高效液相法测定斯诺普利原料的含量.doc

高效液相法测定斯诺普利原料的含量高效液相法测定斯诺普利原料的含量更新日期：2011-09-26 杨正管刘锡钧 摘要本文建立了高效液相色谱法测定斯诺普利的色谱条件。以Shimpack CLC-ODS为固定相，甲醇：0.1的磷酸溶液（3565vv）为流动相，流速1.0 mlmin，柱温40，紫外检测波长220nm，内标物苯巴比妥，内标法定量，在所检测的浓度范围内（3.3841692gml），峰高比与样品浓度之间的线性关系良好（r0.9999）。日内差5.41，日间差6.39，原料药中杂质峰与药物峰分离良好，方法的重现性好。由测定结果表明，该方法操作简便，灵敏度高，分析速度快，可以作为斯诺普利的含量测定方法。 关键词斯诺普利高效液相色谱 Determination of S-nitrosocaptopril by HPLC Yang Zhengguan，Liu Xijun （Department of Clinical Pharmacology，Fuzhou General Hospital of Nanjing Military，Fuzhou） AbstractThe HPLC method was founded to determination of S-nitrosocaptopril.The chromatographic condition：stationary phase was Shimpack CLC-ODS，mobile phase was a mixture of methanol：0.1 phosphate acid in a ratio of 365（vv）at flow rate of 1.0 ml.min1，detector was set at 220 nm，internal standard was barbiphenyl.There is linear relationship between concentration of 3.384 gml and 1692 gml.The precision of method were5.4（inter-day）and 6.39（intra-day）.The raw material and impure material of S-nitrosocaptopril was well separated.The results show that the method is simple，fast and accurate. Key wordsS-nitrosocaptoprilHPLC 斯诺普利（S-nitrosocaptopril，简称CapNO）是以卡托普利（Cap）为化学母核，将后者的巯基改造为亚硝酰巯基（SNO）后形成的一种在体内既可释放一氧化氮（NO），又具有血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）双重性质的一类新化合物1。其可抑制血管紧张素转化酶，减少血管紧张素的生成和防止缓激肽酶的降解；具有的NO特性，可直接对抗已生成的血管紧张素、肾上腺素等体内缩血管物质的作用，因此，斯诺普利具有良好的抗高血压作用2。文献检索表明，美国、日本、韩国等国家关于本品的原料药合成、生化作用和药理作用的研究较多，但是，由于无法获得其纯净的晶体，尚未开发成产品。福州总院留美学者贾力博士在国际上首次采用简易的水相合成方法合成了斯诺谱利并获得了该物质较纯的结晶物，有关方法已经获得中国专利3。本文采用高效液相色谱法研究了测定其原料含量的色谱条件。 1仪器、试剂和药品 UV-2201紫外分光光度计（日本岛津）；惠普-1100高效液相色谱仪（美国惠普公司）；pHS-3C数字式pH计（上海理达仪器厂）；斯诺普利（福州总院药理科合成）；甲醇（分析纯上海试剂四厂昆山分厂）；磷酸（分析纯广州化学试剂分公司）；异丙醇（分析纯福建师范大学附属试剂厂）；乙酸乙酯（分析纯蚌埠化学试剂厂）；蒸馏水为双重蒸馏水，新鲜使用。 2方法 2.1紫外吸收光谱精密称取1.34 mg斯诺普利，置于50 ml容量瓶中，配成26.8gml的溶液，于UV-2201紫外分光光度计上，在200600 nm之间绘制光谱，未见明显的吸收峰；再称取30 mg斯诺普利于100ml容量瓶中，配成300 gml的溶液，在200600 nm之间绘制光谱。由图可知其最大吸收峰在331.90 nm，吸收度为1.030。由此可见，如选择331.9 nm作为检测波长，若浓度为纳克级就因响应值太低而检测不出信号。参考卡托普利的色谱条件4，将检测波长选在220 nm处。 图1斯诺普利测定的液相色谱图 A苯巴比妥B斯诺普利C斯诺普利苯巴比妥 2.2高效液相色谱法 2.2.1色谱条件色谱柱为C18，156.0 mm不锈钢柱，流动相为甲醇：0.1磷酸溶液（3565），固定相为Shimpack CLC-ODS，流速1.0 mlmin，检测波长220 nm，灵敏度为0.05 AUFS，柱温40，进样量5 l，色谱记录时间30 min。测其保留时间tR12.320.23 min，内标物保留时间tR10.090.14 min（见图2）。 图2HPLC测定斯诺普利的标准方程曲线 2.2.2系统适用性试验5色谱柱的理论塔板数（n）在上述操作条件下，注入5 l CapNO（16.92 gml）共进样3次，量出CapNO的tR和半高峰宽（Wh2）后，求出其理论塔板数为：n1799 分离度（R）在上述操作条件下，定量注入5 l配制的混合样品（含斯诺普利和苯巴比妥），求出二峰之间的分离度R4.24。 拖尾因子（T）依药典规定（附录VD），配制3种不同浓度的CapNO溶液（33.84，169.2，1692 gml），分别进样3次后，均为：0.9T1.0。2.2.3标准曲线的建立标准贮备液的配制精密称取斯诺普利169.2 mg，置于50ml容量瓶中，用流动相溶解，稀释至刻度，摇匀，制成浓度为3384 gml的溶液，放置冰箱中备用。内标物的配制精取苯巴比妥0.019 g，置于50 ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。再从中吸取5 ml，置于50 ml容量瓶中，稀释到刻度，摇匀后，作为内标物备用。标准曲线分别精密量取斯诺普利贮备液5 ml，2.5 ml，0.5 ml，0.1 ml，0.05 ml，0.01 ml置于10 ml容量瓶后，各分别加入2 ml内标物液，以流动相稀释至刻度，摇匀，分别取5 l进样，用3次测得的峰高比平均值（Y）对溶液的浓度（C）作图。在3.3841692 gml浓度范围内，峰高比和溶液的浓度呈线性关系，其回归方程为：Y0.0137053C0.00232754 r0.99996（n6）（见图2）。2.2.4精密度试验日间差分别取斯诺普利贮备液5 ml，0.5 ml，0.1 ml，0.01 ml置于10 ml棕色容量瓶后，各分别加入2 ml内标物液，以流动相稀释至刻度，摇匀，每隔24 h进样1