单倍型异基因造血干细胞移植后大剂量环磷酰胺诱导免疫耐受治疗儿童重型再生障碍性贫血.doc

www.CRTER.org郭智，等. 单倍型异基因造血干细胞移植后大剂量环磷酰胺诱导免疫耐受治疗儿童重型再生障碍性贫血单倍型异基因造血干细胞移植后大剂量环磷酰胺诱导免疫耐受治疗儿童重型再生障碍性贫血郭 智1，童 春1，2，刘晓东1，杨 凯1，何学鹏1，张 媛1，陈 鹏1，楼金星1，陈惠仁1(1解放军北京军区总医院血液科，北京市 100700；2安徽医科大学附属北京军区总医院临床医学院，北京市 100700)引用本文：郭智，童春，刘晓东，杨凯，何学鹏，张媛，陈鹏，楼金星，陈惠仁. 单倍型异基因造血干细胞移植后大剂量环磷酰胺诱导免疫耐受治疗儿童重型再生障碍性贫血J.中国组织工程研究，2016，20(32):4818-4824.DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.32.016 ORCID: 0000-0002-1164-9978(郭智)文章快速阅读：单倍型异基因造血干细胞移植后大剂量环磷酰胺诱导免疫耐受治疗儿童重型再生障碍性贫血郭智，男，1977年生，湖北省武汉市人，2000年同济医科大学毕业，硕士，副主任医师，副教授，硕士生导师，主要从事造血干细胞移植相关基础及临床工作。并列第一作者：童春，女，1989年生，安徽省安庆市人，汉族，安徽医科大学在读硕士，主要从事造血干细胞移植相关基础及临床工作。通讯作者：陈惠仁，主任医师，教授，博士生导师，解放军北京军区总医院血液科，北京市100700中图分类号:R394.2文献标识码:B文章编号:2095-4344(2016)32-04818-07稿件接受：2016-06-21关键技术：(1)移植后环磷酰胺诱导免疫耐受；(2)粒细胞集落刺激因子促进骨髓联合外周血干细胞输注；(3)减低强度和改良预处理为治愈重型再生障碍性贫血患者提供新的治疗方法临床研究：移植后临床结果分析、植入情况、移植物抗宿主病、免疫重建和生存情况免疫耐受新方法单倍型异基因造血干细胞移植治疗儿童重型再生障碍性贫血(共完成10例)完善移植技术文题释义：移植失败：移植后28 d内外周血中性粒细胞绝对值没有达到0.5109 L-1以上；初次植活并在移植后100 d内中性粒细胞绝对值又下降到0.5109 L-1以下，血小板 20109 L-1，至少1周以上。原因可能系HLA不全相合移植，相合非亲缘移植，T淋巴细胞清除或移植前输血使受者致敏，供者骨髓中造血干细胞质量欠佳或祖细胞亚群不足，脐血移植治疗重型再生障碍性贫血在移植前输血次数过多，珠蛋白生成障碍性贫血，免疫缺陷或范可尼贫血，患者骨髓基质细胞在强烈放化疗后严重受损，存在移植并发症有各种病原微生物感染。异基因造血干细胞移植治疗儿童重型再生障碍性贫血：儿童单倍型移植是具有中国特色的移植体系，在国际上处于领先水平，但移植后致死性的感染及移植物抗宿主病等并发症是影响移植预后的主要因素，最近临床治疗中发现，诱导免疫耐受新方法即移植后高剂量环磷酰胺应用于重型再生障碍性贫血，在移植中减少移植物抗宿主病和移植相关病死率取得显著成效，促进免疫重建的形成是解决异基因造血干细胞移植后并发症的根本途径。摘要背景：提出单倍型异基因造血干细胞移植后高剂量环磷酰胺诱导免疫耐受的新技术，理论与实践相结合，优化造血干细胞移植治疗儿童重型再生障碍性贫血的技术体系，为临床推广应用提供理论基础。目的：探讨单倍型异基因造血干细胞移植后应用大剂量环磷酰胺诱导免疫耐受治疗儿童重型再生障碍性贫血的临床疗效和安全性。方法：解放军北京军区总医院血液科2013年1月至2015年1月应用单倍型异基因造血干细胞移植治疗10例重型再生障碍性贫血患儿(治疗组)，预处理方案为环磷酰胺、氟达拉滨、白舒非联合抗人淋巴细胞免疫球蛋白，移植后+3 d用环磷酰胺(50 mg/kgd)诱导免疫耐受，供者接受粒细胞集落刺激因子动员，采用骨髓联合外周血干细胞移植。移植物抗宿主病预防采用环孢素A、氨甲蝶呤、他克莫司等联合免疫抑制剂。选择同期行全相合造血干细胞移植治疗10例重型再生障碍性贫血患儿为对照组，统计两组患儿移植相关并发症及存活情况。结果与结论：随访至2015年5月，治疗组中位随访时间18.1个月(5-28个月)，全部患儿均获造血重建，3例发生移植物抗宿主病、3例合并肺部感染，肺部感染死亡2例；对照组中位随访时间20.7个4819 P.O.Box 1200,Shenyang 110004 月(6-27个月)，全部患儿均获造血重建，2例发生移植物抗宿主病、4例合并肺部感染，移植物抗宿主病死亡1例、肺部感染死亡1例，两组患儿总生存率均为80%。