一氧化氮对大鼠肝脏缺血再灌注致损伤的保护作用.doc

6黑龙江医药科学2003年8月第26卷第4期一氧化氮对大鼠肝脏缺血再灌注致损伤的保护作用汪飞,牛文斌,王鲲鹏(佳木斯大学附属第一医院小儿外科,黑龙江佳木斯154002)提要:目的:探讨一氧化氮在大鼠肝脏缺血-再灌注致损伤中的作用机制。方法:采用动物分组对照实验,研究了L-精氨酸(NO供体)对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响,测量不同状态下动物血清中ALT、AST值,以及肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、丙二醛(MDA)浓度的变化。结果:一氧化氮明显减少肝组织中丙二醛含量和血清中ALT、AST含量以及增加肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶活力。结论:一氧化氮对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,本实验为一氧化氮在肝缺血再灌注损伤的临床治疗提供实验基础。关键词:缺血再灌注;肝脏;一氧化氮中图分类号:R575文献标识码:A文章编号:1008-0104(2003)04-0006-02肝脏缺血再灌注损伤是外科实践中较常见的组织器官损伤之一,肝移植、肝创伤、肝感染性疾病等,经治疗肝脏血流得到恢复后都可构成缺血再灌注损伤的病理演变,此病理改变除引起肝脏局部的损伤外,还可导致全身多器官功能障碍。近年来国内外学者对NO的研究较多,NO是一种具有多种生物活性的小分子物质,参与多种病理及生理过程,涉及到缺血再灌注损伤,而L-精氨酸在体内可以经一氧化氮合酶催化生成一氧化氮,实验研究显示,一氧化氮对肝脏缺血再灌注致损伤有保护作用,现将实验过程总结如下。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物玻璃匀浆机、恒温水浴箱、低温离心机等。1.3统计学处理统计学处理应用SPSS11.0统计软件包,计量资料用方差分析和t检验,P0.05为有显著性差异,P0.01为有极显著性差异。2结果见表12。大鼠血清ALT、AST值见表1,肝组织中GSH-Px、MDA值的变化见表2。表1大鼠肝脏缺血再灌注后血清ALT、AST测定结果(xs,n=6)组别时点ALT(U/L)AST(U/L)S(假手术)组4649816(缺血)组A3009051049成年Wister大白鼠(购于佳木斯大学实验动物中心)54只雌雄不限,体重250300g,饲以标准鼠饲料。术前禁食12h,自由饮水。1.1.2动物分组分为4大组:即假手术组S(6只)、缺血组(6只)、缺血再灌注组和L-精氨酸组,将A、B、C、D分别定义为肝(缺血再灌注)组BCD(用药)组ABCD203191601728025290201832110211*#27030323573034041050490412755220340#39045缺血30min,缺血30min再灌注30min、60min、120min时间点,相应的将缺血再灌注组分为B、C、D3小组,将L-精氨酸组分为A、B、C、D四小组,每小组6只。1.1.3动物模型制作一氧化氮胶囊/肝脏缺血再灌注动物模型的制作1,称重后,5ml/kg20%乌拉坦溶液腹腔注射麻醉,大白鼠平卧于鼠台上,腹部高效碘消毒,铺无菌巾,参照Pringles法,建立缺血再灌注模型:腹中线切口进腹,分离肝十二指肠韧带,解剖肝动脉、门静脉,用微血管夹钳夹肝十二指肠韧带,以阻断肝动脉、门静脉血流,肝缺血以据肝脏血运颜色消失,颜色苍白确定;动静脉夹闭后肠管送回腹腔,用无菌温盐水纱布敷盖腹部切口。阻断血流30min为缺血阶段,缺血30min后,去除肝十指肠韧带之血管夹分别再灌注30、60、120min,肝脏再灌注血流恢复以肝脏血运颜色恢复红润确定,为再灌注阶段。对照组除不夹闭肝十二指肠韧带外,其余操作同实验组。操作过程中所有动物腹腔注射37生理盐水10ml,以保持血液动力学的稳定。S组、组、组、肝十二指肠韧带分离前股静脉注射生理盐水5.0ml,组肝十二指肠韧带分离前股静脉注射15%的L-精氨酸0.5ml。1.1.4药品L-精氨酸由佳木斯大学基础医学院生化教研室提供,丙二醛(MDA)测试盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试盒由南京建成生物工程研究所提供。1.2仪器上海二厂生产的722光删分光光度计,DY89型电动F(ALT)=16.32,P0.05F(AST)=19.78,P0.05注:与组比较,P0.05,P0.01;、组同一时点比较,*P0.05;、组同一组内比较,#P0.05。