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文档简介

PCR试剂：ddH2ObufferdNTPMgCl2模版uPdpTaq 仪器及器具：移液器：2.5l , 10l, 100l 。枪头：小白，黄。PCR小管。大小管架。小小管架。冰盒。记号笔。镊子。废液缸。离心机。步骤：小小管架放在冰盒中。用镊子从小管盒中挑出小管，小管插在架上。大试管架上依次放上ddH2O，buffer，dNTP，MgCl2，模版，uP，dp，Taq 。等待溶解。引物用299ml ddH2O溶解。依次加入：ddH2O 31.5lbuffer 5ldNTP 4lMgCl2 4l模版DNA 3luP （20M） 1ldp （20M） 1lTaq 0.5l先打开试剂管盖，再上枪头，可有效保证枪头少受污染避免下意识的使枪头朝上动作的发生。用过的枪，枪头朝桌里放置。以小体积向大体积中加入的原则加入试剂。边打入液体边把枪向后退，保证枪头伸入液面下一点点即可，以免拿出枪头的时候带出过多溶液。加过的试剂向后退一排摆放。每加入一种试剂都尽量充分混匀，必要是可以更换大些的枪头，反复吹吸。用完后把枪调回最大量程。放入PCR仪中，编辑程序。开始。琼脂糖凝胶电泳试剂琼脂糖TAE 样品GoldeniewMarker仪器及器具称量纸锥形瓶量筒20l枪小白枪头EP手套，棉手套电泳槽及梳子凝胶呈像系统优盘步骤：1. 取称量纸，斜对折。留折痕。放在称上，开称，自动调零。用小勺取事先计算好量的琼脂糖，倒入干净的锥形瓶中，尽量不要让粉末沾在内壁上。用量筒量取25 ml TAE ，倒入锥形瓶。2. 用20l枪，上小白枪头，吸1.25l（0.05%）的Goldeniew，插入液面，反复吸吹，退枪头，调回最大量程。3. 把锥形瓶放入微波炉，中低火，加热3min后观察继续加热，直至看不到颗粒为止。戴EP手套，取8孔电泳槽及梳子，冲洗擦干。退掉EP手套。4. 戴EP手套，右手棉手套。取出锥形瓶，把溶液倒入电泳槽。插入梳子。等待30min冷却，计时。尽快清洗锥形瓶。5. 凝固后，戴EP手套，先两端起开一点梳子，再将梳子完全拔出。拿出胶放如电泳缓冲液中。上样孔在负极一端。退掉EP手套。6. 在干净的EP手套上用20l枪点若干6buffer，各1l，按顺序吸出样品各5l，用枪吹吸与buffer混合。7. 上样，枪应尽量垂直。当看不清加样孔时，先打下一点样品，待有色样品沉淀后即可显示出明显的上样孔轮廓。8. 接通电源，+ -极，电压85伏特，恒压。（一般6的会有两条带，而10的只有一条带。）9. 电泳到适当位置后，拔下阴极，关掉电泳仪。戴EP手套，拎出胶版，推出胶。放在左手手心。10. 524，右手裸手打开凝胶呈像系统开关。右手抽出抽屉，左手把胶放在中间位置。反退手套。推上抽屉。11. 打开QO，file/doc，开紫外，调节到图片最佳效果，save保存，关紫外。file
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