结果表明单倍型异基因造血干细胞移植后大剂量环磷酰胺诱导免疫耐受治疗儿童重型再生障碍性贫血安全有效，临床疗效与全相合造血干细胞移植相当。关键词：干细胞；移植；重型；再生障碍性贫血；单倍型；异基因造血干细胞移植；环磷酰胺；免疫耐受；移植物抗宿主病；国家自然科学基金 主题词：贫血，再生障碍性；单倍性；造血干细胞移植；免疫耐受；环磷酰胺；组织工程基金资助：国家自然科学基金：DKK-1在间充质干细胞诱导免疫耐受机制中的调控作用(31200686)；北京市首都临床特色课题：诱导耐受新方法造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血的临床研究High-dose cyclophosphamide-induced immunogenic tolerance following haploidentical allogeneic hematopoietic stem cell transplantation in severe aplastic anemia childrenGuo Zhi1, Tong Chun1, 2, Liu Xiao-dong1, Yang Kai1, He Xue-peng1, Zhang Yuan1, Chen Peng1, Lou Jin-xing1, Chen Hui-ren1 (1Department of Hematology, General Hospital of Beijing Military Area, Beijing 100700, China; 2Clinical Medical College of General Hospital of Beijing Military Area, Anhui Medical University, Beijing 100700, China)AbstractBACKGROUND: High-dose cyclophosphamide (CTX)-induced immunogenic tolerance following haploidentical allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT) is developed to optimize the treatment of childhood severe aplastic anemia (SAA) using haplotype allo-HSCT, providing a theoretical basis for the clinical application.OBJECTIVE: To investigate the clinical efficacy and safety of the use of high-dose CTX following haploidentical allo-HSCT in SAA children. METHODS: Clinical data from 10 children with SAA undergoing haploidentical allo-HSCT at the Department of Hematology, General Hospital of Beijing Military Area from January 2013 to January 2015 were retrospectively analyzed. Pretreatment was CTX, fludarabine, Busulfex combined with anti-human lymphocyte immune globulin used for 2 consecutive days, and then 3 days after transplantation, CTX (50 mg/kg per day) was used to induce immunogenic tolerance. Combined use of cyclosporin A, methotrexate and tacrolimus functioned as a prophylaxis for graft-versus-host disease. Another 10 SAA children who underwent synchronous HLA-identical sibling HSCT served as