结核诊断骨科科会ppt课件

结核实验室快速诊断技术应用进展 结核实验室夏强 一 简要介绍 二 新技术应用 结核病实验室 免疫组 结核组 分子组 培养 药敏 镜检 结核病实验室工作分工 结核检测技术应用 液体培养及药敏 金标准 MGIT960培养及药敏 BACTECMGIT960全自动分枝杆菌检测系统 国内对骨关节结核培养阳性率报道不一 14 5 46 4 30 1 42 83 87 不等骨关节结核患者一般术前都经过抗结核药物治疗 A群为生长旺盛菌群 但易被药物杀灭 而B C D群多为休眠或静止状态 代谢缓慢 骨关节结核标本的培养在参照肺结核痰培养的基础上 应该适当延长培养时间 建议延长到8周左右 死骨 肉芽 坏死椎间盘 干酪样坏死等病变组织的培养阳性率 45 45 略低于脓液及脓血标本组 63 83 脊柱结核患者的培养阳性率 61 40 略高于髋关节 膝关节 踝关节 肘关节 腕关节 骶髂关节等其他部位结核组 41 67 第四次全国结核病流行病学抽样调查结果表明 非结核分枝杆菌 NTM 在分枝杆菌分离株中占11 1 牛分枝杆菌占全部分枝杆菌株的2 5 NTM感染无论从临床表现 影像学表现 甚至病理学表现 都与结核杆菌感染极为相似 很难鉴别 结果统计 结果统计 时间 例数 现象 同一耐药患者在治疗的不同阶段 药敏试验结果发生了改变 1 检测方法本身的可靠性 药物的稳定性 浓度 菌株的生长状况 2 耐药发生了演变 原发耐药和继发耐药3 混合感染问题 感染了多种分枝杆菌 人体对于结核分枝杆菌感染的免疫反应主要是细胞免疫 T淋巴细胞和巨噬细胞的作用关系到感染的进程和演变 巨噬细胞吞噬结核分枝杆菌后 就会把它们消化成大小不一的片断 特异片断 抗原肽 与巨噬细胞和其他抗原递呈细胞的主要组织相容性复合体相结合 表达于巨噬细胞表面 并递呈给T细胞 特异性CD4T细胞能产生特征性淋巴因子 包括一种能够刺激T细胞增殖的IL 2和 干扰素 IGRA就是检测被结核菌激活的记忆T细胞释放出 干扰素水平 2 2TB IGRA APC Tcell IFNg IGRA应用 2 3HAIN技术得到全面认可 HAIN技术 效果评价 中国疾控中心结核国家参比实验室实验数据 分枝杆菌的分类 一 缓慢生长菌群1 结核菌群 包括人型结核杆菌 牛型结核杆菌 非洲分枝杆菌 田鼠分枝杆菌 2 I群光产色菌 如 堪萨斯 海分枝杆菌等 3 群暗产色菌 如 瘰疠 戈氏分枝杆菌 4 群不产色菌 如鸟型 胞内 溃疡分枝杆菌等 二 迅速生长菌即 群菌 包括偶发 龟 耻垢分枝杆菌等 三 需要特殊营养菌包括麻风分枝杆菌 鼠麻风分枝杆菌 副结核分枝杆菌 Runyon分类法中的 群分枝杆菌又称为非结核分枝杆菌 nontuberculosismycobacteria NTM 经过了全球四年的观察 HAIN技术已经是非常成熟的技术并得到同行的认可与好评 Hain技术可以在二个工作日检测RIF和INH的耐药可以进一步分析18种常见非结核分枝杆菌 缺点 与960液体快速药敏相比 该方法药敏结果具有假阴性可能 占10 左右 这是所有分子诊断技术的原理缺陷 2 4RNA恒温扩增技术 TB SAT DNA和RNA的主要区别就在糖基 DNA是双螺旋结构 RNA是单螺旋结构DNA很稳定 RNA很不稳定 结核RNA在细胞中拷贝数很多 使用rRNA为靶标 大大提高了取样效率和检测灵敏度 DNA扩增技术 PCR 用于病原体检验的不足 死菌检测也阳性 与临床相关性差基因与表型不吻合 耐药检测 不能区分 潜伏感染 活动性感性 交叉污染问题 三个房间 变温检测 对仪器要求高反应抑制问题 Taq酶 RNA扩增技术检验的优势 灵敏度高 RNA拷贝数 DNA拷贝数 104 1 6 与临床相关性好 可以区分 死菌 活菌 病原体死亡 RNA很快降解 培养 减少无效治疗 比如抗生素滥用可以诊断 活动性感染 活动性感染 指示RNA转录活跃潜伏感染 指示RNA不转录不易污染 靶标和扩增产物都是RNA RNA用于TB的检测多国诊疗指南 2009 美国CDC更新NAAT法在TB实验室诊断中应用的指南 所有疑似TB的初诊病人 除了做涂片之外 都必须用TB SAT检测至少一份样本 RNA获得FDA认证可检测涂阴 涂阳标本 DNA只获得FDA认证可检测涂阳标本 UpdatedGuidelinesfortheUseofNucleicAcidAmpflicationTestintheDiagnosisofTuberculosis 2009 UnitedStates 目前 我实验室前期预实验275例 灵敏度达到93 特异性达到85 该方法只适合痰标本 2 5结核抗体lgG lgM 2 6GeneXpert 缺点 1 价格昂贵 一个test成本在50欧元2 仅能检测利福平一个药物 标本留取 结核培养 任何标本 不同标本培养阳性率不同结核DN