布鲁氏杆菌抗体检测试剂盒(酶免ELISA法).docx

布鲁氏杆菌抗体检测试剂盒（酶免ELISA法）布鲁氏菌病概述：布鲁氏菌病是由布鲁氏杆菌（Brucella）引起的一种人畜共患性传染病。布鲁氏菌病流行于世界各地，我国主要流行于内蒙、东北，西北等牧区，其中以羊布氏杆菌病最为常见，其次是牛种布鲁氏菌。布鲁氏杆菌的宿主是家畜、家禽和野生动物，与人类有关的传染源主要是羊、牛及猪，其次是犬，一般通过接触感染的动物或者吃被感染的食物传播给人类，感染者临床症状主要表现为反复发作的发热，伴有多汗、游走性关节痛或乳房胀痛、神疲乏力。故又称为波浪热或地中海弛张热。当患者发烧后一个月左右，属于布鲁氏杆菌急性感染期，血清抗体最先是IgM升高，随后是IgG升高，IgA在其后呈低水平上升。在血清免疫学检查，布鲁氏杆菌抗体ELISA的检测，对布鲁氏杆菌感染的早期诊断及预后治疗具有重要的作用！产品简介：德国IBL布鲁氏杆菌抗体检测试剂盒采用了酶免ELISA法定性定量检测样本血清/血浆中布鲁氏杆菌IgM/IgG/IgA抗体，布鲁氏杆菌IgM抗体检测试剂盒主要用于鲁氏杆菌急性期感染抗体的检测，布鲁氏杆菌IgG/IgA抗体检测试剂盒主要用于鲁氏杆菌慢性期感染抗体的检测。布鲁氏杆菌IgM/IgG/IgA抗体ELISA法联合检测，灵敏度高、特异性强，对布鲁氏菌病诊断有着很好的效果。检测原理：本试剂盒采用了间接ELISA原理，用于检测血清/血浆样本中布鲁氏杆菌抗体。酶标板用纯化灭活的布鲁氏杆菌抗原包被。加入待测样品后孵育。如果待测样品中存在布鲁氏杆菌抗体，孵育过程中就会和抗原结合。随后加入抗Ig的酶标单抗，它就会与已和抗原结合的抗体反应。加入底物，如果待测样品中存在布鲁氏杆菌特异性抗体，就会出现颜色反应，最后在酶标仪上450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。试剂盒组成：1、酶标板：1块/96孔。2、标准品（冻干品）：2瓶。3、样品稀释液：120ml/瓶。4、检测稀释液A：110ml/瓶。5、检测稀释液B：110ml/瓶。6、底物溶液：110ml/瓶。7、浓洗涤液：130ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。8、终止液：110ml/瓶（2N H2SO4）。9、封膜：5张。10原版使用说明书：1份。包装规格：96T/盒储存有效期：原包装试剂盒储存28于阴凉干燥处，有效期为12个月。试验需自备器材和试剂：1、 酶标仪2、微量加液器及吸头，EP管3、蒸馏水或去离子水，全新滤纸标本要求：1、血清全血标本请于室温放置2小时或4一夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20或-80保存，但应避免反复冻融。2、血浆可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8 C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20或-80保存，但应避免反复冻融。3、其它生物标本请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20或-80保存，但应避免反复冻融。4、 样本处理血清或血浆标本推荐稀释5,000倍。注：以上标本置4保存应小于1周，-20或-80均应密封保存，-20不应超过1个月，-80不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。试验前需做好的准备：实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。1、样品稀释每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,600 pg/ml，将其稀释为400 pg/ml后，再做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别稀释成400 pg/ml，200 pg/ml，100 pg/ml，50 pg/ml，25 pg/ml，12.5 pg/ml，6.25 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。如配制200 pg/ml标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml ） 400 pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。2、检测溶液A临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100l/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10l检测溶液A加990l检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。3、检测溶液B临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。检验方法：壹：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100l，余孔分别加标准品或待测样品100l，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。贰：弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100l（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37反应60分钟。叁：温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400l/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。肆：每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100l，酶标板加上覆膜37反应60分钟。伍：温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350l/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。陆：依序每孔加底物溶液90l，酶标板加上覆膜37避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。柒：依序每孔加终止溶液50l，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止