NK细胞治疗肿瘤项目简介.doc

NK细胞治疗肿瘤项目简介细胞治疗是继化疗、手术、放疗之后的的一个新兴生物医药领域，是治疗疾病最好的方法之一。肿瘤的细胞治疗是一种全身性的免疫疗法，是把人体自身或异体的免疫细胞，进行体外培养、增殖，形成数量众多，活性超强的免疫抗癌细胞，再回输到患者体内，发挥强大的抗癌作用。与手术、放疗及化疗对免疫损伤不同，细胞治疗能大大提高患者的抗癌免疫力，清除手术治疗不能触及的血液、淋巴或转移到其它组织中的癌细胞、甚至是休眠的癌细胞，相比之下治疗更加彻底。免疫活性细胞具有促进自身愈合和再生的能力，细胞治疗有长期的效果。用细胞治疗疾病，毒副作用小，安全有效。NK细胞是机体抗肿瘤、抗病毒的主要免疫活性细胞。其它几个具有抗癌功能的细胞包括杀伤性T细胞、巨噬细胞、网状内皮细胞（DC）。由于巨噬细胞内含有很多炎症因子，目前还无法用于细胞治疗。DC是一类免疫调节细胞，主要作用是抗原加工并呈递给T细胞，再靠T细胞发挥抗癌作用；所以，DC一般是用于制备治疗性疫苗；美国FDA已经批准了一个前列腺癌的DC治疗性疫苗。T细胞的抗癌作用需要再次激发才有效，只有经DC活化后才能起作用；T细胞初次遇到抗原时并无杀伤作用，而只是形成免疫记忆；只有再次遇到抗原后，才能激发出强有力的杀伤功能。现在很多人用的CIK中主要是经细胞因子活化的T细胞。其实，未经DC抗原呈递、单独靠细胞因子活化的杀伤T细胞的疗效是非常有限的。NK细胞的全名叫自然杀伤细胞，其特点之一是初次遇到就有杀伤作用。NK细胞还可与抗体联合使用，通过抗体介导的杀伤效应（ADCC），一方面赋予NK细胞特异性，另一方面使抗体具有更强的治疗效果；现在临床上使用的大多数抗癌单抗的治疗机理中，NK细胞往往起着重要的作用。另外，T细胞和网状内皮细胞必须用自身的，因为网状内皮细胞不能呈递抗原给异体的T细胞，而异体的杀伤性T细胞会引起移植物抗宿主反应；但NK细胞可以用同种异体的。往往正是因为这些自身细胞的免疫功能差，才发生肿瘤等疾病。再用那些功能本来就差的细胞来治疗，疗效难以太好。NK细胞则不同，可以用健康人的NK细胞，有望产生更好的疗效。和CIK及网状内皮细胞治疗相比，目前用NK细胞治疗的较少，主要原因是NK细胞的制备较难，但这正是我们的专长。大量制备活化的NK细胞是开展NK细胞研究及应用的前提。制备人NK细胞的方法主要有两种：一是采用抗体并通过红细胞或磁性微球的分离法，直接从PBMC中分离NK细胞；可以快速获得NK细胞，但由于NK细胞在PBMC中的比例很少，所得NK细胞的数目不多，只适用于小规模制备NK细胞及分析性研究；此外，正常的NK细胞一般都处于抑制状态，直接使用时，即使有足够量的NK细胞也很可能没有抗癌作用。二是体外扩增法，从PBMC中扩增培养NK细胞；也就是用PBMC或者已经分离的NK细胞，通过一些特殊细胞因子的刺激，使NK细胞在体外扩增。但是，至今大多体外扩增技术只能使NK细胞扩增几十倍，且纯度低、活性差、成本高。我们采用基因工程方法，构建了能够有效刺激人NK细胞体外扩增的工程细胞，用该细胞的膜蛋白与人PBMC在体外共培养2-3周，不但能使NK细胞扩增500-1000倍以上，NK细胞比例达90%以上，而且还可增强NK细胞的活性，使其对K562瘤细胞的体外杀伤率达90%以上。我们的NK细胞扩增技术已经成熟，已在中美两国临床试用多例，证明安全、有效；我们正在着手将其产业化。我们最近又开发了一种新的NK细胞体外扩增法，扩增效果可达4万倍以上。这意味着，仅采几毫升血就可以制备大量的NK细胞，进一步降低了成本，提高了疗效。我们的这些NK细胞体外扩增法是全球独一无二的。我们的NK细胞扩增技术已经审请了中国专利。现代治疗肿瘤是讲求综合治疗，尽管细胞治疗肿瘤安全有效，但是与手术治疗、放疗及化疗联合使用还能发挥出最大的疗效，清除手术治疗后残存的瘤细胞及不适合手术治疗的白血病细胞，减少化疗及放疗的毒副作用。目前不存在一种治疗方法谁取代另外一种的情况，只能说细胞治疗是未来治疗肿瘤的一种趋势，在肿瘤临床治疗中的作用将会越来越大。产品优势：现在国内的细胞治疗，主要是CIK与DC细胞。虽然NK细胞的治疗效果更好，很多医院都想采用，但由于技术方面的原因，国内临床上很少使用。