Jupiter柱-用于蛋白质和多肽的提纯.doc

Jupiter柱-用于蛋白质和多肽的提纯首页|化验室管理|化验室安全|化验室设计|分析方法|分析工培训|色谱技术|原子吸收|LIMS系统|语音室|留言板|求职招聘|仪器调剂 Jupiter柱 用于蛋白质、低聚物和高分子的分析和提纯 2 孔径为300Å，用于蛋白质大分子(分子量大于15,000)，低聚物和高分子的分析； 2 在pH1.5-10范围内稳定使用3000小时； 2 分析、纯化过程中不改变蛋白质分子的； 2 有5µ,10µ,15µ的固定相可供选择； 2 每根5µ的柱子都有出产测试谱图。 峰型锐利效能高 JupiterTM 设计用来分析和纯化蛋白质和大分子物质。超纯硅胶(99.99%)和致密的键合相使峰型变得更加锐利，并且几乎对分离的蛋白质没有特殊的吸附。致密的键合相和较大的硅胶表面积使得JupiterTM 柱能够承受更高的样品负荷。峰形锐利的峰形，对蛋白质没有特殊的破坏性吸收使得JupiterTM柱成为极佳的生物分析提纯柱。 PICTURE (P137，F1) 肽类激素 规格: 2504.6mm 流动相: A:0.1%三氟乙酸水溶液 B:0.1%三氟乙酸溶于乙腈/水(90:10) 梯度: a)8min内A/B(90:10)到A/B(74:26)(B每分钟增加2%) b)6min内A/B(74:26)到A/B(70:30)(B每分钟增加0.57%) 流速: 1.0mL/min 检测: UV214nm 样品: 1. 8-精催产素(半胱-酪-异亮-谷酰胺-天门冬酰胺-半胱-脯-精-甘-NH2) 2. 血管加压素(半胱-酪-苯丙-谷酰胺-天门冬酰胺-半胱-脯-精-甘-NH2) 3. 4-丝-8-异亮催产素(半胱-酪-异亮-丝-天门冬酰胺-半胱-脯-异亮-精-NH2) 4. 催产素(半胱-酪-异亮-谷酰胺-天门冬酰胺-半胱-脯-亮-甘-NH2) 在pH1.5-10中稳定 JupiterTM特殊的键合工艺获得了高键合率和键合匀称性，另外，致密的键合也使得JupiterTM柱在pH1.5-10的范围内有3000小时的使用寿命，对pH值的宽广适应性使得JupiterTM柱更容易洗脱含蛋白生物活性剂的流动相。 低三氟乙酸条件 当使用ESI把样品组分导入质谱系统时，三氟乙酸的存在实际上是一种缺陷。三氟乙酸在常规的工作浓度(0.1%)时，由于它作为竞争离子，形成粒子对的能力较强，使得质谱系统中样品离子化的程度降低。所以，三氟乙酸的存在虽然改变了峰的形状，但明显降低了LC/ESI-MS系统的灵敏度。而JupiterTM柱，在三氟乙酸只含0.01%的条件下，对蛋白质的分离也能也能得到很好的峰形。 PICTURE (P138，F1)蛋白质在0.1%三氟乙酸下运行 柱子: Jupiter 5 C4 300Å 规格: 2504.6mm 货号: 00G-4167-E0 流速: 1.0mL/min 流动相: A:0.1%三氟乙酸水溶液 B:0.1%三氟乙酸溶于乙腈 梯度: 20min内A/B(75:25)到A/B(5:95) 检测: UV214nm 温度: 35 样品: 1.胰岛素 2.胰蛋白酶原 3.乳清蛋白 4.肌红蛋白 5.碳酸酐酶 快速LC/MC分析 2 降低分析时间，溶剂使用量和色谱柱平衡时间，在某些应用上可以降低70%左右。 2 虽然样品的通过速率增加了大概70%。但是保持了保留很好的灵敏度、分辨率和质谱数据的精度。 以下是用JupiterTM 5µ300ÅLC/MC 502.0柱和Jupiter 5µ300Å2502.0mm柱，做蛋白质和多肽样品的分析比较。 PICTURE (P138，F2)蛋白质在0.1%三氟乙酸下运行 柱子: JupiterTM 5 C4 300Å 规格: 2504.6mm 货号: 00G-4167-E0 流速: 1.0mL/min 流动相: A:0.01%三氟乙酸水溶液 B:0.01%三氟乙酸溶于乙腈 梯度: 20min内A/B(75:25)到A/B(5:95) 检测: UV214nm 温度: 35 样品: 1.胰岛素 2.胰蛋白酶原 3.乳清蛋白 4.肌红蛋白 5.碳酸酐酶 PICTURE (P138，F3、4)LC/MS(C18) 样品: 1.细胞色素C 2.小牛血清蛋白 3.