实验一斐林试剂置换法测定还原糖的含量.ppt

实验一斐林试剂置换法测定还原糖的含量 一 实验原理 糖类包括多糖 双糖和单糖 其中单糖和某些双糖具有游离的羰基 称为还原糖 多糖和蔗糖无还原性 利用糖的还原性 与斐林试剂 氧化剂 中的二价铜离子还原为一价铜 进行氧化还原反应 而进行测定 非还原糖必须转化为还原糖 再进行测定 斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂 反应的终点可用次甲基蓝作指示剂 在碱性 沸腾环境下还原呈无色 根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量 计算出样品还原糖量 二 试剂与材料 1 斐林试剂甲69 3gCuSO4 5H2O1000ml50ml 组乙346g酒石酸钾钠 100gNaOH1000ml50ml 组2 1 次甲基蓝1g次甲基蓝 100ml水 班棕色瓶保存3 0 2 标准G2gG105 烘干到恒重加水到1000ml2000ml 班 4 碱式滴定管5 样品溶液 待测G液样品1 稀释20倍 1000ml 班样品2 稀释50倍 1000ml 班6 电炉 三 操作方法 1 斐林试剂标定A取甲液5ml 乙液5ml 注意 甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀 应将甲液加入乙液 使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶 置于250ml三角瓶中 加入10ml水 并从滴定管中加入0 2 的标准G若干毫升 约23ml 量控制在后滴定时消耗G在0 5 1 0ml B电炉上加热至沸 并保持微沸2分钟 加2滴1 次甲基蓝溶液 趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液用0 2 标准G滴定至蓝色消失 有红棕色沉淀 溶液清亮为终点止 记录耗用的G量为V0 必须在1min内完成 注意 还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化 恢复成原来的蓝色 所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态 并且避免滴定时间过长 2 定糖预备试验同1法取斐林试剂 加10ml样品液 摇匀于电炉上加热至沸 保持微沸2分钟 加2滴1 次甲基蓝 用0 2 G滴定至蓝色消失 记录耗用的G量为V1 3 样品中还原糖测定同上法吸取斐林试剂加10ml样品液 预先稀释 补加 V0 V1 ml水 并从滴定管中预先加入 V1 1 ml0 2 G 摇匀至电炉上加热至沸 保持2min微沸 加入2滴1 次甲基蓝 继续用G滴定至蓝色消失 记录消耗的标准G体积为V毫升 四 结果计算 还原糖含量 以G计 g ml Vo V 0 002 1 10 n式中Vo 斐林试剂标定值 mlV 样品糖液测定值 ml0 002 标准GS液浓度 g ml10 样品糖液体积 mln 样品稀释倍数 五 注意事项 本方法测定的是一类具有还原性质的糖 包括葡萄糖 果糖 乳糖 麦芽糖等 只是结果用葡萄糖或其他转化糖的方式表示 所以不能误解为还原糖 葡萄糖或其他糖 但如果已知样品中只含有某一种糖 如乳制品中的乳糖 则可以认为还原糖 某糖 分别用葡萄糖 果糖 乳糖 麦芽糖标准品配制标准溶液分别滴定等量已标定的费林氏液 所消耗标准溶液的体积有所不同 证明即便同是还原糖 在物化性质上仍有所差别 所以还原糖的结果只是反映样品整体情况 并不完全等于各还原糖含量之和 如果已知样品只含有某种还原糖 则应以该还原糖做标准品 结果为该还原糖的含量 如果样品中还原糖的成分未知 或为多种还原糖的混合物 则以某种还原糖做标准品 结果以该还原糖计 但