controls. Complications and survival in children were statistically analyzed in the two groups.Guo Zhi, Master, Associate chief physician, Associate professor, Masters supervisor, Department of Hematology, General Hospital of Beijing Military Area, Beijing 100700, ChinaTong Chun, Studying for masters degree, Department of Hematology, General Hospital of Beijing Military Area, Beijing 100700, China; Clinical Medical College of General Hospital of Beijing Military Area, Anhui Medical University, Beijing 100700, ChinaGuo Zhi and Tong Chun contributed equally to this work. Corresponding author: Chen Hui-ren, Chief physician, Professor, Doctoral supervisor, Department of Hematology, General Hospital of Beijing Military Area, Beijing 100700, ChinaRESULTS AND CONCLUSION: In the treatment group, children were followed up until May 2015, and the median follow-up period was 18.1 months (5-28 months). Hematopoietic reconstruction was successful in all cases, and there were three cases of graft-versus-host disease, three cases of pulmonary infection and two cases dying of pulmonary infection. In the control group, the median follow-up period was 20.7 months (6-27 months), and all the children received hematopoietic reconstruction. Additionally, there were two cases of graft-versus-host disease, four cases of pulmonary infection, one case dying of graft-versus-host disease and one case dying of pulmonary infection in the control group. The total survival rate in each group was 80%. In summary, high-dose CTX-induced immunogenic tolerance is safe and effective for SAA children undergoing haploidentical allo-HSCT, which makes the clinical efficacy of haploidentical allo-HSCT identical to that of matched HSCT.Subject headings: Anemia, Aplastic; Haploidy; Hematopoietic Stem Cell Transplantation; Immune Tolerance; Cyclophosphamide; Tissue EngineeringFunding: the National Natural Science Foundation of China, No. 31200686; the Capital Clinical Project of BeijingCite this article: Guo Z, Tong C, Liu XD, Yang K, He XP, Zhang Y, Chen P, Lou JX, Chen HR. High-dose cyclophosphamide-induced immunogenic tolerance following haploidentical allogeneic hematopoietic stem cell transplantation in severe aplastic anemia children. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(32):4818-4824.4821ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH0 引言 Introduction儿童再生障碍性贫血是儿童血液病中较受关注的一类疾病，其实质是由多种原因引起的骨髓造血功能减低或衰竭，导致周围血全血细胞减少的综合病征，其中重型再生障碍性贫血起病急骤，病情发展迅速，预后极差1，其发病与多种因素有关，目前公认的发病机制主要有造血干细胞缺乏或功能缺陷、造血微环境障碍以及免疫功能异常等方面2，而免疫介导的造血抑制是最常见的病理机制。以抗淋巴细胞球蛋白和环孢素A的免疫抑制治疗有效率均较低3。国内外专家均认为有人类白细胞抗原(HLA)配型全相合供者首选异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)，欧洲血液及骨髓移植组的统计数据表明4，全相合造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血患儿的有效率可达85%-90%，HLA配型全相合造血干细胞移植是公认的儿童重型再生障碍性贫血的一线治疗方法，具有造血重建快、缓解后不需要维持治疗等优点5。全相合异基因造血干细胞移植受到供者来源的限制，以致临床应用局限，但每一个患儿的父母都可以作为单倍型供者进行单倍型异基因造血干细胞移植，解放军北京军区总医院于2013年1月开始采用单倍型异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血患儿，同时创新性地在移植后应用大剂量环磷酰胺诱导免疫耐受，获得较为理想的临床疗效，现将结果报道如下。1 对象和方法 Subjects and methods 1.1 设计 回顾性病例分析总结及探索性研究。1.2 时间及地点 于2013年1月至2015年1月在解放军北京军区总医院血液科完成。1.3 对象 选择行单倍型造血干细胞移植的10例重型再生障碍性贫血患儿作为治疗组(表1)，其中男6例，女4例，平均年龄6.70(3-14)岁，选择同期行全相合造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血10例患儿作为对照组，其中男5例，女5例，平均年龄7.40(4-13)岁。所有患儿均明确诊断为重型再生障碍性贫血，移植前不合并严重基础疾病、活动性感染，均具有移植适应证，移植方案得到医院伦理委员会批准和患儿及家属知情同意。供受者的A、B、C、DR、DQ位点均进行高分辨分子生物学配型，采用高分辨PCR-SSP方法确定患儿和父母亲供者HLA中有一条单倍型相同。诊断标准：全部入组患儿均经过骨髓细胞形态学、骨髓病理、染色体核型分析等检查确诊重型再生障碍性贫血，符合重型再生障碍性贫血诊断标准，重型再生障碍性贫血患儿外周血象至少满足以下3条中的2条：中性粒细胞计数 0.5109 L-1；网织红细胞 1%；血小板计数 20109 L-1。纳入标准：年龄14岁；诊断为重型再生障碍性贫血；无严重基础疾病；无严重活动性感染；接受单倍型造血干细胞移植。单倍型异基因造血干细胞移植所用主要药物：药物来源重组人粒细胞集落刺激因子日本中外制药株式会社环磷酰胺德国百特肿瘤制药有限公司氟达拉滨浙江海正药业公司白舒非协和发酵麒麟中国制药有限公司抗人淋巴细胞免疫球蛋白德国费森尤斯公司环孢素A瑞士诺华公司1.4 方法1.4.1 预处理方案 单倍型异基因造血干细胞移植患儿(治疗组)采用降低强度预处理方案，即环磷酰胺、氟达拉滨、白舒非联合抗人淋巴细胞免疫球蛋白，具体为：氟达拉滨(FLU) 30 mg/(m2d)，连续用4 d，环磷酰胺(CTX) 14.5 mg/(kgd)，连续用2 d，白舒菲3.2 mg/(kgd)，用1 d，抗人淋巴细胞免疫球蛋白1.25 mg/kg，连续用2 d，移植后+3 d应用大剂量环磷酰胺诱导免疫耐受，环磷酰胺剂量为50 mg/(kgd)。