图1各组血清中ALT、AST的比较结果见表1:、组的ALT、AST测定结果同S组比较,均有极显著差异(P0.01);与组比较,B、C、B显著低于A(P0.05),C明显低于A(P0.01);、组同一时点比较,C显著低于C(P0.05);、组内比较,C显著低于B(P0.05)。结果见表2:S组与A、B、C、D、A、B、D组比较均有差异(P0.05或P0.05);同组比较,B、C、B均显著高于组的GSH-Px值或显著低于组MDA值(P0.05),C明显高于组的GSH-Px值或低于组的MDA值(P7HEILONGJIANGMEDICINEANDPHARMACYAug.2003,Vol.26No.40.01);、组同一时点比较,C显著高于B的GSH-Px值或低于B的MDA值(P0.05);并且在肝脏缺血组及再灌注120min组,GSH-Px含量明显降低,而MDA含量明显升高(用药组亦然),同S组比较有明显差异(P0.01)。这提示(缺血再灌注)组BCD(用药)组AB6.50.550.080.500.060.700.040.750.040.500.04在肝I/R缺血期及I/R晚期,大量氧自由基入血;激活中性粒细胞,导致机体氧化与抗氧化平衡失调,血液及肝组织中抗氧化物质GSH-Px等被大量消耗,而脂质过氧化产物MDA大量生成,这是造成肝损害的主要因素之一,可能与缺CD27.93.1*12.53.7#0.390.03#0.700.03血期内皮细胞功能障碍,NO产生与释放减少以及再灌注晚期L-精氨酸(NO供体)跨膜转运受抑4有关。而在肝伤,对机体的氧化与抗氧化平衡起着重要的作用,保护细F(GSH-Px)=32.45,P0.01,F(MDA)=2.76,P0.05图2-1肝组织中各组GSH-Px含量的比较图2-2肝组织中各组MDA含量的比较3讨论一氧化氮(NO)是一种具有多种生物活性的小分子物质,是近年来生命科学研究领域中热点课题之一,参与多种生理及病理过程。近几年的研究发现,NO与肝移植关系密切,涉及到缺血及再灌注损伤,排斥反应,血流动力学变化,移植后并发症等多个环节2,因此研究NO在肝脏缺血再灌注致损伤中作用应是一件十分有意义的事情。谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶。它特异的催化还原型谷胱甘肽(GSH),对过氧化氢的还原反应,保护细胞不受毒性氧自由基的损3胞膜结构和功能完整的作用。MDA的含量常常可反映机体内脂质过氧化的程度,间接地反映出细胞损伤程度。MDA的测定与GSH-Px的测定相互配合,GSH-Px活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力,而MDA的高低又间接I30min再灌注30min、I30min再灌注60min两组GSH-Px含量显著升高,MDA含量显著降低,并且L-Arg组在肝I30min再灌注60min组GSH-Px明显升高,MDA含明显降低,接近假手术S组,这说明NO可以有效对抗氧自由基活性,提高机体的抗氧化能力,减轻膜结构的脂质过氧化损害,保护肝细胞结构与功能的完整,对肝脏起到保护作用。本实验以ALT、AST作为肝功能的检测指标,结果显示,在肝脏缺血及再灌注120min组(L-Arg组此期间亦然),ALT、AST值明显升高,同S组比较有明显差异(P0.01),表明在肝缺血期及再灌注晚期肝组织遭受氧自由基,中性粒细胞及炎性介质损伤,细胞膜通透性增加,胞浆内的各种生物酶类通过细胞膜入血,在肝缺血30min再灌注30min、再灌注60minALT、AST值同肝缺血组及再灌注120min组比较,有显著降低(P0.05),并且L-Arg组此期间同时点比较又有显著降低,尤其以L-Arg组再灌注60min时点降低明显(P0.01),这表明在肝脏I/R早中期,NO可改善与肝功能有关的各项酶学指标,说明NO可保护细胞膜性结构的稳定性,对肝I/R导致损伤有保护作用。以上实验说明,一氧化氮对肝缺血再灌注致损伤具有保护作用,其机制与抗氧自由基活性及其引发的脂质过氧化反应、改善细胞能量供给等有关。参考文献:1BenediktH.JPannen,FeridAL-Adili,MichaelBauter,etal.RoleofendothelinsandnitricoxideinhepaticreperfusioninjuryintheratJ.Hepatology,1998,27(3):7557642YoshizumiT,Yanagak,Soejimay,etal.Ameliorationofliverin-jurybyischemicpreconditioningJ.BrJsury1998,85(12):163616403MitsuokaH,SuzukiS,SakaguchiT,etal.Contributionofen-dothelintomicrocirculatoryimpairmentintotalhepaticischemiaandreperfusioninjuryJ.Transplantation,1999,67(5):5145204王万铁,林丽娜.