克隆技术单元复习课件

选修3克隆技术 原理 技术 应用 北京理工大学附属中学苏明学 北京考试说明 克隆的定义和理论基础 植物组织培养的原理 动物的细胞培养与体细胞克隆 细胞融合 单克隆抗体 克隆的概念 克隆 分子水平 细胞水平 个体水平 1个基因 多个相同的基因 扩增 1个细胞 多个相同的细胞 分裂 1个体细胞 1个新个体 无性繁殖 只要不通过两个分子 两个细胞或两个个体的结合 只由一个模板分子 母细胞或母体直接形成一代分子 细胞或个体 就是无性繁殖 即克隆 PCR技术 DNA分子复制 动物细胞和微生物的培养 细胞增殖 植物组织培养动物核移植技术 植物细胞的全能性动物细胞核的全能性 克隆技术及其理论基础 基因克隆 基因组文库的构建 基因克隆 PCR 7 细胞克隆 现代生物技术中的关键技术 8 多孔细胞培养板 稀释涂布平板法 得到单菌落 有限稀释法 得到单克隆 细胞克隆 现代生物技术中的关键技术 植物个体克隆 植物组织培养技术 生长素 细胞分裂素的比例适中 利于形成愈伤组织 生长素 细胞分裂素比例降低 有利于分化形成芽 生长素 细胞分裂素比例升高 有利于分化形成根 11 MS培养基 大多数植物组织培养的培养基主要成分是无机营养物质 大量元素和微量元素 碳源 有机添加物 植物生长调节剂 凝胶剂等 菊花组织培养中植物激素的利用 09福建卷 转基因抗病香蕉的培育过程如图所示 质粒上有Pst Sma EcoR Apa 等四种限制酶切割位点 请回答 1 构建含抗病基因的表达载体A时 应选用限制酶 对进行切割 2 培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长 欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞 应使基因表达载体A中含有 作为标记基因 3 香蕉组织细胞具有 因此 可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株 图中 依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的 植物体细胞杂交技术 植物细胞 或原生质体 原生质体 去壁 转基因细胞 重组细胞 组织培养 转基因植株 杂种倍性植株 基因工程 细胞融合 外植体 愈伤组织 胚状体或丛芽 营养 激素 温度 无菌 MS培养基 水 无机盐 蔗糖 氨基酸 有机酸 生长素类 细胞分裂素类 光 脱分化 再分化 工厂化生产药物 人工种子 微型 快速 繁殖脱毒苗单倍体育种突变体的利用转基因植物杂种倍性植物 条件 条件 19 11年江苏卷 下列有关植物组织培养的叙述 正确的是 A 愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞B 二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株C 用人工薄膜将胚状体 愈伤组织等分别包装可制成人工种子D 植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得 动物个体克隆 治疗性克隆和生殖性克隆 动物组织块 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 剪碎 分散的细胞 培养液 细胞悬浮液 原代培养 胰蛋白酶处理 分瓶 传代培养 应用 培养液 环境条件 合成培养基血清 血浆 抗生素 无毒无菌适宜的温度与pH氧气与二氧化碳 生产生物制品 如干扰素 单克隆抗体转基因动物 克隆动物 试管动物的培育检测有毒物质用于生理 病理 药理的研究 动物细胞培养的条件 培养液和器具的无菌处理 添加一定量的抗生素 定期更换培养液 糖 氨基酸 无机盐 微量元素 促生长因子 动物血清 血浆 36 5 0 5 哺乳动物 7 2 7 4 置于含95 空气加5 CO2的混合气体的培养箱 都需无菌条件 都进行有丝分裂 细胞的增殖 细胞的全能性 液体培养基 动物血清 固体培养基 植物激素 获得细胞或细胞产物 获得试管苗或细胞产物 25 12山东卷 毛角蛋白II型中间丝 KIFII 基因与绒山羊的羊绒质量密切相关 获得转KIFII基因的高绒质绒山羊的简单流程如图 1 过程 中最常用的运载工具是 所需要的酶是 和DNA连接酶 2 在过程 中 用 处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞 在培养过程中 将成纤维细胞置于5 CO2的气体环境中 CO2的作用是 3 在过程 中 用 处理以获得更多的卵 母 细胞 成熟卵 母 细胞在核移植前需要进行 处理 质粒 限制酶 胰蛋白酶 维持培养液的pH稳定 促性腺激素 去核 植物体细胞杂交 动物细胞融合 如何筛选出杂交瘤细胞 如何选出能产生特定抗体的细胞群 怎样将杂交瘤细胞筛选出来 B淋巴细胞 单独体外培养一般活3 4天 具有D途径 主要合成途径 和S途径 补救合成途径 骨髓瘤细胞 次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 HGPRT 或胸苷激酶 TK 活性缺陷型 即只有D途径 融合细胞在HAT培养液中的状态 例 人绒毛膜促性腺激素 HCG 是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白 制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断 下图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图 请分析回答 制备单克隆抗体过程中要用到 和 技术 2 制备单克隆抗体过程中 给小鼠注射的HCG相当于 使小鼠产生分泌相应 的淋巴细胞 此过程属于特异性免疫中的 免疫 动物细胞培养 动物细胞融合 抗原 抗体 体液 3 在细胞内DNA合成一般有两条途径 主途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸 进而合成DNA 而氨基喋呤可以阻断此途径 另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下 经酶催化作用合成DNA 而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径 利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分 其中添加的 成分具有筛选杂交瘤细胞的作用 最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是 氨基喋呤 能无限增殖并分泌特异性抗体 保证每个孔内不多于一个细胞 达到单克隆培养的目的 5 对克隆化培养的杂交瘤细胞进行检测时 需要收集上清液 原因是 将上清液加入到另一个预先包埋好 的培养板上 进行抗体阳性检测 将阳性孔中的细胞继续进行培养 检测并选择单个产生抗体能力强和抗体特异性强的杂交瘤细胞进行 培养或 培养 获得的单克隆抗体与血清抗体相比有 的特点 4 在进行克隆化培养时 需要将培养细胞稀释到7 10个细胞 ml 每孔滴入0 1ml细胞稀释液 其目 抗体被分泌到上清液中 HCG 体内 体外 特异性强 灵敏度高 例 将人细胞与小鼠细胞进行细胞融合 得到人鼠杂种细胞 进行有丝分裂时人的染色体被排斥 被丢失 丢失的染色体是随机的 这样就可以得到一系列稳定的细胞株 每个细胞株中含有人的不同的染色体 因此可利用群体细胞株来进行基因定位 各细胞株中染色体的分布情况如表一 检测各细胞株中要定位的基因存在情况如表二 表一 表二 据此可断定基因1位于染色体上 基因2位于染色体上 基因3位于染色体上 2号 1号 2号 天津卷 絮凝性细菌分泌的具有絮凝活性的高分子化合物 能与石油污水中的悬浮颗粒和有机物等形成絮状沉淀 起到净化污水的作用 为进一步提高对石油污水的净化效果 将絮凝性细菌和石油降解菌融合 构建目的菌株 其流程图如下 1 溶菌酶的作用是 PEG