因此，我们的NK细胞扩增专利技术很有可能占领现有生物治疗市场，成为领军品牌。我们拥有核心的NK细胞扩增技术，达到了国际最领先水平，并且已经申请了专利保护。我们的产品已经在中美两国试用，安全有效；目前在中国已有很多医院要与我们合作，国内权威的医院院士工作站也已经与我们开展深层次的合作，正准备更高层次的报批工作。市场预测：全世界20%的新发癌症病人在中国，24%的癌症死亡病人在中国，目前中国的癌症生存患者和治愈患者仅为13%。“癌症已成为一个全球性公共健康问题” 。近三十年，全球癌症发病数以年均3%5%的速度递增，3/4新增病例发生在新兴工业国家及发展中国家；而中国的肿瘤防治形势更为严峻。中国每年肿瘤的死亡病例在200万例以上，以人均NK治疗三次，每次NK细胞扩增试剂2000元计算（目前合作的就是这个价格），每人6000元，以10病人来计算，一年的销售就超过12亿元的市场容量，而且很多省份都是把这类治疗作为医保报销范畴，应该有更大的市场想象空间。这里仅说了NK细胞的治疗，不包括我们其它产品的市场销量。投资收益：由于我们的产品技术含量很高，产品的毛利很高，达到90，因此很有市场前景，有必要时也可以适当降价，扩大销量，取得更佳的社会效益与经济效益。经营思路：我们建立公司后，马上为建立细胞治疗中心的三甲医院提供NK细胞扩增试剂等试剂（这只是我们公司经营最基本部分）。为了扩大市场的占有率，进一步培育细胞治疗市场，为了能更大程度地分享医疗市场巨大的治疗收益，我们会逐步与其他三甲医院，联合建立自主品牌的细胞治疗中心；利用我们公司专业化的优势，指导并参与他们的经营过程，最终在全国建立起细胞治疗连锁中心。目前细胞治疗每个疗程的收费一般在2万至6万之间，一个病人一般进行3个疗程的治疗。以目前较便宜的细胞治疗来算，一个病人一个疗程2万元，人均约6万元，如果我们建立30个自己的细胞中心，每个中心每年治疗人数按1800人计算，那么1800人30个中心54000人，那么营业额就有540006万324000万元，这是一个巨大的市场，更有巨大的社会效益与经济效益。技术团队核心成员张明杰，男，博士，教授，公司首席科学家，美国食品药品管理局/生物制品评价与研究中心/分子病毒实验室高级研究员，FDA生物制品及诊断试剂评审专家组长/著名微生物学专家（Microbiologist），美国罗森制药集团首席科学家。西北工业大学“国际联合空间免疫学”实验室主任、客座教授，安徽省院士工作站驻站专家及肿瘤免疫治疗中心技术主任。主要从事分子病毒学与分子免疫学的研究，曾在美国疾病控制中心（CDC）、国立卫生研究院（NIH）从事博士后研究工作。用单克隆抗体技术治疗乙脑获得全军科技进步一等奖，并被评为1997年全国十大科技进展之一、获得美国福格地国际研究学者奖（Fogarty International Research Fellowship）、美国国家研究院高级研究学者奖（Senior Research Associateship. US National Research Council）、多项美国食品药品管理局奖等重大奖项。在国际专业刊物上发表论文30余篇。拥有美国专利2个（其中一个是降血糖肽），申请中国专利4个，3个已授权，1个在实审阶段。郭坤元，男，博士，公司临床医学总监，血液、肿瘤专业主任医师，教授，博士生导师，中央保健会诊专家，中国肿瘤生物治疗学会常委，中国生物技术协会肿瘤治疗学会常委，中国医院协会临床技术学会委员，中国造血干细胞学会委员，卫生部三类技术准入（推荐）专家。美国血液学会、国际血液学会、国际组织治疗学会委员。中国肿瘤生物治疗国外医学、免疫分册等6份杂志编委。承担国家和省部级课题18项，获得省部级科研成果8项，包括国家级自然科学基金2项，广东省自然科学基金多项，广东省医学科学基金多项，广州市重大基金会多项，解放军医学重大基金1项。特长：细胞治疗、骨髓移植，特别是恶性血液肿瘤生物治疗、造血干细胞移植。黄庆生，男，博士，公司技术总监，副教授，硕士生导师，西北工业大学生命科学院/微生物及免疫学科主任，主要从事分子生物学、病毒学、免疫学等方面的研究。