脂质过氧化反应在家兔肝缺血再灌注损伤中的作用J.中国应用生理学杂志,1998,14(3):214216(2003-06-15收稿)反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度。实验结果显示,作者简介:汪飞(1973)男,黑龙江泰来人,在读硕士研究生。(下转第8页)8黑龙江医药科学2003年8月第26卷第4期额颞部继发性脑损伤病人临床救治分析顾志成1,刘长林2,杨丙铎3,李晓飞1(1.佳木斯大学一附院,黑龙江佳木斯154003;2.伊春市西林区人民医院,黑龙江伊春153000;3.鸡西市人民医院脑外科,黑龙江鸡西158100)关键词:额颞部;继发性脑损伤中图分类号:R651.1+5文献标识码:B文章编号:1008-0104(2003)04-0008-01额颞部继发性脑内血肿、水肿可造成脑组织移位,使垂体柄及门脉血管受到牵拉损伤。还因灰结节下移疝入鞍膈开口内,使门脉血管在鞍膈的游离缘受压而发生垂体前叶梗塞坏死;下丘脑移位使供给下丘脑的血管损伤而发生循环障碍,使下丘脑发生梗塞坏死。从而引起脑肿胀,颅内压进一步增高,形成恶性循环。故采用外科综合治疗,打断这一恶性循环,是改善预后的关键。我科于2002年共收治外伤性额颞部脑挫裂伤、脑内血肿病人共计37例,现报道如下。1临床资料1.1一般资料37例中男29例,女8例,年龄670岁。病因:车祸20例,坠落伤15例,他人打伤2例。受力部位枕部21例,额颞部13例,不详3例。格拉斯哥打分13分以上8例,912分14例,入院时8分以下的14例,入院后病情发展至8分以下者的14例。有肢体活动障碍者9例,病理反射阳性者23例,躁动者9例,伴有耳、鼻漏者6例,脑挫裂伤脑内血肿为单侧者18例,双侧者19例,伴有硬膜下血肿6例,硬膜外血肿1例,有脑肿胀者2例。经头CT检查血肿量在30ml以上,中线移位达1.0cm以上者立即手术14例,其中术后死亡1例,遗有肢体功能障碍1例,余者达临床治愈。对颅内血肿未达30ml、中线移位未达1.0cm、格拉斯哥打分在9分以上病例给予止血降颅压对症治疗,这23例中:病情发展恶化未及手术治疗死亡6例;8例又采取了手术治疗,这其中死亡1例,遗有语言、视力或肢体功能障碍各2例,脑积水1例。1.2治疗方法对入院时格拉斯哥打分在8分以下,血肿量达30ml以上、中线移位达1.0cm的病例,如患者未发生脑疝,可单行颅内血肿清除术,术中一定清除挫灭失活的脑组织,如术前已有脑疝者,同时行去骨瓣减压术,且减压范围越接近颅底为好。对入院时格拉斯哥打分9分以上清醒的病人,应严密观察血压、脉搏、瞳孔、意识、呼吸、体温变化。同时给予脱水、止血、预防感染等对症治疗,如果在观察期间患者出现睡眠中情加重,应尽早行手术治疗。2结果37例病人,根据病情,立即手术14例,死亡1例,遗有后遗症1例。先保守治疗23例,其中丧失手术时机死亡6例;8例病情加重,改手术与内科综合治疗,其中死亡1例,遗有后遗症共7例,余患者治愈出院。附表临床治疗情况例数治愈后遗症死亡保守治疗1596立即手术141211保守失败手术8713讨论额颞部的继发脑损伤,多是由对冲性损伤所致,着力点多为枕部。血肿本身的占位效应不但增加了颅内压,更重要是它引起了局部脑组织的移位,这对病人预后起着更为决定性的作用。因为额颞部血肿、水肿可造成中线结构移位,使下丘脑、垂体产生不同程度的损伤,使分泌细胞内的激素溢入血液而导致激素浓度升高,垂体、门脉血管的断裂,栓塞或痉挛导致下丘脑到垂体门静脉被阻断,从而造成内分泌调节功能紊乱,而肾上腺皮质功能不足可能致命。因此,减轻以后发生在血肿周围脑组织水肿、脑缺血软化等继发损害,则是我们治疗的目的。因为这种继发性损害常可导致临床症状的进一步恶化,故认为采用外科和内科的综合治疗,打断这一恶性循环,是改善预后的关键。重型颅脑损伤病人,躁动的发生率显著增高,提示急性颅脑损伤病人伤情较重,也是发生脑疝的先兆。故结合临床状况,患者由清醒转入躁动在排除尿潴留情况下,或在睡眠中出现尿床,均提示患者已出现了意识障碍,应早期采取综合治疗,这样可降低死亡率、致残率,提高患者的生命质量。(2003-06-17收稿)尿床,应视为有意识障碍和或患者躁动不安加重者,预示病作者简介:顾志成(1966)男,副主任医师。(上接第7页)Theprotectiveeffectsofnitricoxideinliverischemia-reperfusiondamageinratsWANGFei,NIUWen-bin,WANGKun-peng(TheFirstAffiliatedHospital,JiamusiUniversity,Jiamusi154003,China)Abstract:Objective:Toobserveande