肌红蛋白 质谱: HP5989 扫描范围:在1秒内500-1800 A: 柱子: Jupiter 5 C18 300Å 规格: 2502.0mm 货号: 00G-4053-B0 流速: 0.2mL/min 流动相: A:0.1%三氟乙酸水溶液 B:0.1%三氟乙酸溶于乙腈 梯度: 60min内A/B(95:5)到A/B(5:95) B: 柱子: Jupiter 5C18 300Å 规格: 502.0mm 货号: 00G-4053-B0 流速: 0.2mL/min 流动相: A:0.1%三氟乙酸水溶液 B:0.1%三氟乙酸溶于乙腈 梯度: 45min内A/B(95:5)到A/B(5:95) 节省70%的分析时间 2 减少溶剂用量和柱子成本； 2 使用快速梯度洗脱时有很好的分辨率； 2 用于建立方法的一款很好的柱子。 例如多肽之类的大分子用反相色谱柱分离的机理首先是吸附和解吸，大部分的多肽在流动相中的有机含量未达到某一程度时，均被保留在色谱柱上；只要有机溶剂浓度到达时，就会被快速的洗脱下来。因此，溶剂组成轻微的变化对多肽洗脱的保留时间有戏剧性的影响，当使用短柱子时(50mm)，希望分析时间减短，就特别需要快速变化的梯度来达到洗脱所需要的有机物含量。以下是分别使用长柱子(250mm)和短柱子(50mm)来分离多肽的对比图。 PICTURE (P139，F1)蛋白质使用Jupiter C18分析 柱子: Jupiter 5 C18 300Å 检测: UV220nm 流速: 1.0mL/min 进样量: 5L 样品: 1.碱性磷酸盐 2.氰钴胺素 3.核糖核酸 4.胰岛素 5.铁(传递)蛋白 6.胰蛋白酶阻化剂 A: 规格: 2504.6mm 货号: 00G-4053-E0 流动相: A:0.1%三氟乙酸水溶液 B:0.1%三氟乙酸溶于乙腈 梯度: a)7min内A/B(95:5)到A/B(74:26)(B每分钟减少3%) b)3min内A/B(74:26)到A/B(66:34)(B每分钟减少2.67%) c)10min内A/B(66:34)到A/B(46:54)(B每分钟减少2%) B: 规格: 504.6mm 货号: 00B-4053-E0 流动相: A:0.1%三氟乙酸水溶液 B:0.1%三氟乙酸溶于乙腈 梯度: a)1min内A/B(100:0)到A/B(80:20)(B每分钟减少20%) b)1.5min内A/B(80:20)到A/B(65:35)(B每分钟减少10%) c)1.5min内A/B(65:35)到A/B(53.5:46.5)(B每分钟减少7.67%) d)2min内A/B(53.5:46.5)到A/B(53.5:46.5)(B恒定) PICTURE (P139，F2)蛋白质使用Jupiter C4分析 柱子: Jupiter 5 C4 300Å 流速: 1.0mL/min 检测: UV220nm 进样量:5L 样品: 1.碱性磷酸盐 2.氰钴胺素 3.核糖核酸 4.胰岛素 5.铁(传递)蛋白 6.胰蛋白酶阻化剂 A: 规格: 2504.6mm 货号: 00G-4167-E0 流动相: A:0.1%三氟乙酸水溶液 B:0.1%三氟乙酸溶于乙腈 梯度: a)7min内A/B(95:5)到A/B(74:26)(B每分钟减少3%) b)3min内A/B(74:26)到A/B(66:34)(B每分钟减少2.67%) c)10min内A/B(66:34)到A/B(46:54)(B每分钟减少2%) B: 规格: 504.6mm 货号: 00B-4167-E0 流动相:A:0.1%三氟乙酸水溶液 B:0.1%三氟乙酸溶于乙腈 梯度: a)1min内A/B(100:0)到A/B(80:20)(B每分钟减少20%) b)1.5min内A/B(80:20)到A/B(65:35)(B每分钟减少10%) c)1.5min内A/B(65:35)到A/B(53.5:46.5)(B每分钟减少7.67%) d)2min内A/B(53.5:46.5)到A/B(53.5:46.5)(B恒定) 质量保证 在柱子的整个生产过程当中，产品质量是被严格跟踪而得到保证的。 每一根5µ的JupiterTM柱子都有一份分析认证书。认证书所含的内容包括每一批次 Jupiter柱的填料检测结果，保证柱子间和批次间的稳定性和重现性。以下是每根5?JupiterTM柱子的测试信息。 l 颗粒分析 -粒径 -孔径 -粒径分布 -比表面积 l 总金属残留含量 l 键合率 -总含碳量 -表面覆盖率 l 出厂测试 -稳定性 -金属敏感度 -疏水性 -蛋白质标准测试 -长效性测试(pH稳地性) -电子扫描显微镜测试(测量表面光滑度和颗粒形状) 重现性 以下是JupiterTM柱对不同物种的细胞色素C分离的谱图，用于测试不同批次产品之间的重现性。 