1993-1996年第四军医大学病原生物学硕士，1996-1999年第四军医大学病原生物学博士，1999-2001年中国军事医学科学院医学博士后。2007年获美国ORISE(OKA RIDGE INSTITUTE FOR SCIENCE AND EDUCATION)资助，在美国食品药品管理局生物评价研究中心从事感染与免疫研究。先后主持和参加7项国家自然科学基金课题及国家973计划项目，发表论文30余篇，获军队科技进步一等奖1项，参加军队及国家研究课题4项，申请专利3项。投资及管理团队核心成员俞中，男，医学及工商管理硕士，任多家医疗类公司的法人与董事，有较强的组织领导能力，在医疗领域有良好的人脉，有较强的资金实力及良好的投资经验。冯国富 ，男，硕士，注册执业药师/高级职业经理人，上市药企销售总监，具有较强的组织与市场营销能力，在医药系统内有较好人脉。技术方案 前面我们只重点介绍了NK细胞治疗技术。由于我们的技术因队核心人员有在美国食品药品管理局（FDA）15年以上的研究、评审经历，我们在另外的细胞治疗如糖尿病的细胞治疗及DC治疗性疫苗等方面都具有极强的技术优势，都是我们的系列产品开发的项目。我们新公司成立，GMP车间建成后我们都将进行报批与生产，打造行业领军企业。1、NK细胞体外培养增效剂 1）以人PBMC为原始材料的NK细胞体外扩增流程如下： 无菌操作，抽取外周抗凝血100ml 用淋巴细胞分离液分离PBMC 用生理盐水洗三次，活细胞计数 细胞用300ml 无血清培养液悬起 加入该产品1支，自体血浆30ml 混匀后加入6孔板中，每孔5ml 共10块板（60孔） 37 CO2孵箱培养第6天、第10天、第14天、第18天分别半换液一次（轻轻吸取孔中的培养液上清2ml，再给孔中补加2ml的无血清培养液）（通常是扩增2周左右时的NK细胞活性最高，3周左右时的NK细胞数目最多） 根据具体使用目的，在扩增活化的适当阶段离心收获细胞 即为扩增并活化的人NK细胞，适于进一步研究及应用2）NK细胞体外培养增效剂的扩增效果 把人外周血单核细胞在我们的培养体系中培养2周，NK细胞的绝对数扩增了500倍，NK细胞的比例从原来的10%左右扩增为92%左右，不需要要任何纯化步骤，就超过用目前市场上纯化NK细胞的试剂盒纯化以后的纯度。3）NK细胞体外培养增效剂增强NK细胞的杀伤活性 采用我们的NK细胞体外扩增系统，不但能使NK细胞的数目增多，而且能使NK细胞的杀伤活性大大提高。我们扩增的NK细胞对K562靶细胞的杀伤活性超过NK92细胞系，远远强于NKL细胞系。4）扩增的NK细胞具有很强的抗HIV-1的功能 体外培养扩增的NK细胞及其条件培养液都有很强的抑制HIV-1的活性。2、糖尿病干细胞1）干细胞制备及Treg细胞驯化器 取患者外周血淋巴细胞，在体外分2部分培养，一部分作为Treg细胞与2天后输入。2）胰岛素干细胞 患者的另外一部分外周血淋巴细胞经我们的干细胞扩增技术，将其中的干细胞扩增并诱导为分泌胰岛素的细胞后，于3周左右输入。治疗以后，血液中胰岛素水平明显升高。3、肝癌特异性 DC活化因子1）AFP/GM-CSF 刺激Dcs 诱导Hep G2肝癌细胞特异性的TCL AFP/GM-CSF 刺激Dcs 诱导Hep G2肝癌细胞特异性的TCL2DH：AFP/GM-CSF 刺激2天的高密度Dcs 2DL：AFP/GM-CSF 刺激2天的低密度Dcs 5DH：AFP/GM-CSF 刺激5天的高密度Dcs 5DL：AFP/GM-CSF 刺激2天的低密度Dcs 用我们的肝癌特异性DC活化因子刺激高密度DC，可明显提高网状内皮细胞对肝癌细胞的体外杀伤活性。2）不同刺激因子对DCs装载抗原能力的影响 我们的DC活化因子（最后一组）是有多种免疫活性因子组成的。和现在常用的AFP刺激法（第一组）、目前比较先进的AFP+GM-CSF联合刺激法（第二组）、及目前最为有效的AFP/GM-CSF融合蛋白质刺激法（第三组）相比，我们的产品是最好的。附：专利证书两份及央视关于生物治疗的相关报道2009年3月卫生部颁布医疗技术临床应用管理办法卫医政发【2009】18号，将生物治疗纳入第三类技术进行管理。2011年4月17日，中央电视台新闻联播节目对生物治疗作出了权威报道，称