotterdam Circulation2005 CHDBrilakis MayoHeart EurHeartJ2005 CHDBallantyne ARIC ArchInternMed2005 StrokeOei Rotterdam Circulation2005 StrokeWinkler LURIC Circulation2005 CHDKhuseyinova HELICOR Atherosclerosis2005 CHDKoenig KAROLA ArteriosclerThrombVascBiol2005 CVDMay IntermountainHeart AmHeartJ CHDJenny CHS AHA EPIAbstract2006 MIElkind NOMAS ArchInternMed2006 StrokeO Donoghue PROVEIT Circulation2006 CVDCorsetti THROMBO ClinicalChemistry2006 CHDGerber OlmstedCounty ATVB2006 DeathS PMIOldgren GUSTO FRISC EurHeartJ2007 AcuteACSSabatine PEACE AHA ScientificSessions2006 CVDPersson Malmo ArteriosclerThrombVascBiol2007 CVDMockel NOBIS II ClinResCardiol2007 CVDHatoum Nurse sHealthStudy CircSuppl2007 MIDaniels RanchoBernardo JACC2008 CHD CorsonMAetal AmJCardSuppl2008 101 41F 50F Lp PLA2前瞻性研究汇总分析Lancet 柳叶刀 2010 32项前瞻性研究79 036名受试者每年新增474 976名患者存在心脑血管风险17 346次血管与非血管事件 TheLp PLA2StudiesCollaboration Lancet2010 375 1536 44 Lp PLA2前瞻性研究汇总分析Lancet 柳叶刀 2010 Lp PLA2水平与心血管疾病呈显著线性相关 相对基线 Lp PLA2每提高一个标准差所导致冠心病风险比的增加值与传统风险因子血压和非HDL C相当 Lp PLA2是独立的心血管疾病风险预测指标 不受其他生物指标的影响 也为炎症 动脉粥样硬化与心血管疾病之间的联系提供了新的佐证 TheLp PLA2StudiesCollaboration Lancet2010 375 1536 44 Lp PLA2vshs CRP Lp PLA2vsHCY Lp PLA2生物变异性低 90份未患心脏病健康人群的血样 43份健康成人4周7次抽血血样 LermanA McConnellJP AmJCardSupplement2008 冠心病患者LDL C水平 72 的患者低于130mg dL 130LDL C mg dL 130LDL C mg dL GetWiththeGuidelinesdatabase levelsatadmission Sachdevaetal AmHeartJ2009 157 111 7 e2 总胆固醇及LDL C在冠心病预测中的局限性 Framingham心脏研究 26年随访数据显示 35 冠心病患者的总胆固醇水平 200mg dL180 发生MI患者与未发生MI患者含有相似的胆固醇水平冠心病患者LDL C水平的中值为150mg dL1仅有25 的早发性冠心病患者的发病与LDL C水平升高有关2 1CastelliW Atherosclerosis19962GenestJJr etal JAmCollCardiol1992 胆固醇并非卒中的可靠预测指标 LDL胆固醇 ARIC1 PROCAM2 BIPREGISTRY3 P 0 20 P NS P 0 05 未患卒中卒中患者 P 0 44 P NS P 0 05 BallantyneCM etal AHA2004BergerK etal Stroke1998TanneD etal Circ 2001 4 BowmanTS etal Stroke1998OeiHH etal Circ 2005WannametheeSG etal Stroke2000 传统风险因子在冠心病患者中的流行程度 KhotUM etal JAMA2003 62 4 冠心病患者仅含有0 1个传统风险因子 Mayo研究 利用Lp PLA2预测心梗后生存期 0 0 3 0 4 0 5 0 6 0 1 0 2 0 5 4 2 2 1 0 166ng mL 167 218ng mL 219ng mL p 0 001aftermultivariateadjustmentforage sex hypertension BMI diabetes smoking LDL C GerberY etal ArteriosclerThrombVascBiol2006 HazardRatio 发生MI后 高水平Lp PLA2患者1年内死亡风险是低水平患者的5倍 Mayo研究 利用Lp PLA2预测冠心病患者主要心血管事件发生率 95 的Lp PLA2 200ng ml患者4年内未发生心血管事件 BrilakisESetal MayoHeartStudy EuroHeartJ2005 北曼哈顿卒中研究 NOMAS 利用Lp PLA2预测卒中复发风险 复发性卒中事件N 80 其他心血管事件N 122Adjustedfordemographics