对照组采用环磷酰胺联合抗人淋巴细胞免疫球蛋白预处理，具体为环磷酰胺50 mg/(kgd)，连续用4 d，抗人淋巴细胞免疫球蛋白1.25 mg/kg，连续用4 d。1.4.2 干细胞动员及采集 治疗组和对照组移植方式均采用骨髓联合外周血干细胞移植，供者给予粒细胞集落刺激因子5-10 g/(kgd)动员，共6 d，动员第5天采集骨髓混悬液，第6天采集供者外周血干细胞。流式细胞仪监测采集物中CD34+细胞数，确保输注的单个核细胞数5108/kg，CD34+细胞中位数2.0106/kg。对于ABO血型主要不相合病例，采集骨髓后应用羟乙基淀粉分离沉降后再输注。1.4.3 移植物抗宿主病预防 两组患儿移植物抗宿主病预防均采用环孢素加短程甲氨蝶呤联合霉酚酸酯、他克莫司，预处理开始时即应用环孢素2.5 mg/(kgd)，肠道功能恢复后改为口服，监测环孢素血药浓度，维持在200-300 g/L水平，短疗程应用甲氨蝶呤，剂量一般为5-10 mg，+1 d、+3 d、+6 d、+11 d，霉酚酸酯剂量为0.5-1.0 g/d，他克莫司剂量为0.1 mg/(kgd)，口服，保证他克莫司水平为5-15 mg/L，若无移植物抗宿主病表现在移植后半年逐步减停，若出现移植物抗宿主病根据程度轻重加用抗人淋巴细胞免疫球蛋白、糖皮质激素、CD25单克隆抗体等。1.4.4 支持治疗 移植前所有患儿接受全面体检，排查口腔、耳鼻喉、肛周及呼吸道等部位的潜在感染灶，留置锁骨下静脉插管。预处理前一两天进行清洁灌肠、12 000的洗必泰药浴，使全身各部位浸泡20- 30 min，去除皮肤表面的污渍及微生物，再将其送进提前消毒好的百级层流间。随后开始口服肠道消毒剂，复方新诺明预防卡氏肺囊虫病，更昔洛韦预防巨细胞病毒，预处理开始后如出现发热经验性使用抗生素，积极收集血、痰、局部分泌物等进行培养，根据药敏试验结果调整抗生素。预处理期间充分水化、碱化尿液，给予患儿胃肠外营养支持，保证摄入足够的热量、维生素、微量元素及电解质。每周输注免疫球蛋白2.5-5.0 g，血红蛋白60 g/L、血小板20109 L-1时给予成分输血，所有血制品均经射线25 Gy照射。移植后+3 d开始皮下注射粒细胞集落刺激因子至造血恢复。每天监测血象、生化，每周检测血药浓度、CMV-DNA、真菌G/GM试验。1.4.5 植入证据及随访 移植后每天检查血常规，中性粒细胞0.5109 L-1的首日为粒细胞植入时间，当不需要血小板输注情况下血小板连续3 d 20109 L-1的首日为血小板植入时间。移植后1个月患儿行性染色体核型分析(性别不同者)、DNA指纹图(性别相同者)等检查来证明患儿造血重建细胞来源，移植后3个月可进行血型鉴定(血型不合者)。所有患儿均随访至2015年5月，中位随访时间19.4个月(5-28个月)，观察移植后全部患儿植入情况、移植并发症及总体生存等情况。1.5 主要观察指标 全部患儿移植后造血重建(中性粒细胞、血小板植活时间等)、移植相关并发症(感染、移植抗宿主病等)、植入情况及移植疗效(总体生存率等)相关指标。1.6 统计学分析 采用SPSS 13.0统计软件进行统计学处理，生存分析采用Kaplan-Meier方法。2 结果 Results 2.1 造血重建 两组均随访至2015年5月，治疗组随访5-28个月，中位随访时间为18.1个月，10例患儿均获造血重建，中性粒细胞0.5109 L-1的平均时间为15.8 d，血小板20109 L-1的平均时间为22.2 d。对照组随访6-27个月，中位随访时间为20.7个月，10例患儿均获造血重建，中性粒细胞0.5109 L-1的平均时间为15.4 d，血小板20109 L-1的平均时间为21.3 d。全部患儿均能较好耐受预处理方案，预处理期间无严重并发症发生。2.2 移植相关并发症 治疗组中发生移植物抗宿主病3例，其中急性移植物抗宿主病2例，度和度各1例，慢性移植物抗宿主病1例，移植物抗宿主病发生率为30%，按照发生部位分为肠道1例、肝脏1例、皮肤1例，最终1例患儿因度肝脏移植物抗宿主病无法控制死亡，移植后还发生肺部感染3例，最终有1例患儿因肺部侵袭性真菌感染出现呼吸窘迫综合征死亡，其余8例患儿均存活，移植后还发生败血症2例、出血性膀胱炎2例、巨细胞病毒血症及皮肤软组织感染各1例，均得到有效控制。对照组10例患儿中，2例发生移植物抗宿主病，均为急性，移植物抗宿主病发生率为20%，部位均在肠道，分度为度，最终都能有效控制，4例发生肺部感染，因肺部感染死亡2例，这2例患儿都是因为弥漫性肺炎无法控制死亡，其余8例患儿均存活。