注射用水细菌内毒素分析方法确认方案

注射用水细菌内毒素分析方法确认方案文件编号：YZ-VP-2020-00 方案起草 日期 方案审核 日期 方案批准 日期 药业有限公司目 录1. 概述32. 确认目的33. 适用范围34. 确认小组成员及职责35. 风险评估36. 确认方案编制依据47. 确认内容47.1 确认人员培训47.2 确认前准备工作47.3 确认所需仪器47.4 确认所需试剂47.5 确认所需供试品57.6 试验过程58. 偏差处理69. 确认结果评定与结论610. 再验证周期711. 确认进度安排712. 附件713. 变更历史71. 概述：依据细菌内毒素分析方法确认的试验原理，采用本公司注射用水进行细菌内毒素分析方法确认，得到其无干扰浓度。本方案中细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。2. 确认目的：为了确保注射用水细菌内毒素分析方法的可靠性，需在实际检验条件下，确认其对细菌内毒素检查试验有无干扰作用，以确认所采用的方法适合于注射用水的细菌内毒素检查。3. 适用范围：适用于注射用水细菌内毒素分析方法的确认。4. 确认小组成员及职责：姓名工作部门或职务职责质量管理负责人负责方案及报告的批准质量保证负责人负责跟踪方案的实施质量控制负责人小组组长；负责方案的组织协调工作；负责各阶段确认结果汇总及评价；负责小组成员的培训及培训效果的评价质量控制负责方案及报告的起草，并按照批准后的方案进行方法确认，并完成所有数据分析及试验记录质量控制负责供试品的取样5. 风险评估：确认小组成员对注射用水细菌内毒素分析方法确认方案进行了风险评估分析，并制定了相应的控制措施以最大限度地降低风险。具体情况见下表：风险识别风险分析评估SPDRPN风险级别控制措施分析方法验证活动的立项管理方法验证没有按照公司验证标准管理规程的要求进行立项44464高级对分析方法验证活动进行立项，并开展验证分析方法验证方案管理分析方法验证活动无方案，或方案没有审核、审批过程34448高级由验证小组验证方案，并对验证方案进行审核和批准人员人员培训不到位操作不符合要求32212中级加强培训考核，确保操作符合要求人流、物流交叉交叉污染45120中级人流、物流通道分开确认所需仪器仪器没有校准或验证42324中级确认所需仪器必须经过校验或验证环境及空气洁净度级别不符合要求影响实验结果55125中级安装空气净化系统及检测装置6. 确认方案编制依据：中国药典2015年版四部。7. 确认内容：7.1 确认人员培训：参加确认人员经过确认方案、相关操作规程及偏差处理管理规程的培训，培训合格后方可参与确认。见人员培训记录。7.2 确认前准备工作7.2.1 进行确认前，所有与确认有关的仪器应进行过校验，仪表、计量器具等应校正合格。见确认所需仪器、仪表、量具清单及校正情况。7.2.2 进行确认前，检查设备及仪器操作、维护等文件，确认所需的相关文件齐全，并经过批准。见确认所需文件。7.3 确认所需仪器：序号仪器名称型号编号有效期至1电热鼓风干燥箱2洁净工作台3旋涡混合器4内毒素凝胶法测定仪7.4 验证所需试剂：序号名称生产厂家批号规格配制批号1细菌内毒素工作标准品2鲎试剂3细菌内毒素检查用水-575酒精7.5 验证所需供试品：序号名称来源数量1注射用水2注射用水3注射用水7.6 试验过程：应进行3次独立的平行试验。7.6.1 试验准备：玻璃器皿用自来水彻底洗净，再用纯化水反复冲洗三遍以上，控干后用锡箔纸包好后放入金属容器内，放置入电热鼓风干燥箱。将电热鼓风干燥箱调至250，待电热鼓风干燥箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少半小时。达到规定时间后，关断电源，待电热鼓风干燥箱温度自然降至室温。玻璃器皿用锡箔纸包装，在不打开包装的情况下，可在两周内使用。否则须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素。7.6.2 鲎试剂灵敏度复核：详见鲎试剂灵敏度复核操作规程。7.6.3 干扰实验：目的是检验在某一浓度下的供试品对于鲎试剂与内毒素反应有无干扰作用。使用的供试品溶液应为未检验出内毒素切不超过所使用的鲎试剂的最大有效稀释倍数的溶液。7.6.3.1 制备内毒素标准对照溶液取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，用75酒精棉球擦似乎后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。按照标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置漩涡混合器上混合15分钟。然后进行稀释，制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2、0.5、0.25（为所复核的鲎试剂对的标示灵敏度），每稀释一步均应在漩涡混合器上混合30秒钟。7.6.3.2 制备含内毒素的供试品溶液：根据公式MVD=cL/，确定注射用水的最大有效稀释倍数MVD=1，将注射用水稀释一倍后将细菌内毒素工作标准品稀释成4个浓度即为2、0.5、0.25，即得含内毒素的供试品溶液。7.6.3.3 鲎试剂的准备：取规格为0.1ml/支的鲎试剂，用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后制成2、0.5、0.25四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒。7.6.3.4 合格标准：两c在0.5-2.0范围内，且Et均在0.5Es-2.0Es范围内，说明该供试品浓度稀释至0.02mg/ml确已排除干扰作用，在低于或等于此浓度的情况下即可使用细菌内毒素检查法。见干扰试验检验记录。7.6.4 供试品细菌内毒素检查：7.6.4.1 在细菌内毒素检查中，按下表制备试验溶液，每批供试品必须做2支供试品管和2支供试品阳性对照，同时每次试验必须做2支阳性对照和2支阴性对照。编号内毒素浓度/被加入内毒素的溶液平行管数A无/供试品溶液2B2/供试品溶液2C2/检查用水2D无/检查用水27.6.4.2 合格标准：保温60min2min后观察结果。若阴性对照溶液D的平行管均为阴性，阳性对照溶液B的平行管均为阳性，阳性对照溶液C的平行管均为阳性，试验有效。若溶液A的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定。若溶液A的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定。若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。复试时，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供试品瓿符合规定，否则判定供试品不符合规定。若供试品的稀释倍数小于MVD而溶液A出现不符合规定时，需将供试品稀释MVD重新实验，再对结果进行判断。见细菌内毒素检验记录。8. 偏差处理：在确认过程中应严格按照方案执行，发现任何异常情况，应分析查明偏差原因后制定纠正预防措施，重新进行确认。见偏差记录。9. 确认结果评定与结论：确认小组根据确认结果起草确认报告，并报确认与验证领导小组审批。确认与验证领导小组对确认结果进行综合评审，并作出结论，确认合格后发放合格证书。10. 再验证周期：若产品的分组或原检查条件发生改变可能影响检验结果时，根据实际情况，对分析方法进行评估以决定是否需要再确认，以保证使用的分析方法能