奶品微生物检验方法.doc

奶品微生物检验方法一、菌落总数检测第181页二、大肠菌群检测第181页三、霉菌和酵母菌的检测第181页四、金黄色葡萄球菌检测第181页五、坂崎肠杆菌的检测第181页六、涂抹检测第183页七、空净检测第183页八、水样检测第183页一、菌落总数检测：同于冰淇淋微生物检验方法，见116页。二、大肠菌群检测：同于冰淇淋微生物检验方法，见109页。三、霉菌和酵母菌的检测：同于液体奶微生物检验方法，见135页。四、金黄色葡萄球菌检测：同于液体奶微生物检验方法，见155页。五、坂崎肠杆菌(E. sakazakii)的检测:1.材料和方法 11设备和材料111循环水浴箱45.50.2，管子浸没在水中，水面必须高于管子中培养基的高度。(可用水浴锅使样品充分溶解样品)。112浸没型温度计050，0.1分刻度，约55cm长。113孵育箱3537 和2426。（可用培养箱）114无菌吸管1ml、5ml、10ml，0.1ml分刻度。115 2kg天平，灵敏度0.1g。116接种针、3mm接种环、涂布玻璃棒。117带放大镜的菌落计数器。118 API20E生化试剂条。1. 1. 9营养琼脂：蛋白胨 10.0g 牛肉膏 3.0g 氯化钠5.0g琼脂15.0g 溶于蒸馏水中，加热溶解，12115分钟灭菌，至平板备用。1110肠杆菌增菌肉汤（EE肉汤）：必须用净化的牛胆粉和亮绿，以避免数量极少的受损伤的肠杆菌不生长。溶解所有的成分至1L蒸馏水，加热煮沸，分装成90ml体积。这种培养基有商品化的干粉供应（Oxoid,CM0317）,最终配制完的培养基必须是绿色的。配制好的肉汤可在2的环境中保存4周。配方为：蛋白胨10.0g 葡萄糖5.0g 磷酸氢二钠8.0g 磷酸二氢钾2.0g 牛胆粉20.0g 亮绿0.015g1.1.11氧化酶试剂 1%盐酸二甲基对苯二胺水溶液1%-萘酚乙醇溶液 将配好后的1%盐酸二甲基对苯二胺水溶液置于密塞棕色玻璃瓶中,于510存放。此试剂极易氧化,宜现用现配。试验时,取371824h的营养琼脂培养物1支。将两种试剂各23滴从斜面上端流下,2min内呈现蓝色者为细胞色素氧化酶试验阳性,未发生变化者为阴性。1.2方法整个试验是基于“三管”增菌法，因此产品中数量极少的微生物可以被检测和定量，整个试验至少需要333g样品。121按“三管法”分别无菌称取100g, 10g, 1g,婴儿配方奶粉，依次加至2L, 250ml, 125ml大小的三角烧瓶中（100ml带螺帽的瓶子可代替10g和1g装样品的烧瓶），分别加入9份无菌蒸馏水（1：10稀释比），预热至45，用手缓缓地摇动至充分溶解。36孵育过夜,稀释度可根据情况调整。122分别移取以上混合液10ml转种至装有90ml 无菌EE肉汤的稀释瓶中，36孵育过夜。123充分混合每个瓶子中的溶液，可采用以下A或B的方法进行分离培养：A. 直接涂布法：每一增菌培养物取0.2ml加到2个营养琼脂平板的表面，每个营养琼脂平板各加0.1ml，用无菌玻璃棒涂布（如果估计婴儿配方粉有很高的坂崎肠杆菌数量，则增菌培养物须用无菌的EE肉汤稀释至10-410-6后涂布。） B. 直接划线法：每一增菌培养物用3mm的接种环（10l）分别划2个营养琼脂平板。 124将上述平板放置36过夜后，观察平板上的坂崎肠杆菌的典型菌落形态：圆形较小呈黄色，表面光滑的菌落。125在营养琼脂琼脂平板上挑取黄色无光泽的菌落按API20E生化鉴定操作说明进行确证。阳性结果还须做氧化酶试验。126根据每一稀释度出现的阳性确证结果数来估计坂崎肠杆菌MPN值（同常规MPN查表法）。2.坂崎肠杆菌生化鉴定革兰氏染色(24h) - 氧化酶(24h) - V-P实验 + 枸檬酸盐实验(柠檬酸盐) + 鼠李糖实验 +硝酸盐还原实验 + 溶血实验 不溶血3.注意事项1. 准确吸取培养物，培养时间不易过长。2. 以上七项生化实验必须完全符合。3. 注意肠杆菌增菌肉汤（EE肉汤）的灭菌时间：1