2.3 移植疗效 全部患儿自移植结束后开始随访观察，随访至2015年5月，中位随访时间19.4个月(5-28个月)，通过统计生存情况，治疗组患儿因并发症死亡2例，其余8例存活，总生存率为80%，最长生存时间已达28个月，对照组患儿因并发症死亡2例，其余8例存活，总生存率为80%，最长生存时间已达27个月，两组患儿总生存率无显著差异。两组患儿生存曲线见图1。治疗组对照组1.00.20累积生存函数0 5 10 15 20 25 30t (存活/月)图1 两组患儿Kaplan-Meier生存曲线Figure 1 Kaplan-Meier survival curves of children in the two groups表1 治疗组患儿基本资料 Table 1 Basic data of 10 children with severe aplastic anemia in the treatment groupNo.性别年龄(岁)HLA配型输注有核细胞数(108/kg)输注CD34+细胞数(106/kg)中性粒细胞0.5 109 L-1时间(d)血小板20109 L-1时间(d)随访时间(月)并发症结局1男35/108.473.25+13+185肺炎、肠道移植物抗宿主病死亡2女36/105.382.52+15+1912肺炎存活3女46/1010.842.97+18+2214肺炎存活4男55/105.566.81+16+2416肝脏移植物抗宿主病死亡5男65/107.993.37+20+2318出血性膀胱炎、败血症存活6女75/1015.5414.73+19+2419败血症存活7男87/1014.2210.16+16+2621出血性膀胱炎存活8女85/1016.399.09+15+2522巨细胞病毒血症存活9男96/108.964.12+17+2226皮肤移植物抗宿主病存活10男145/1011.162.90+16+1928皮肤软组织感染存活3 讨论 Discussion重型再生障碍性贫血是一种严重的骨髓造血功能衰竭性疾病，由于患者三系极度减低，发生致命性出血与感染的风险极大，严重威胁着患者的生命6。对于无HLA全相合同胞供者的重型再生障碍性贫血患者，一线治疗可应用抗人淋巴细胞免疫球蛋白联合环孢素的免疫抑制疗法，但治愈率极低且出现疗效可能需要半年以上或更长的时间，且治愈后复发率较高，治疗过程中仍离不开输注成分血以及抗感染等对症支持治疗7，同时有研究表明接受普通免疫抑制治疗的重型再生障碍性贫血患儿发生远期克隆性疾病转化率较高8，最终仍然不能避免再次使用异基因造血干细胞移植治疗9。目前异基因造血干细胞移植已成为治疗重型再生障碍性贫血的最有效方法10，国内外专家指南中均推荐全相合异基因造血干细胞移植是重型再生障碍性贫血的首选治疗方案11，国内早共识有HLA匹配的同胞供者行异基因造血干细胞移植治疗作为儿童重型再生障碍性贫血的首选治疗方案12，该治疗方案已被国外多个中心指南推荐并被广泛实践，如英国血液病学标准委员会指南推荐有全相合同胞供者的患者首选异基因造血干细胞移植8。 异基因造血干细胞移植使得越来越多的恶性血液病患者得以治愈。根据供受者间编码人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)的基因位点的相合程度可分为全相合异基因造血干细胞移植与单倍体造血干细胞移植。中国接受异基因造血干细胞移植的患者中，大部分为亲缘相关的造血干细胞移植。对于重型再生障碍性贫血患儿来说，有HLA配型相合的供者进行异基因造血干细胞移植相当重要，但由于中国实行计划生育国策，导致有HLA配型相合的同胞兄弟姐妹的概率很低，找到全相合非血缘供者的概率亦较低，脐血库也不能满足患儿移植的需要，但几乎每一个患儿至少都有一个HLA配型单倍型相合的父母可以进行移植治疗13。随着移植技术的不断完善，单倍型异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血成为可能，这对于病情危重需要尽快进行移植的患儿来说非常重要，因此，单倍型造血干细胞移植成功打破了供者来源困难的局面，且父母供者具有较好的依从性14。单倍型异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血尚存在植入困难、造血及免疫重建延迟、移植相关死亡率高及易复发等缺点15，国内外有较多方法来诱导免疫耐受以解决植入困难及减少移植后相关并发症等问题，如体内选择性去除T细胞并增强免疫抑制16、提高CD34+干细胞回输数量等技术17，这使得单倍型异基因造血干细胞移植相关死亡率已显著减少。