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肝 素 钠 效 价 检 测 方 法试剂:羊血浆(冰冻保存)、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2(用生理盐水配置)、8%柠檬酸钠溶液、8IUmg肝素钠标准溶液。4.2.2.2待检样品溶液的配置:精确称取肝素钠固体待检样品M mg,溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml,再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液,冷藏保存。估计M及V的计算公式为:样品估计效价MV100=258估算时V只尽量小于10且取整数,从而计算出M值。4.2.2.3 检测方法:将恒温水域调制37恒温,取出冰冻羊血浆,融化,并过滤,待用。取2组10只试管,分别加入标样110ul、120ul200ul,然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml,另一组加入待检样品溶液110ul、120ul200ul,同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。并将每只试管盖好管盖,倒转34次混匀,使内壁湿润,垂直放入37水域1h。1h后取出各管,检查各管的凝固程度,并记录确定标样及待检样的12凝固点及体积。凝固程度标准:完全凝固:溶液完全凝固,倒转试管并猛敲一下时,凝块不从管壁脱落。34凝固:溶液完全凝固,但当猛敲一下时,凝块能从管壁脱落。12凝固:大约一半体积的溶液凝固。14凝固:少量溶液凝固。0凝固:溶液悟凝固现象。若相邻两管跳过12凝固点则12凝固点的计算公式为V=V2-(V2-V1)(0.5-S1)(S2-S1)(S1:小凝固度;S2:大凝固度;V1:相邻两管大凝固度加入的微升数;V2:相邻两管小凝固度加入的微升数。)待检样品效价计算公式:4.2.2.4 F=待检样品估计效价标品12凝固点微升数样品12凝固点微升数4.2.2.5注意事项:4.2.2.6.1实验室操作环境必须控制在30以下。4.2.2.6.2在使用新开启羊血浆前,需检测羊血浆是否能够正常使用。取试管一只,加入0.8ml 0.25%CaCl2及过滤后的羊血浆1ml ,盖好管盖,倒转34次混匀,使内壁湿润,垂直放入37水域5min,5min后检查血浆是否凝固,如血浆凝固则可使用,未凝固则不能使用。4.2.2.6.3如在检测过程中,标样的12凝固点高于200ul,则需重新调整羊血浆的12凝固点。方法如下:取3组各10只试管 组一: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul8%柠檬酸钠 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 ul0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml 羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml组二: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul 8%柠檬酸钠 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 ul 0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml 组三: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul 8%柠檬酸钠 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 ul0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml将每只试管盖好管盖,倒转34次混匀,使内壁湿润,垂直放入37水域1h。1h后取出各管,检查各管的凝固程度,并记录确定标样的12凝固点及体积。如12凝固点在110ul200ul的,即可使用。选值最好在130ul170ul范围内。8%柠檬酸钠需用生理盐水配置。4.2.2 效价(羊血浆法)4.2.2.1、试剂:羊血浆(冰冻保存)、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2(用生理盐水配置)、8%柠檬酸钠溶液、8IUmg肝素钠标准溶液。4.2.2.2待检样品溶液的配置:精确称取肝素钠固体待检样品M mg,溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml,再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液,冷藏保存。估计M及V的计算公式为:样品估计效价MV100=258估算时V只尽量小于10且取整数,从而计算出M值。4.2.2.3检测方法:将恒温水域调制37恒温,取出冰冻羊血浆,融化,并过滤,待用。取2组10只试管,分别加入标样110ul、120ul200ul,然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml,另一组加入待检样品溶液110ul、120ul200ul,同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。并将每只试管盖好管盖,倒转34次混匀,使内壁湿润,垂直放入37水域1h。1h后取出各管,检查各管的凝固程度,并记录确定标样及待检样的12凝固点及体积。4.2.2.4凝固程度标准:完全凝固:溶液完全凝固,倒转试管并猛敲一下时,凝块不从管壁脱落。34凝固:溶液完全凝固,但当猛敲一下时,凝块能从管壁脱落。12凝固:大约一半体积的溶液凝固。14凝固:少量溶液凝固。0凝固:溶液悟凝固现象。若相邻两管跳过12凝固点则12凝固点的计算公式为V=V2-(V2-V1)(0.5-S1)(S2-S1)(S1:小凝固度;S2:大凝固度;V1:相邻两管大凝固度加入的微升数;V2:相邻两管小凝固度加入的微升数。)4.2.2.5 待检样品效价计算公式:F=待检样品估计效价标品12凝固点微升数样品12凝固点微升数4.2.2.6 注意事项:4.2.2.6.1实验室操作环境必须控制在30以下。4.2.2.6.2在使用新开启羊血浆前,需检测羊血浆是否能够正常使用。取试管一只,加入0.8ml 0.25%CaCl2及过滤后的羊血浆1ml ,盖好管盖,倒转34次混匀,使内壁湿润,垂直放入37水域5min,5min后检查血浆是否凝固,如血浆凝固则可使用,未凝固则不能使用。4.2.2.6.3如在检测过程中,标样的12凝固点高于200ul,则需重新调整羊血浆的12凝固点。方法如下:取3组各10只试管 组一: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul8%柠檬酸钠 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 ul0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml 羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml组二: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul 8%柠檬酸钠 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 ul 0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml 组三: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul 8%柠檬酸钠 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 ul0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8

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