讲义土壤中细菌的分离与计数（3）ppt课件

专题二微生物的培养 实践2 分离土壤中的分解尿素的细菌 1 培养基的选择 本培养基的氮源为尿素 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 以尿素为氮源 缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素 缺乏氮源而不能生长发育繁殖 而受到抑制 所以 能够选择出分解尿素的微生物 实践2 分离土壤中的分解尿素的细菌 在本课题提供的选择培养基的配方中 尿素是培养基中的惟一氮源 因此 原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长 但实际上 微生物的培养是一个非常复杂的问题 有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖 因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物 还需要进一步的验证 选择培养基 允许特定种类的微生物生长 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 称为选择培养基 实践3 分离并计算土壤中的分解尿素的细菌的数目 统计菌落数目的理论依据是 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活菌 因此 恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键 为了保证结果准确 通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上 培养后再选择菌落数在30 300的平板进行计数 第一位同学只涂布了一个平板 没有设置重复组 因此结果不具有说服力 第二位同学考虑到设置重复组的问题 涂布了3个平板 但是 其中1个平板的计数结果与另2个相差太远 说明在操作过程中可能出现了错误 因此 不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值 A同学的结果与其他同学不同 可能的解释有两种 一是由于土样不同 二是由于培养基污染或操作失误 究竟是哪个原因 可以通过实验来证明 实验方案有两种 一种方案是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验 如果结果与A同学一致 则证明A无误 如果结果不同 则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题 另一种方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养 作为空白对照 以证明培养基是否受到污染 一 培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长 说明培养基没有被杂菌污染 牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目 说明选择培养基已筛选出一些菌落 二 样品的稀释操作是否成功如果得到了2个或2个以上菌落数目在30 300的平板 则说明稀释操作比较成功 并能够进行菌落的计数 一 旁栏思考题1 想一想 如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数 答 统计某一稀释度下平板上的菌落数 最好能统计3个平板 计算出平板菌落数的平均值 然后按课本旁栏的公式进行计算 2 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量 选用的稀释范围相同吗 答 这是因为土壤中各类微生物的数量 单位 株 kg 是不同的 例如在干旱土壤中的上层样本中 好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万 放线菌数约为477万 霉菌数约为23 1万 因此 为获得不同类型的微生物 就需要按不同的稀释度进行分离 同时还应当有针对性地提供选择培养的条件 二 练习2 提示 反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物 其中也包括分解尿素的微生物 由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌 接触空气后会死亡 因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外 还应参照厌氧菌的培养方法进行实验设计 实践3 分离并计算土壤中的分解尿素的细菌的数目 1 如何对细菌进行计数 实践3 分离并计算土壤中的分解尿素的细菌的数目 1 如何对细菌进行计数 实践3 分离并计算土壤中的分解尿素的细菌的数目 1 如何对细菌进行计数 实验步骤 土壤取样 制备培养基 细菌的计数 微生物的培养与观察 从肥沃 湿润的土壤中取样 先铲去表层土3cm左右 再取样 将样品装入事先准备好的信封中 准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数 在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目 因此 牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照 用来判断选择培养基是否起到了选择作用 由于初次实验 对于稀释的范围没有把握 因此选择了一个较为宽泛的范围 稀释倍数为103 107 每个稀释度下需要3个选择培养基 1个牛肉膏蛋白胨培养基 因此共需要15个选择培养基 5个牛肉膏蛋白胨培养基 此外 还需要准备8个灭菌的试管和1个灭菌的移液管 将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中 锥形瓶体积为250mL 充分摇匀 吸取上清液1mL 转移至盛有9mL的生理盐水的无菌大试管中 依次等比稀释至107稀释度 并按照由107 103稀释度的顺序分别吸取0 1mL进行平板涂布操作 按照浓度从低到高的顺序涂布平板 不必更换移液管 将涂布好的培养皿放在30 温度下培养 随着培养时间的延长 会有不同的菌落产生 比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量 形态等 并做好记录 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中 观察能否产生如课本中图2 10的颜色反应 当菌落数目稳定时 选取菌落数在30 300的平板进行计数 在同一稀释度下 至少对3个平板进行重复计数 然后求出平均值 并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目 分解尿素的细菌的鉴定 在以尿素为是惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂 培养某种细菌后 如果pH升高 指示剂将变红 细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨 氨会使培养基的碱性增强 pH升高 因此 我们可以通过检测培养基的pH的变化来判断该化学反应是否发生 实践 分离土壤中的细菌 关注菌落的形态 大小 边缘 突起 颜色 质地等等 都是区分细菌的重要手段 题2 2008年广东高考试题38 生物技术实践 10分 苯酚是工业生产排放的有毒污染物质 自然界中存在着降解苯酚的微生物 某工厂产生的废水中含有苯酚 为了降解废水中的苯酚 研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株 筛选的主要步骤如图所示 为土壤样品 请回答下列问题 1 中培养目的菌株的选择培养基中应加入作为碳源 中不同浓度碳源的培养基 A 影响 B 不影响 细菌的数量 如果要测定 中活细菌数量 常采用法 2 为对照 微生物在 中不生长 在 中生长 与 培养基的主要区别在于 使用法可以在 上获得单菌落 采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养 苯酚 1分 A 1分 平板菌落计数 活菌计数或菌落计数 1分 含除苯酚外的其它碳源 以苯酚作为唯一碳源 1分 平板分离 稀释涂布平板或平板划线分离 1分 避免培养过程产生的水分影响微生物的生长 1分 3 如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小 4 实验过程中如何防止其它微生物的污染