一细菌的形态学检查

医学微生物学 实验一 细菌的形态学检查 右江医学院微生物学与免疫学教研室 一 严格遵守实验室规则 严格执行无菌操作 二 实验前做好预习 做到心中有数 三 示教的实验要仔细观察 联系有关理论积极思考 四 认真分析实验结果 探讨实验原理 得出可能的结论 若实验结果与理论不符合时 要加以分析讨论 以逐步提高自己的科学思维能力 五 实验课后 须按时按要求递交实验报告 六 防止发生各种事故 医学微生物学实验课的要求 一 爱护公物 节约使用实验材料 二 进入实验室必须穿实验服 必要的文具应放在抽屉里 个人物品如书包 衣物等一律不得带入实验室 三 用过的滴管 玻片等带菌器材 应放在指定的地方 不得将带菌液体倾入水槽 四 若发生割破手指 菌液进入眼等事故时 应立即报告老师 及时进行预防处理 医学微生物学实验室规则 五 实验完毕 应清理桌面 把用过的物品放回原处 如显微镜 接种环 染色液等 需培养物品按要求放温箱 六 离开实验室前 用消毒液将手浸泡5 10分钟 并用自来水冲洗干净后 方可离室 七 值日生负责整理清洁实验室 关好水 电 门 窗 八 未经许可 不得将实验室内任何物品 特别是菌种 带出室外 医学微生物学实验室规则 实验报告书写 1 实验题目2 实验目的3 实验原理4 实验材料5 实验方法6 实验结果7 结果分析8 实验意义 实验内容 一 光学显微镜油镜的使用和保护法二 细菌的革兰染色检查法三 细菌基本形态和特殊结构的观察 实验一细菌的形态学检查 油镜加香柏油的原理 玻璃折射率 n 1 52香柏油折射率 n 1 515 二 细菌标本染色检查法 细菌个体微小 无色半透明 染色后能在显微镜下识别其各种不同结构 并鉴别细菌 细菌染色法 细菌特殊染色法 芽胞 鞭毛 丹麦细菌学家Gram于1884年发明的一种鉴别细菌的染色法 可将细菌鉴别为革兰氏阳性G 菌和革兰氏阴性G 菌两大类 革兰染色法 1 通透性学说 革兰氏阳性菌细胞壁的通透性比阴性菌低 进入细胞的染料和碘液结合生成沉淀 脱色剂较易通过革兰氏阴性菌的细胞膜 将碘和染料的复合物溶解洗出 故易脱色 阳性菌细胞膜透通性低 故不易脱色 革兰染色法原理 革兰染色法原理 2 等电点学说革兰阳性菌等电点 PI2 3 比革兰阴性菌的等电点 PI4 5 低 在同一PH条件下 阳性菌比阴性菌所带负电荷要多 与带正电荷的碱性染料结合力较牢固 不易脱色 动画演示 3 化学学说 革兰氏阳性菌细胞内含有某种特殊化学成份 一般认为是核糖核酸镁盐与多糖的复合物 它能和料染一煤染剂复合物相互结合 使已着色的细菌不易脱色 革兰染色法原理 一 实验材料 1 菌种培养18 24h的葡萄球菌 大肠杆菌及白色念珠菌 2 试剂生理盐水 革兰氏染色液 3 仪器及用具接种环 酒精灯 玻片 显微镜 香柏油等 细菌的革兰染色法 制备涂片包括涂片 干燥 固定三步 涂片 干燥 固定 二 细菌涂片标本的制备 接种环置于酒精灯的外焰中烧灼灭菌 二 细菌涂片标本的制备 1 涂片 取1 2环生理盐水 NS 置于载玻片上 接种环用火焰烧灼灭菌 1 涂片 二 细菌涂片标本的制备 小指和手掌小鱼肌侧拔掉棉塞 并烧灼试管口灭菌 用已灭菌冷却的接种环伸入试管中取适量菌 注意勿使沾有菌液的接种环触及试管壁及试管口 1 涂片 二 细菌涂片标本的制备 再次灭菌试管口 棉塞略加烧灼放回原处 将接种环上之菌涂于载玻片的NS上 制成的菌膜直径约1cm左右均匀薄层 接种环用火焰烧灼灭菌放回原处 注 取菌量不应过多 以免造成菌体重叠 1 涂片 二 细菌涂片标本的制备 2 干燥 室温中自然干燥 加速干燥 将标本离火焰半尺高处略烘 二 细菌涂片标本的制备 3 固定 目的 使细菌蛋白变性 菌体牢固黏附于玻片上 还可杀死细菌 玻片有菌膜一面向上 在火焰的外焰钟摆样速度通过三次 时间约3秒钟 二 细菌涂片标本的制备 革兰染色法操作步骤 初染媒染脱色复染 结晶紫 碳酸钠30秒 革兰染色法 碘液媒染30秒 丙酮酒精数滴 脱色约5 10秒 碱性复红液2 3滴 5秒钟 待干 镜检 注 每一步均需细流水冲洗 油镜观察结果1000倍 放大倍数 10 100 白色念珠菌革兰染色1000倍 放大倍数 10 100 革兰氏染色意义 1 鉴别细菌2 选择抗菌药物3 研究细菌致病性G 菌能产生外毒素 G 菌能产生内毒素 两者的致病作用不同 1 脱色过度 可使G 菌被误染为G 菌 2 脱色时间的长短还与涂片厚薄有关 以涂片薄而均匀为好 3 多种因素如菌龄 染色时间 pH等影响结果 注意事项 实验报告内容 1 绘图葡萄球菌 大肠杆菌及白色念珠菌的基本示意图 记录革兰氏染色结果 分辨出革兰阳性菌和革兰阴性菌 2 如果染色结果不理想 请分析原因 细菌形态示意图绘图要求 1 选择形态典型的部分细菌 红兰色笔绘图 2 绘细