培养基适用性验证.doc

培养基适用性验证方案起草人： 方案审核人：方案批准人：XXXXX药业股份有限公司目 录1. 验证目的22. 参照标准23. 验证项目24. 验证小组人员及职责35. 验证可接受的标准36. 验证步骤37. 菌液制备68. 适用性检查69. 控制菌检查 .710. 操作方法.8 11.结论.111. 验证目的：需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基及控制菌培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数及测定和控制菌适用性检查。2. 参照标准：2015版中国药典微生物限度检查法。3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查和控制菌适用性检查。4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:小组人员职务姓 名所在部门职 务组 长陈丽玲质量部经 理组 员林功玑质量部QC主任组 员王水龙质量部检验员组 员吴小燕质量部检验员4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。4.2.2认真观察并做好验证原始记录。4.2.3对实施验证的结果负责。4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。4.3.1.3负责验证方案的批准工作。4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。4.3.1.5负责验证报告的批准工作。4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。4.3.2.3负责验证方案的实施。4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。4.3.2.5参与验证结果的评价工作。4.3.3质量部职责4.3.3.1负责验证方案的审核工作。4.3.3.2负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。4.3.3.3负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。4.3.3.4负责验证资料和报告的审核工作。4.3.3.5负责验证文件回收、归档管理工作。5. 合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。6. 试验材料：6.1. 被验证产品：溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基、肠道菌增菌液培养基、RV沙门菌增菌液培养基、麦康凯琼脂培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、麦康凯液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基6.2. 仪器设备：6.2.1. LXD型压力蒸汽灭菌器6.2.4. JMP-250霉菌培养箱 (2025)6.2.5. SHP-250生化培养箱 (3035)6.2.7 101-1电热鼓风干燥箱6.3. 验证用培养基 名称生产厂家批号胰酪大豆胨琼脂培养基广东环凯微生物科技有限公司3104855沙氏葡萄糖琼脂培养基广东环凯微生物科技有限公司3104805胰酪大豆胨液体培养基广东环凯微生物科技有限公司3104807溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基广东环凯微生物科技有限公司3102493三糖铁琼脂培养基广东环凯微生物科技有限公司3104624肠道菌增菌液培养基广东环凯微生物科技有限公司3104849RV沙门菌增菌液培养基广东环凯微生物科技有限公司3104847麦康凯琼脂培养基广东环凯微生物科技有限公司3104829木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基广东环凯微生物科技有限公司3104852甘露醇氯化钠琼脂培养基广东环凯微生物科技有限公司3104674麦康凯液体培养基广东环凯微生物科技有限公司3104763紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基广东环凯微生物科技有限公司3104750胰酪大豆胨琼脂对照培养基中国食品药品检定研究院135025-201402沙氏葡萄糖琼脂对照培养基中国食品药品检定研究院溴化十六烷基三甲铵琼脂对照培养基中国食品药品检定研究院135019-201001三糖铁琼脂对照培养基中国食品药品检定研究院135028-201501肠道菌增菌液对照培养基中国食品药品检定研究院135032-201501RV沙门菌增菌液对照培养基中国食品药品检定研究院135029-201501麦康凯琼脂对照培养基中国食品药品检定研究院135009201503木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂对照培养基中国食品药品检定研究院135033-201501甘露醇氯化钠琼脂对照培养基中国食品药品检定研究院麦康凯液体对照培养基中国食品药品检定研究院紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基中国食品药品检定研究院135031-2015016.4. 验证用菌株：(第 代)验证菌株培养基培养温度培养时间（小时）大肠埃希菌胰酪大豆胨液体培养基30351824金黄色葡萄球菌胰酪大豆胨液体培养基30351824枯草芽孢杆菌胰酪大豆胨液体培养基30351824白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂培养基202523（天）黑曲霉菌沙氏葡萄糖琼脂培养基202557（天）铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养基30351824沙门菌胰酪大豆胨液体培养基303518247. 菌液制备 7.1. 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、沙门菌的新鲜培养物胰酪大豆胨液体培养基中，于3035培养1824小时。取经3035培养1824小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、沙门菌的新鲜培养物胰酪大豆胨液体新鲜培养物1ml加入到9mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，10倍稀释至10-610-7不大于100cfuml的菌悬液备用。7.2.取白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，于2025培养4872小时。取经2025培养4872小时的白色念珠菌用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，10倍稀释至10-5不大于100cfuml的菌悬液备用。7.3.