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文档简介

氨基酸的分离鉴定 纸层析法 通过氨基酸的分离 学习纸层析法的基本原理及操作方法 目的 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法 以水 被滤纸纤维结合 作为固定相 以有机溶剂为流动相 样品点在滤纸上进行展层 氨基酸在两相中不断分配 因为分配系数不同 故样品随流动相移动的速率不同 从而被分开 形成距原点距离不等的层析点 氨基酸被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值 比移 来表示的 Rf 原点到层析中心的距离 原点到溶剂前沿的距离 原理 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数 Rf值的大小与物质的结构 性质 溶剂系统 层析滤纸的质量和层析温度等因素有关 本实验利用纸层析法分离氨基酸 器材 1 玻璃钟罩2 吸嘴3 喷雾器4 培养皿5 层析滤纸 新华一号 6 铅笔 直尺 7 剪刀8 胶带9 一次性手套10 针 线 1 氨基酸溶液0 5 的赖氨酸 苯丙氨酸 缬氨酸溶液及它们的混合液 各组份浓度均为0 5 2 扩展剂4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物 将4体积正丁醇和1体积冰醋酸放人分液漏斗中 与5体积水混合 充分振荡 静置后分层放出下层水层 3 显色剂0 1 水合茚三酮正丁醇溶液 试剂 1平衡将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中 单相可不做 2准备滤纸取层析滤纸 长22cm 宽14cm 一张 纸的窄边朝下 距下端2cm处用铅笔划一条与底边平行的直线 在此直线上每间隔2cm作一记号 3点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在中间5个记号 上 风干后再点一次 每点在纸上扩散的直径 最大不超过5mm 4扩展用线将滤纸缝成筒状 纸的两边不能接触 用胶带粘住两边 将盛有约20mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的玻璃钟罩中 并将滤纸直立于培养皿中 点样的一端在下 扩展剂的液面需低于点样线1cm 待溶剂前沿上升15 20cm时即取出滤纸 铅笔描出溶剂前沿界线 自然干燥或用吹风机热风吹干 5显色用喷雾器均匀喷上0 1 茚三酮正丁醇溶液 然后用热风吹干即可显出各层析斑点 6计算各种氨基酸的Rf值 操作 单向上行层析法 1 何谓纸层析法 怎样制备扩展剂 层析缸中平衡溶剂的作用是什么 2
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