实验六 水中细菌总数和大肠菌群的检测.ppt

2010 4 30 实验六 实验六水中细菌总数和大肠菌群的检测 综合性实验 2010 4 30 实验六 前言 含目的及原理 各种天然水中常含有一定数量的微生物 水生性微生物 如光合藻类 土壤 空气微生物动物尸体及分泌物微生物生活污水中微生物微生物水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关 因而是评价水质污染程度的重要指标之一 细菌总数是指1mL水样中所含细菌菌落的总数 cfu g mL 可用稀释平板计数法检测 2010 4 30 实验六 水中大肠菌群的数量可用来判断水源是否被粪便污染 并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能 粪便污染指示菌的理想条件是 人畜粪便中的正常菌 且数量较粪便中其他菌多 受人畜粪便污染的环境中可检出 而在未受污染环境中无该菌存在 排出至环境后 该菌存活时间与肠道致病菌相当或略长 对氯等消毒剂及其他不良因素的抵抗力略强于肠道致病菌检出与鉴定方法比较简单 人畜肠道大肠菌群的可以满足上述理想条件 1 前言 含目的及原理 2010 4 30 实验六 1 前言 含目的及原理 国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标 因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查 我国 生活饮用水卫生标准 GB5749 85细菌总数1ml水中不超过100个大肠杆菌数1L水中不超过3个 若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水 大肠菌群数平均每升不得超过1000个经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水 大肠菌群数平均每升不得超过10000个 2010 4 30 实验六 大肠菌群的检测 多管发酵法 特征 G 无芽孢杆菌 兼性厌氧 在37 24h内能发酵乳糖产酸 产气 多管发酵法初发酵 适当稀释样品 乳糖发酵培养 产酸产气 分离培养 伊红美蓝 EMB 平板上划线分离 出现紫色 粉红色特征性菌落 复发酵验证 挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证 2010 4 30 实验六 本实验的目的 了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义 学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法 学习和掌握水中大肠菌群的检测方法 2010 4 30 实验六 2 材料与方法 2 1实验材料 仪器 试剂材料 自选 自来水 公园湖水 河水 仪器 高压灭菌锅 无菌培养皿 试管 吸管 接种环 德汉氏小管 温箱 载玻片 酒精灯 显微镜等 试剂 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂粉 伊红美兰琼脂培养基 水 乳糖 0 04 溴甲酚紫水溶液 胆盐 革蓝氏染色试剂 2010 4 30 实验六 2 材料与方法 2 2培养基的配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 用于水中细菌总数测定牛肉膏5g 蛋白胨10g NaCl5 0g 琼脂8g 蒸馏水1000ml pH7 0乳糖胆盐蛋白胨培养基 用于初发酵1 蛋白胨20g 牛胆盐5g 乳糖10g 0 04 溴甲酚紫水溶液25mL 调pH值后加 水1000mL pH7 2 7 4三倍浓缩液 3 除水以外 其余成分取三倍用量 分装 1 的培养基分装9ml 管 3 的培养基分装5ml 管或50ml 瓶 均装上德汉氏小管 灭菌条件 115 15min EMB培养基 用于大肠菌群菌落鉴定脱水培养基 按说明书操作 水用量为90 2010 4 30 实验六 2 材料与方法 2 3水样的采集自来水 先将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌 再开放水龙头使水流5min 以灭菌三角瓶接取水样以备分析 500ml采样瓶加15g L硫代硫酸钠溶液1 5ml 公园湖水 河水 在距岸边5m处 取距水面10 15cm的深层水样 先将灭菌的具塞三角瓶 瓶口向下浸入水中 然后翻转过来 除去玻璃塞 水即流入瓶中 盛满后 将瓶塞盖好 再从水中取出 如果不能在2h内检测的 需放入冰箱中保存 6h以内使用 2010 4 30 实验六 2 4细菌总数的测定1 按无菌操作法 将水样作10倍系列稀释 保证30 300菌落 平皿生活饮用水 自来水 深井水 100 10 1两浓度 水源水 河水 等 10 1 10 2 10 3 污水 10 2 10 3 10 42 选择3个适宜稀释度 吸取1mL于无菌培养皿 加入冷却至45 左右的牛肉膏蛋白胨培养基约15ml 立即混匀 静置使培养基凝固 每个稀释度作2个重复 3 将平皿倒置于37 培养箱内培养24 1h后取出 计算平皿内菌落数目 乘以稀释倍数 即得1mL水样中所含的细菌菌落总数 2 材料与方法 2010 4 30 实验六 2 4多管发酵法测大肠菌群自来水1 初发酵实验100mL水样两份 分别以无菌操作加入两个装有已灭菌的50mL的3 浓缩乳糖胆盐蛋白胨培养液烧瓶中 内有倒置小管 充分混匀 10mL水样10份 分别以无菌操作加入各装有5mL的3 乳糖胆盐蛋白胨的发酵试管中 内有倒置小管 混匀 以上材料置于37 恒温箱内培养24h 2 平板分离 上述各发酵管经培养24h后 将产酸产气的发酵管用接种环挑取一环发酵液于伊红美蓝培养基上划线 置于37 培养箱内培养24h 3 阳性菌落革兰氏染色 深紫黑色 具有金属光泽的菌落 紫黑色 不带或略带金属光泽的菌落 粉红色 中心色较深的菌落 各挑一种染色 4 G 特征性的菌落复发酵验证 可省 5 查表计算根据证实有大肠菌群存在的阳性管 瓶 数查 大肠菌群检数表 报告每升水样中的大肠菌群数 2 材料与方法 2010 4 30 实验六 2 4多管发酵法测大肠菌群公园湖水 河水将水样做1 10倍稀释 取适当的三个连续梯度 每梯度5份 水源水 轻度污染水 10mL 1ml 10 1水样1ml 中度污染水 1 10 1 10 2 均用1mL 严重污染水 10 1 10 2 10 3 均用1ml 10ml以上水样用3 乳糖胆盐蛋白胨培养液 其他的用1 乳糖胆盐蛋白胨培养液 操作步骤同生活饮用水 2 材料与方法 2010 4 30 实验六 稀释与接种 13 实验五 10 2 10 3 9mL 300ml水样 9mL 1mL 平行实验 对照实验 10 1 9mL 9mL 10ml 3 培养基 1ml 1 培养基 2010 4 30 实验六 2010 4 30 实验六 3 结果与分析 3 1水中细菌总数 用二位有效数字 2010 4 30 实验六 3 结果与分析 16 3 2水中大肠菌群最大可能数 2010 4 30 实验六 查MPN表 若检测水样的浓度是比该体系中的高或低 该如何查表 2010 4 30 实验六 3 结果与分析 3 3实验讨论大肠菌群的定义是什么 为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌 EMB培养基含有哪几种主要成分 在检查大肠菌群时 各起什么作用 经检查 水样是否合乎饮用标准或污染程度 2010 4 30 实验六 实验要求 预习及准备 1 四人一组 第十周内完成 2 设计实验 确定检测水样