PICTURE (P140，F1)蛋白质 柱子: JupiterTM 5 C18 300Å 规格: 2504.6mm 货号: 00G-4053-E0 流动相: A:0.1%三氟乙酸水溶液 B:0.1%三氟乙酸溶于乙腈 梯度: 15min内A/B(75:25)到A/B(45:55)(B每分钟增加2%) 流速: 1.0mL/min 检测: UV220nm 样品: 1.马细胞色素C 2.牛细胞色素C 3.狗细胞色素C 毛细柱 2 0.30mm，0.50mm，0.70mm内径的高效玻璃衬里柱； 2 对微量样品分析的高灵敏度； 2 填充与JupiterTM分析柱一致的填料，便于分析方法的移植应用； 2 在LC/MS系统中稳定的表现并且适于多种梯度条件； 2 1/8英寸(3mm)的外套柱管具有很高的强度和耐用性。 用Jupiter?填料的液相色谱毛细柱除了具有常规尺寸分析柱的特性外，提高了对微量样品分析的灵敏度。Jupiter毛细管柱所用的硅胶填料球形度高，表面光滑，保证它的柱效很高并且可以稳定使用较长时间。高纯的硅胶和特殊的键合工艺使得硅胶表面的键合非常致密，因而Jupiter?毛细柱中残留的硅醇基团不足以干扰样品的保留和洗脱，对分离峰形的影响降到了最低程度。 半制备和制备柱 2 使用JupiterTM5µ产品的键合技术生产10µ，15µ硅胶基体填料； 2 填料球形度好，表面光滑，机械强度高； 2 统一的孔径结构，高负载量； 2 高pH稳定性，易于柱清洗 Jupiter?柱使用的是相同工艺的硅胶键合填料，粒径为10µ和15µ，如果在制备产品中混入其它粒径的填料（例如3µ和5µ），在分离过程中，将很容易察觉到这些变化。 需要的填料较少 JupiterTM制备柱的填料粒子密度非常小，这意味着只需要用较少的填料来填充柱子，对于大量的制备系统来说，可以省下相当的操作费用。 寿命长 优异的硅胶和键合技术使得Jupiter?柱子的使用寿命更长，在pH1.5-10的范围内使用，只要及时清洗柱子，就可以增加柱子的使用时间。 PICTURE (P142，F1)阳离子肽标准物 柱子: Jupiter 5 C18 300Å 规格: 2504.6mm 货号: 00G-4053-E0 流速: 1.0mL/min 流动相:A:0.1%三氟乙酸水溶液 B:0.1%三氟乙酸溶于乙腈 梯度: 20min内A/B(100:0)到A/B(60:40)(B每分钟增加2%) 检测: UV210nm 样品: 1. +1锕-甘-甘-甘-亮-甘-甘-丙-甘-甘-亮-赖-酰胺 2. +2锕-赖-酪-甘-亮-甘-甘-丙-甘-甘-亮-赖-酰胺 3. +3锕-甘-甘-丙-亮-赖-丙-亮-赖-甘-亮-赖-酰胺 4. +4锕-赖-酪-丙-亮-赖-丙-亮-赖-甘-亮-赖-酰胺 PICTURE (P142，F2)蛋白质 柱子: Jupiter 5 C4 300Å 规格: 504.6mm 货号: 00B-4167-E0 流速: 1.0mL/min 流动相: A:0.1%三氟乙酸水溶液 B:0.1%三氟乙酸溶于乙腈 梯度: a)1min内A/B(100:0)到A/B(80:20)(B每分钟减少20%) b)1.5min内A/B(80:20)到A/B(65:35)(B每分钟减少10%) c)1.5min内A/B(65:35)到A/B(53.5:46.5)(B每分钟减少7.67%) d)2min内A/B(53.5:46.5)到A/B(53.5:46.5)(B恒定) 检测: UV220nm 样品: 1.碱性磷酸盐 2.氰钴胺素 3.核糖核酸 4.胰岛素 5.铁(传递)蛋白 6.胰蛋白酶受阻剂 PICTURE (P142，F3)生物活性肽 柱子: Jupiter 5 C18 300Å 规格: 2504.6mm 货号: 00G-4167-E0 流速: 1.0mL/min 流动相: A:20mM KH2PO4，pH4.0 B:乙腈 梯度: a)5min内A/B(95:5)到A/B(80:20) b)13min内A/B(80:20)到A/B(60:40) 检测: UV214nm 样品: 1.(血管)舒缓激肽 2.神经降压素 3.蛙皮素 4.Eledoisin PICTURE (P142，F4)胰岛素遗传变体 柱子: Jupiter 5 C18 300Å 规格: 2504.6mm 货号: 00G-4053-E0 流速: 1.0mL/min 流动相: A:0.1%三氟乙酸水溶液 B:0.1%三氟乙酸溶于乙腈 梯度: 20min内A/B(70:30)到A/B(68:32) 检测: UV210nm 样品: 1.牛胰岛素 2.人类胰岛素 3.猪胰岛素 PICTURE (P143，F1)转移核糖核酸片