在免疫耐受这一关键环节中，T细胞活化、增殖并发挥生物学效应是移植物抗宿主病发生的中心环节18-19，移植物中活化的T淋巴细胞针对受体组织释放大量促炎细胞因子参与移植物抗宿主病的发生。移植最常用的免疫诱导方法是甲基泼尼松龙、环孢素、吗替麦考酚酯、他克莫司等多药联合应用诱导免疫耐受20，而这个方法延伸治疗重型再生障碍性贫血的研究很少。解放军北京军区总医院在前期工作的基础上，显著降低了预处理强度，创新性地采用移植后大剂量环磷酰胺诱导免疫耐受的新方法亦取得了较好的临床效果，供者采集经粒细胞集落刺激因子动员的骨髓及外周血干细胞联合应用移植，降低强度预处理，移植后+3 d应用环磷酰胺50 mg/kg，治疗组10例患儿均获造血重建，移植相关死亡率仅为20%，总生存率可达80%，临床疗效与全相合造血干细胞移植相当。大剂量环磷酰胺诱导耐受和给药时机，不影响移植后免疫重建，减少移植相关病死率，降低了重度移植物抗宿主病的发生率，在儿童重型再生障碍性贫血的治疗上取得了令人鼓舞的结果。解放军北京军区总医院前期做了较多的移植后应用环磷酰胺诱导免疫耐受的相关临床工作21-22，国内其他单位尚无应用环磷酰胺诱导免疫耐受的相关报道。移植成功需要解决2个关键性问题：首先是保证造血干细胞的植入，同时避免致死性移植物抗宿主病的发生；其次使移植后达到良好的免疫功能重建23。Huang等24研究结果表明在预处理方案中应用大剂量抗人淋巴细胞免疫球蛋白诱导免疫耐受，父、母作为单倍型供者的总生存率分别为69.5%和64.9%，他认为严重的移植物抗宿主病是导致移植失败的主要原因，通过避免发生致死性移植物抗宿主病，并且使移植后达到良好的免疫功能重建来提高移植的成功率。Luznik等25在移植后+3 d和+ 4 d应用环磷酰胺 (50 mg/kg)，首先报道了单倍型造血干细胞移植后较短时间内给予大环磷酰胺诱导免疫耐受的临床结果，研究显示环磷酰胺可以灭活活化供者及受者反应性T细胞，保护造血干细胞不受损伤。解放军北京军区总医院按照Luznik教授的观点设计预处理新方法，在移植后+3 d使用高剂量环磷酰胺，结果显示能取得较好的植入，降低了重度移植物抗宿主病发生，在儿童重型再生障碍性贫血的治疗上取得令人鼓舞的结果。单倍体异基因造血干细胞移植的总体疗效与全相合异基因造血干细胞移植相似，国内外也已有相关文献报道26-27，研究认为移植后短时间应用大剂量环磷酰胺是诱导免疫耐受的新方法，可为临床实践应用提供理论依据。此次研究结果同样显示大剂量环磷酰胺诱导免疫耐受在单倍型造血干细胞移植中安全有效，疗效与全相合造血干细胞移植相当，适合于临床推广应用。致谢：衷心感谢解放军北京军区总医院血液科全体医护人员。作者贡献：试验设计、实施、评估、资料收集、成文为第一作者及并列第一作者，试验实施为其余作者，通讯作者审校及对文章负责。利益冲突：所有作者共同认可文章内容不涉及相关利益冲突。伦理问题：按照国务院医院管理条例规定如实告知患者及其监护人治疗的风险，患者及其监护人对治疗均签署知情同意书，治疗方案经解放军北京军区总医院医学伦理委员会批准；医生资质：通讯作者行造血干细胞移植工作已20余年，为国内最早开展单倍型造血干细胞移植工作，干预实施者大部分为副主任医师，同类手术既往完成500余例次；医院资质：解放军北京军区总医院为中华骨髓库管理中心备案的造血干细胞移植、采集医院。文章查重：文章出版前已经过CNKI反剽窃文献检测系统进行3次查重。文章外审：文章经国内小同行外审专家双盲外审，符合本刊发稿宗旨。作者声明：第一作者郭智对于研究和撰写的论文中出现的不端行为承担责任。论文中涉及的原始图片、数据(包括计算机数据库)记录及样本已按照有关规定保存、分享和销毁，可接受核查。文章版权：文章出版前杂志已与全体作者授权人签署了版权相关协议。4 参考文献 References1 郭智,陈惠仁,刘晓东,等.单倍型异基因造血干细胞移植治疗儿童重型再生障碍性贫血J. 中华实用儿科临床杂志, 2014,29(15):1145-1148.2 中华医学会儿科学分会血液学组,中华儿科杂志编辑委员会.儿童获得性再生障碍性贫血诊疗建议J.中华儿科杂志,2014,52(2):103-106.3 傅晓燕,谢晓恬,蒋莎义,等.抗胸腺细胞球蛋白治疗儿童再生障碍性贫血的临床研究J.中华儿科杂志,2011,49(3): 226-230.4 Locasciulli A, Oneto R, Bacigalupo A, et al. 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