胎牛血清注意事项.doc

1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？ 将血清从冷冻箱取出后，先置于28冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在28时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20以下储存血清，并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O。若存放于4时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理？ 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清（400g，1-2分钟）或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37，沉淀会自然消失。 4、 如何避免血清中产生沉淀？ 按如下操作可避免沉淀的产生： （1）解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 （2）血清分装冻存时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一。 （3）勿直接由-20直接至37解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 （4）勿将血清置于37太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。 （5）血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 （6）若必须做血清的热灭活，请遵守56，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 5、 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？ 一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。6、 为什么要热灭活血清? 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。7、 有必要做热灭活吗? 实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量! 8、细胞培养中出现黑点是污染吗？如何处理？ 一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：（1）细胞生长过老，破碎的细胞残骸；（2）血清质量不好，反复冻融的结果；（3）配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长；（4）配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点；（5）培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。 9、 细胞培养中如何防止黑点生成？ （1） 尽可能地减少血清冻融次数。 （2） 培养基无需37水浴。 （3） 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2。 （4） 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。 （5） 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。使用前处理：大部分血清在使用前必须灭活处理，即5630分钟。灭活的目的是去除血清中的补体成分，避免补体对细胞产生毒性作用。血清经过灭活也会损失一些对细胞有利的成分，如生长因子，因此也有人提出血清不经灭活直接用于培养，这样做的前提是确认血清中不含补体成分。对于一些品质高的胎牛血清和新牛血清可以考虑不经灭活直接用于细胞培养。储存条件：血清一般储存于20，同时应避免反复冻融。购买大包装的血清后，首先要灭活处理，然后分装成小包装，储存于20，使用前融化。融化时最好现置于4。融化后的血清在4不宜长时间存放，应尽快使用。使用浓度：自从有了合成培养基，血清就是作为一种添加成分与合成培养基混合使用，使用浓度一般为520，最常用是10。过多血清容易使培养中的细胞发生变化，特别是一些二倍体的无限细胞系，迅速生长之后容易发生恶性转化。采购血清时，最好先从供应商处索取样品进行试验，选定一批后就要保留足够使用6个月至1年的量，直至用另一批经过预先试验的样品代替。第一类，最高级别的，是专门用于干细胞的胎牛血清1、Hyclone的特级胎牛血清. I) Z8 d# + 8 g目前，性能最好的血清，还是要说说Hyclone的特级胎牛血清，货号是SH30070.03，它是Hyclone的“招牌菜”。! j* o t0 x7 c( # 9 I* x3 gHyclone特级胎牛血清（Defined FBS），货号SH30070，是世界上唯一经过40纳米过滤的顶级胎牛血清，极佳的促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含量10EU/ml，血红蛋白含量10mg/dl。此血清可以广泛用于各种细胞培养，包含任何干细胞系的培养。 5 8 v7 6 i& T, s8 l因为美国那边有疯牛病，无法进口。实际上，40nm的过滤，已经将全部的病毒、支原体处理掉，同时，是用于科研级别的，洁净程度非常高。不让进口，只是我们国家为了保护本国畜牧业的一个手段，针对牛肉方面，而胎牛血清是受到殃及而已。2、Gibco的特级胎牛血清( Q X2 v/ K/ J% h稍次一点的是Gibco公司在美国原装生产的特级胎牛血清，这款血清，货号是16000-044是100nm过滤3次，内毒素和血红蛋白含量都可以与Hyclone的SH30070.03相媲美。也可以用于培养大部分的干细胞系。同样是美国来源，所以渠道特殊。* C5 b; g! t0 j1 f第二类，优等胎牛血清# I# y) T6 j! 9 t5 n9 N: E. d) e) q4 E: E1、Hyclone的加拿大优等胎牛血清/ F+ U+ e# K6 V1 S性价比最高的是Hyclone加拿大优等胎牛血清（Characterizend FBS）SH30396 血清采自加拿大，由hyclone公司总部的员工采集加工，采集方法，加工过程，检定标准与美国原产优等胎牛血清完全一致，市场价格低于美国原产的。经过3次100nm过滤，内毒素含量25EU/ml，血红蛋白含量25mg/dl。此血清，在2005年以前，是很多实验室选择血清的首选，价格适中，质量过硬，应用细胞非常广泛。现在同样的尴尬是，北美生产，属于疫区，无法正常进口。) 2 i2 C. O6 u, q1 - x; K2、Hyclone的澳大利亚胎牛血清大体与加拿大的优等血清是一样的，级别也非常相似，货号是SH30084，这个血清的血源是非疫区的，所以，各种级别都有，100ml、500ml市面上都能买到。$ a A o( b0 , t n3、Gibco的澳大利亚胎牛血清1 Q( j( K! m; 情况和Hyclone的澳大利亚胎牛血清差不多，市场价也是3200元/500ml左右。# x: s( R0 I# , E6 T& |; B) z这一级别的血清，也能用于干细胞培养，可是，不象特级胎牛血清那么优秀。: j3 , F1 c) M/ 因为，此胎牛血清属于澳大利亚生产的，不在疫区，可以正常报关进口，目前没有受到任何影响，所以，就目前而言，算是最好的胎牛血清了，有不少客户都此血清来培养干细胞，效果还是比较不错。第三类，一般级别的进口胎牛血清1、Hyclone的南美胎牛血清. L( k. S6 t/ ?: a N目前，市场上用的最多的Hyclone血清是南美胎牛血清(FBS) SV30087 ，此血清采自南美，在国内（兰州）过滤并测试检验，经三次100纳米过滤，根据中国商标法的规定标贴中文标签，内毒素含量10EU/ml,血红蛋白含量20mg/d。 此血清广泛用于各种肿瘤细胞的培养，还没有资料记载能够用于干细胞，也听说有少数人用于干细胞培养的，不过，因为本身血红素比较高，所以，最好不要用于干细胞， t7 W# Z+ k! V7 u2、Gibco的南美胎牛血清#这款血清，是Gibco针对Hyclone南美胎牛血清做的，价格比较贵，好像是1780元/500m。这款血清听说是在北京过滤分装的。3 U7 r# + N: T3 P/ a/ F d; # n1 J4 Y J) N7 S第四类，国产的各种系列胎牛血清) w9 V7 / H1 h1 _ d( |国产的胎牛血清，国内没有严格意义的胎牛血清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而国内都是剖腹产出胎牛，8小时左右取血，然后，进行过滤分装。所以，国产的胎牛血清