人感染h7n9禽流感防控样本采集检测与运送要求（市cdc刘爱平）

人感染H7N9禽流感防控样本采集 检测与运送要求 楊晓恒 2020 2 24 1 采集对象 人感染H7N9禽流感疑似病例经医院专家会诊 不能排除人感染H7N9禽流感的肺炎病例 应同时具备以下4条 1 发热 腋下体温 38 2 具有肺炎的影像学特征 3 发病早期白细胞总数降低或正常 或淋巴细胞分类计数减少 4 不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致的肺炎 出现发热及咳嗽等急性呼吸道感染症状的人感染H7N9禽流感确诊病例的密切接触者 2020 2 24 2 标本采集的种类 抗病毒治疗之前必须采集 鼻咽分泌物口腔含漱液呼吸道分泌物气管深部咳痰气管吸取物肺深部吸取物 灌洗液双份血清优先采集下呼吸道标本 2020 2 24 3 病毒采样液 4ml MEM或DMEM液Hanks液商品化采样管聚丙乙烯纤维头拭子 2根 常规采血管全血5ml血清2ml 2020 2 24 4 采样用具 2020 2 24 5 Hanks液的配制 NaCl8g KCl0 4g MgSO47H2O0 1g MgCl 6H2O0 1g溶于800ml超纯水中 CaCl2 无水 0 14g溶于100ml超纯水中 葡萄糖1 0mg NaHPO40 154g KH2PO40 06g 0 4 酚红液5ml溶于100ml超纯水中 将上述3种溶液混和 8磅30分钟灭活菌 或用玻璃滤器过滤 保存在5 备用 用前以5 NaCO3调pH7 4 7 6 2020 2 24 6 标本采集的方法 咽拭子 用2根拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁 将拭子头浸入含4ml采样液的管中 尾部折断弃去 2020 2 24 7 1插入鼻腔 2放置数秒 鼻拭子采集 4放入VTM 3旋转2 3Ts 5折断多余部分 6盖紧盖子 鼻咽抽取物或呼吸道抽取物 用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物 先将收集器头部插入鼻腔或气管 接通负压 旋转收集器头部并缓慢退出 收集抽取的粘液 并用采样液4ml涮洗收集器1次 呼吸道灌洗液 将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管 约30cm深处 注入5ml生理盐水 接通负压 旋转收集器头部并缓慢退出 收集抽取的粘液 并用采样液涮洗收集器1次 可用小孩导尿管接在50ml注射器上来代替收集 2020 2 24 10 咽漱液 用10ml生理盐水漱喉 漱时让患者头部微后仰 发 噢 声 让生理盐水在咽部转动 然后 用50ml的无菌螺口塑料管收集洗液 痰液 医护人员采取拍背的方式帮助患者深咳 将咳出的痰液收集到50ml的无菌螺口塑料管中 最好是医护人员采取吸痰的方法收集深部痰液 注入至15ml无菌螺口塑料管中 环境污水 选择禽类饮水槽 清洗禽类的盆或桶 禽类活动或笼具旁的水沟或水池 用一次性玻璃棒或吸管充分搅匀后采集5 10ml污水于无菌的外螺旋盖的管内 旋紧管盖 禽类粪便 选择禽舍或环境中的新鲜禽类粪便 用无菌拭子夹或挑取粪便3 5g置于含5ml采样液的管中 弃去尾部 旋紧管盖 笼具涂抹拭子 用蘸有采样液的拭子擦拭笼具表面禽类最常接触的3 5个不同部位 包括笼具底部 然后将擦拭过的拭子放入含5ml采样液的采样管中 弃去尾部 旋紧管盖 也可以用多个拭子充分擦拭笼具表面后放到一个采样管中 禽流感外环境标本采集 环境标本应急监测 各县市区疾控中心每月2次采集活禽批发市场 中心农贸市场的环境标本 每地点不少于3份标本 次 采集的标本以禽类饮水和市场污水为重点 2020 2 24 13 注意事项 1 出去采样时一定要带够大冰袋 用泡沫箱运输采集后的样本 48h内低温运输至实验室2 采集粪便时一定要采集新鲜的 一般较湿润 粪便 太陈旧 干燥 的粪便对我们的检测意义不大 尤其在缓冲区养殖户家中采集粪便标本时 由于多鸡鸭混养难以分辨鸭粪和鸡粪 最好能找到鸭子刚排泄的新鲜粪便 标本的运送 H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照 人间传染的病原微生物名录 中高致病性禽流感病毒进行管理 标本采集 包装 运送等应当严格按照 可感染人类的高致病性病原微生物菌 毒 种或样本运输管理规定 卫生部第45号令 等生物安全相关规定执行 病例的临床标本采集后 县级疾病预防控制机构和病例收治的医疗机构要密切配合 按照B类感染性物质进行包装运输 在低温条件下 24小时内送到当地流感监测网络实验室进行检测 B类感染性物质包装 2020 2 24 17 2020 2 24 18 2020 2 24 19 实验室检测检测流程 常规监测流感样病例 实验室收到标本后1周内完成甲 乙型流感病毒通用引物检测 甲型阳性的开展H1 H3 H7 H5亚型检测 乙型阳性的开展BY BV亚型检测 H5 H7亚型阳性立即网络报告 标本上送省 国家CDC复核和进一步检测 季节性流感病毒核酸检测阳性的标本继续进行流感病毒分离 毒株上送省 国家CDC复核 甲型通用引物阳性而不能区分型别或亚型的毒株和阳性标本要求在48小时内送至国家流感中心 24小时内送至省CDC H7N9排查病例 实验室收到标本后24小时内完成甲 乙型流感病毒通用引物和H5 H7亚型的检测 H5 H7亚型阳性立即网络报告 标本上送省 国家CDC复核和进一步检测 甲型阳性H5 H7亚型阴性的标本继续开展季节性流感病毒核酸检测和流感病毒分离 毒株上送省CDC复核 甲型通用引物阳性而不能区分型别或亚型的毒株和阳性标本要求在48小时内送至国家流感中心 24小时内送至省CDC 没有条件开展核酸检测的医疗机构请尽快开展快速抗原检测初筛试验 核酸检测仪器及试剂 RealtimePCR仪 ABI7300 7500抽提试剂 invitrog