traditionalriskfactors strokeseverity andbothmarkers ElkindMS etal ArchIntMed2006 Lp PLA2升高 卒中复发风险加倍 一级预防 对急性冠脉综合征的预测评价 经冠脉造影证实无冠脉狭窄者 对照 28例 急性冠脉综合征 ACS 27例 稳定型心绞痛 SAP 28例 检测血浆Lp PLA2水平 组别例数Lp PLA2 ng ml 急性冠脉综合征 ACS 27706 00 149 91 稳定型心绞痛 SAP 2427 75 44 58 无冠脉狭窄者 对照组 28267 69 92 67注 与对照组比较 P 0 001 陈锦峰 等 广东医学2011 32 10 1263 二级预防 对进展性脑梗死的预测评价 168例急性脑梗死 ACI 患者每天进行NIH卒中量表 NIHSS 评分 其中进展性脑梗死40例 稳定性脑梗死128例 检测血浆Lp PLA2水平 组别例数Lp PLA2 g L ACI组16812 058 7 104 进展性脑梗死组4017 304 10 630 稳定性脑梗死组12810 419 4 576正常对照组727 268 3 112注 与正常对照组比较 P 0 01 与稳定性脑梗死组比较 P 0 01 王磊 等 临床神经病学杂志2011 24 4 309 病情评估 对神经功能损伤程度的评价 选择动脉硬化性脑梗死 ACI 患者128例和未卒中对照者88例为研究对象 检测血浆Lp PLA2的水平 按NIH中风量表 NIHSS评分 进行神经功能缺损程度评估 分析神经功能缺损程度与血浆Lp PLA2水平相关性 结果r 0 829 P 0 001 组别例数Lp PLA2 g L 轻型梗死组3253 45 5 47 中型梗死组6665 68 6 07 重型梗死组3077 11 5 12注 与重型梗死组比较 P 0 05 梁江红 等 实用医学杂志2009 25 14 2264 疗效评价不同剂量阿托伐他汀治疗急性脑梗死 选择急性脑梗死患者86例 随机分为2组 阿托伐他汀常规剂量组43例 20mg 天 大剂量组43例 40mg 天 分别于治疗前及治疗14天后测量患者血浆Lp PLA2水平 另选择43例健康体检者为对照组 不予阿托伐他汀治疗 阿托伐他汀治疗前后血浆Lp PLA2 g L 变化的比较常规治疗组大剂量组对照组急性脑梗死组治疗前治疗后治疗前治疗30 52 2 9143 95 5 70 44 22 6 2537 63 4 53 43 69 5 1635 63 4 16 注 治疗前和治疗后比较 P 0 05 与对照组比较 P 0 05 陈军 等 临床医学工程2011 18 7 982 康尔克Lp PLA2定量检测试剂盒特点 准确 可靠 重复性好灵敏度高简易 快捷 静脉取血2 5ml送检 1 5小时出结果无需空腹 任何时间均可取血性能达到美国同类产品水平性价比高 美国同类产品临床检测收费250美元左右 约合人民币1500元 本产品仅为350元人民币 医保 新农合 公费医疗均能报销 临床检测人群 传统风险评级已经确定为中危的人群患者 增强危险级别接受他汀类抗炎治疗的患者 评估 调整 效果高血压患者 评估 调整 效果发生过中风 ACS AMI等急性不良事件的患者 预测二次事件 强化治疗方案 临床实践举例 评估通过传统危险因素检测的患者 175ng ml 175ng ml 175ng ml 175ng ml 4 0mmol L 3 3mmol L 2 5mmol L 1 8mmol L 测试测量中高危患者的Lp PLA2水平 治疗达到合适LDL C水平 产品组成及安全性 本试剂盒中采用的试剂都不具有毒性 致畸致突变性 也不含有人血液制品 因此不具有生物学危害 但仍需作为一般生物试剂加以防护 检验原理 ELISA 样品处理 样品收集 处理和保存 血浆 用EDTA抗凝管取血2ml 1500r min离心10分钟 收集上清液 血清 用普通管或促凝管取血2ml 4 下放置30分钟后 1500r min离心10分钟 收集上清液 保存 血浆 清 如不即时检测 则须于 20 保存 并避免反复冻融 操作方法 1 从冰箱中取出试剂盒 室温平衡20min 将标准品离心 1000r min 1min2 分别加入80ul稀释液 1倍 和20ul待测样品或标准品于反应孔内 混匀 37 温育20min3 弃去孔内液体 每孔加300ul洗液 1倍 振荡20 30sec后弃去洗液 重复4次 拍干残液4 加入100ul酶标记物 混匀 37 温育30min5 重复步骤3 6 每孔加入显色液100ul 混匀 37 温育20min 避光7 加入50ul终止液8 立即用酶标仪在450nm条件下测定各孔OD值9 以OD值为纵坐标 Y 相应Lp PLA2标准品浓度为横坐标 X 制作标准曲线10 根据样品的OD值计算得出样品的Lp PLA2含量 检验结果的解释 对临床的检测结果进行统计分析之后 175ng ml以下正常 175ng ml以上为危险 如样本的Lp PLA2的含量低于临界值 则视为正常 如高于临界值则提示为其动脉可能有粥样硬化炎症 且炎症与Lp PLA2的含量成正比 产品性能指标 剂量 反应曲线的线性用logistic数学模型或其他数学模型拟合 剂量 反应曲线相关系数 r 应不低于0 9900 r2 0 99998 r2 0 97917 准确性试剂盒标准品与相应浓度的企业校准品同时进行分析测定 用logistic数学模型或其他数学模型拟合 要求两条剂量 反应曲线不显著偏离平行 t检验 t 2 447 以企业校准品为对照品 试剂盒标准品的实测值与标示值的效价比的平均