β连环素在非小细胞肺癌中的表达及临床意义.doc

摘要】 目的 研究连环素在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床生物学意义。方法 采用免疫组化SP法分别检测60例肺癌组织及20例正常肺组织中连环素的表达。结果 60例NSCLC组织中连环素表达的阳性率为30.0% ，20例正常肺组织中连环素表达的阳性率为100.0%，差异具有统计学意义(P0.01)。有淋巴结转移的NSCLC中连环素的阳性表达率为13.51% ，无淋巴结转移者为56.52%，差异有统计学意义(P0.01)。TNM分期、期连环素的阳性表达率为45.83%，、期19.44%，差异有统计学意义(P0.05)。连环素在NSCLC组织中的表达与年龄、性别、病理类型、临床分型及分化程度无关(均P0.05)。结论 连环素可能与NSCLC的发生、TNM分期及淋巴结转移有关。 【关键词】 连环素 肺肿瘤 免疫组织化学肺癌在初次诊断时往往已发生了浸润和转移，细胞之间黏附作用的改变被认为在其间发挥重要作用1。连环素是细胞内重要的蛋白质分子，不仅与钙黏附蛋白相互作用介导细胞黏附，也是Wnt信号传导通路中的关键调节因子。有关文献对连环素在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及其临床价值尚存在争议2，3。本研究采用免疫组化的方法研究连环素在NSCLC组织中的表达及与临床病理学之间的关系,为揭示NSCLC的转移机制及治疗提供依据。1 对象与方法1.1 研究对象 标本取自2002年9月至2006年11月在我院住院手术切除的60例肺癌患者，男45例，女15例；年龄3681岁，平均58.93岁。所有患者术前均未行放疗和化疗。标本均经病理证实(鳞癌36例，腺癌24例)。根据1997年国际抗癌协会提出的TNM分期标准进行分期，其中I A期3例，I B期12例，A期0例，B期9例，A期12例，B期17例，期7例。对照组选择20例癌旁正常肺组织(距癌组织3 cm以上)。 所有标本均为福尔马林固定、石蜡包埋组织。连续4 m厚切片。1.2 方法1.2.1 主要试剂 鼠抗人连环素单克隆抗体（即用型）、SP通用试剂盒及DAB显色剂均购自北京中杉生物技术有限公司。1.2.2 免疫组化染色 采用SP免疫组化法，严格按照SP试剂盒说明进行，以PBS代替一抗作为阴性对照，阳性对照为正常支气管黏膜上皮。主要步骤如下:石蜡切片脱蜡水化，于枸橼酸盐缓冲液(pH 6.1)中行微波抗原修复，过氧化物酶阻断剂阻断内源性过氧化物酶活性，非免疫性动物血清阻断非特异性反应，滴加鼠抗人连环素单抗，4过夜。加生物素标记的第二抗体，加链霉抗生物素过氧化物酶溶液，DAB显色后自来水充分冲洗，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，镜检。1.2.3 结果判定 连环素阳性产物分布于细胞膜上，为粗细一致的棕黄色颗粒。标准参照Nakanishi等4的方法进行：高倍镜(400倍)下每个视野计数100个细胞，每张切片数5个视野，染色结果分为：(1)正常表达：肿瘤组织染色方式及强度与正常支气管上皮黏膜染色相同，切片内阳性细胞数90；(2)异常表达：包括异质性表达(细胞膜染色强弱不等，染色阴阳性细胞混杂，切片阳性细胞数90)、阴性表达(细胞膜染色缺失)及胞浆胞核染色。1.3 统计学处理 所有资料均经2检验进行分析。2 结 果2.1 连环素在正常肺组织及肺癌原发灶中的表达 20例正常肺组织中阳性表达率为100.00%（20/20），60例肺癌组织中的阳性表达率为30.00%(18/60),二者比较，差异有统计学意义（2=29.474，P0.01）。在异常表达的肺癌组织中11例出现了单独胞质表达,6例出现了缺失表达。2.2 连环素表达与临床病理特征的关系 NSCLC中淋巴结转移组连环素阳性表达率为13.51%，无淋巴结转移组为56.52%，差异具有统计学意义（P0.01）。连环素表达还与肿瘤TNM分期有关（P0.05）。连环素的表达与NSCLC患者的年龄、性别、肿瘤的病理类型、分化程度及临床分型均无关(均P0.05)。见表1。