取黑曲霉菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基上，于2025培养57天，加入35ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成每1ml含孢子数不大于100cfuml的菌悬液备用。8.适用性检查： 8.1.取铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置3035培养72小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置2025培养120小时，计数。8.2取铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置3035培养70小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置2025培养120小时，计数。 试验时间 年 月 日 完成时间 年 月 日验证菌株平皿号供试品组cfuml对照培养基组cfuml回收率%应70%铜绿假单胞菌(培养3天计数)1-2-平均值金黄色葡萄球菌(培养3天计数)1-2-平均值枯草芽孢杆菌(培养3天计数)1-2-平均值白色念珠菌(培养5天开始计数)1-2-平均值黑曲霉菌(培养5天开始计数)1-2-平均值结论复核人 试验人 9.控制菌检查控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。常用培养基适用性检测项目及所用菌株见下表。控制菌检查培养基检测项目试验菌株沙门菌RV沙门菌增菌液培养基促生长能力乙型副伤寒沙门菌抑制能力金黄色葡萄球菌木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基促生长能力+指示能力乙型副伤寒沙门菌三塘铁琼脂培养基指示能力乙型副伤寒沙门菌耐胆盐革兰阴性菌肠道菌增菌液培养基促生长能力大肠埃希菌、铜绿假单胞菌抑制能力金黄色葡萄球菌紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基促生长能力+指示能力大肠埃希菌、铜绿假单胞菌大肠埃希菌麦康凯液体培养基促生长能力大肠埃希菌抑制能力金黄色葡萄球菌麦康凯琼脂培养基促生长能力+指示能力大肠埃希菌铜绿假单胞菌溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基促生长能力铜绿假单胞菌抑制能力大肠埃希菌金黄色葡萄球菌甘露醇氯化钠琼脂培养基促生长能力金黄色葡萄球菌抑制能力大肠埃希菌10、操作方法10.1 RV沙门菌增菌液培养基适用性检查分别接种不大于100cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。促生长能力检查标准：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管和对照培养基管试验菌应生长良好。检验结果： 分别接种不少于100cfu的金黄色葡萄球菌于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。抑制能力检查标准：被检培养基管和对照培养基管试验菌均不得生长检验结果： 10.2木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基适用性检查分别用涂布法接种不大于100cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。促生长能力+指示能力检查标准：被检培养基与对照培养基平板比较，被检培养基平板和对照培养基平板试验菌的菌落大小、生长情况、形态特征、指示剂反应与对照培养基一致。检验结果： 10.3三塘铁琼脂培养基适用性检查分别用涂布法接种不大于100cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。指示能力检验标准：被检培养基平板和对照培养基平板试验菌的菌落大小、形态特征及指示剂反应均一致。检验结果： 10.4肠道菌增菌液培养基适用性检查分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌于铜绿假单胞菌被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。促生长能力检查标准：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管和对照培养基管试验菌应生长良好。检验结果： 分别接种不少于100cfu的金黄色葡萄球菌于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。抑制能力检查标准：被检培养基管和对照培养基管试验菌均不得生长检验结果： 10.5紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基适用性检查分别用涂布法接种不大于100cfu的大肠埃希菌于铜绿假单胞菌被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。 促生长能力+指示能力检查标准：被检培养基与对照培养基平板比较，被检培养基平板和对照培养基平板试验菌的菌落大小、生长情况、形态特征、指示剂反应与对照培养基一致。检验结果： 10.6麦康凯液体培养基适用性检查分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。促生长能力检查标准：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管和对照培养基管试验菌应生长良好。检验结果： 分别接种不少于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。抑制能力检查标准：被检培养基管和对照培养基管试验菌均不得生长检验结果： 10.7麦康凯琼脂培养基适用性检查分别用涂布法接种不大于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。促生长能力+指示能力检查标准：被检培养基与对照培养基平板比较，被检培养基平板和对照培养基平板试验菌的菌落大小、生长情况、形态特征、指示剂反应与对照培养基一致。检验结果： 10.8溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基适用性检查分别用涂布法接种不大于100cfu的铜绿假单胞菌于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。促生长能力检查标准：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管和对照培养基管试验菌应生长良好。检验结果： 分别接种不少于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。抑制能力检查标准：被检培养基管和对照培养基管试验菌均不得生长检验结果： 10.9甘露醇氯化钠琼脂培养基适用性检查别用涂布法接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，