表1 NSCLC组织中连环素的表达与临床病理特征的关系（略）3 讨 论 连环素是胞质内糖蛋白，基因定位于人染色体3p21，分子量为92 kD。与连环素以互斥方式同E钙黏附素胞质尾部的连接素结合域结合并通过连环素与肌动蛋白及细胞骨架结合，调节E钙黏附素的黏附作用；同时连环蛋白参与Wnt信号通路，介导APC连环素Tcf/lef1构成的wgwnt信号传导通路，与胚胎发育及肿瘤有关5。 本研究发现连环素在NSCLC中胞膜表达显著减低，异常表达率为70%，有11例出现了单独的胞质表达，这与Kallakury等6在前列腺癌中的研究报道基本一致。其发生机制与连环素介导的Wnt信号通路有关。当Wnt信号途径失活时，该途径的负性调控因子glycogen synthase kinase 3（Gsk3）可使连环素及APC发生磷酸化，使连环素降解；而当Wnt激活时，Gsk3的功能受到抑制，连环素降解减少而在胞质中大量聚集并进入细胞核与DNA结合蛋白TCFLEF(T cell factorlymphoid enhancer factor)形成复合体，激活cyclinDl和myc等基因转录，诱导与肿瘤进展有关的细胞增殖7。 目前，连环素在NSCLC中表达的研究结果不尽一致。Kase等2在331例肺癌组织的研究中发现连环素的表达与病理分型、分化程度及淋巴结转移等无显著相关。徐红涛等3研究结果显示连环素的膜表达降低与NSCLC的低分化和淋巴结转移相关，与TNM分期无关。本研究显示连环素在鳞癌及腺癌的异常表达率分别是72.22%及66.67%，高分化和中低分化的异常表达率分别是37.50%及75%，差异均无统计学意义，I、II期肺癌和III、期肺癌中连环素的异常表达率分别是54.17%及80.56%，淋巴结转移组连环素的异常表达率是86.49%，与无转移组异常表达率43.48%相比，差异均有统计学意义。多组实验结果的差异，可能与连环素在肺癌组织中表达不稳定有关。本研究结果提示连环素可能在肺癌的发生及发展中发挥重要作用。 综上所述，连环素在NSCLC中出现了显著的表达下调，与NSCLC的TNM分期及淋巴结转移相关，提示检测连环素表达对评价肿瘤的生物学行为、指导治疗以及肿瘤转移机制的研究均具有重要意义。【参考文献】1 金倩;氯地酊联合激光治疗痤疮158例疗效观察J;广东医学;1997年10期 2 董新亭,李卫莉,张随学;自拟粉刺消治疗痤疮126例J;中国中医药科技;1999年06期 3 查旭山,陈修飏;寻常痤疮治疗体会J;江西中医药;/xyfm/class/.2002年05期 4 张随学 ,谭正辉 ,孙叶梅 ,李梅 ,俞玉芳 ,韩峰;3003例痤疮患者特征分析与控制对策J;中华医学美学美容杂志;/xyfm/class/.2002年06期 5 刘勇,王冬梅;痤疮的药物治疗J;临床医药实践杂志;2003年09期 6 高宜云;痤疮从肝论治J;中医药临床杂志;2004年03期 7 欧其平,林维山;中西医结合治疗痤疮J;中华皮肤科杂志;2004年09期 8 陈五一;痤疮辨治体会J;世界中医药;/yisheng/main/index.php.2007年03期 9 雷放;中药热敷治疗痤疮有效J;新中医;/book/main/index.php.1992年09期 10 李东华;异维生素A酸治疗痤疮J;新医学/;1993年10期 11 黄灿奇;针刺联合中药内服外敷治疗青少年痤疮临床观察D;南方医科大学;2011年 12 陈志彬;中医综合疗法对女性痤疮患者皮肤生理指标影响研究D;广州中医药大学;2011年 13 陈传伟;针刺干预慢性疲劳综合征的临床及作用机理研究D;广州中医药大学;2010年 14 Hamid Abdi;针刺对伊朗肥胖者的体重及抗热休克蛋白27、60、65、70的影响D;北京中医药大学;/book/main/index.php.2010年 15 陈玉骐;背俞穴刺络放血治疗痤疮的临床研究D;广州中医药大学;2009年 16 张随学;电针镇痛的脑功能磁共振初步研究D;复旦大学;2005年 17 庞莹;痤疮的流行病学及与雄激素受体基因多态性的相关研究D;中国医科大学;2008年 18 申鹏飞;“醒脑开窍”针刺方法治疗卒中后抑郁症基础与临床疗效及治疗机制研究D;天津中医学院;/qikan/class/?150.html.20