脂肪含量的测定.doc

4脂肪含量的测定 索氏提取法一、实验目的与要求（1） 学习并掌握索氏抽提法测定脂肪含量的方法。（2） 学会根据食品中脂肪存在状态及食品组成，正确选择脂肪的测定方法。（3） 掌握用有机溶剂萃取脂肪及溶剂回收的基本操作技能。二、原理 利用相似相溶原理用有机溶剂（乙醚）将游离的脂肪萃取出来，然后回收除去溶剂并干燥，残渣即为脂肪。残渣中除脂肪外，还包括其他挥发油、树脂、部分有机酸、色素等，故称为粗脂肪。三、试剂、仪器及样品试剂：无水乙醚仪器： 1.恒温水浴 一台/4组 2.索氏抽提器 一套/组3 .定性滤纸 2张/组 直径15cm4 .小烧杯 50ml 量筒100ml5 .脱脂棉6 .镊子 一个/组7 .薄线手套（同学自备）8 .干燥箱9 .粉碎机 公用10 .干燥器 公用 样品：名称：方便面（油炸） ； 厂家：四、操作步骤1 清洗脂肪瓶，然后置于烘箱干燥，干燥后放入干燥器内冷却到室温。然后称其重量（精确到0.1克，注意记住编号）2 准确称量经干燥后的样品5.0克左右（精确到0.1克）于小烧杯中。3 将样品无损地转移到滤纸上，按“纸卷法”把样品包装好。样品一定要做到定量转移。4 置样品纸卷于抽提管中，然后把抽提管同冷凝器、脂肪瓶连上，固定于恒温水浴的支架上（检查样品的上端面是否超过提取管的上端）。5 用漏斗在冷凝管顶端开口缓缓加入无水乙醚，加入量为脂肪瓶容积的三分之二左右（100ml）。然后 用一小团脱脂棉把冷凝管上开口轻轻塞上。加乙醚前，应接通冷却水。6 抽取脂肪调整水浴温度在6070,使抽提管中的乙醚可在35分钟虹吸一次，提取26小时。样品含有脂肪是否抽提完全，可以用滤纸来粗略判断。7 抽提效果检验从提取管内吸取少量的乙醚并滴在干净的滤纸上，待乙醚干后，滤纸上不留有油脂的斑点则表示已经抽提完全，可停止提取。 8 回收乙醚将纸筒抽出，再将乙醚蒸到提取管内，待乙醚液面达到虹吸管的最高处以前，取下提取管，回收乙醚。取下脂肪瓶，置于通风橱水浴上挥发剩余的乙醚。9 将脂肪瓶中的乙醚全部蒸干，洗净外壁，置于100105烘箱内干燥12小时，干燥初期烘箱门应虚掩，取出后放入干燥器中冷却30分钟，然后称重（精确至0.1g），并重复操作至恒重。五、计算按下式计算样品中的脂肪百分含量。W1-W0脂肪（）-(100-A)WW1：脂肪瓶和脂肪重量（克）。W：样品重量（克）。W0：脂肪瓶重量（克）。A-100克样品水分的含量(克)六、操作要点及注意事项（1）样品应干燥后研细，装样品的滤纸筒一定要紧密，不能往外漏样品，否则重做。（2）放入滤纸筒的高度不能超过回流弯管，否则乙醚不易穿透样品，脂肪不能全部提出，造成误差。（3）碰到含多量糖及糊精的样品，要先以冷水处理，等其干燥后连同滤纸一起放入提脂管内。（4）抽提时水浴温度不能过高，一般使乙醚刚开始沸腾即可（约45左右）。回流速度以35分钟一次为宜。（5）所用乙醚必须是无水乙醚，如含有水分则可能将样品中的糖以及无机物抽出，造成误差。（6）冷凝管上端最好连接一个氯化钙干燥管，这样不仅可以防止空气中水分进入，而且还可以避免乙醚挥发在空气中，这样可防止实验室微小环境空气的污染。如无此装置，塞一团干脱脂棉球亦可。（7）将脂肪瓶放在烘箱内干燥时，瓶口向一侧倾斜45放置使挥发物乙醚易与空气形成对流，这样干燥迅速。 (8)样品及醚提出物在烘箱内烘干时间不要过长，因为一些很不饱和的脂肪酸，容易在加热过程中被氧化成不溶于乙醚的物质；中等不饱和脂肪酸，受热容易被氧化而增加重量在没有真空干燥箱的条件下，可以在100105干燥1.53小时。脂肪含量测定GB/T5009.6-2003第一法 索氏抽提法2.原理试样用无水乙醚或石油醚等溶剂抽提后，蒸去溶剂所得的物质，称为粗脂肪。因为除脂肪外，还含色素及挥发油、蜡、树脂等物。抽提法所测得的脂肪为游离脂肪。3.试剂3.1无水乙醚或石油醚。3.2海砂：取用水洗去泥土的海砂或河砂，先用盐酸（1+1）煮沸0.5h，用水洗至中性，再用氢氧化钠溶液（240g/L）煮沸0.5h ，用水洗至中性，经1005干燥备用。4.仪器索氏提取器5.分析步骤5.1试样处理5.1.1固体试样：谷物或干燥制品用粉碎机粉碎过40目筛；肉用绞肉机绞两次；一般用组织捣碎机捣碎后，称取2.00g5.00g（可取测定水分后的试样），必要时拌以海砂，全部移入滤纸筒内。5.1.2液体或半固体试样：称取5.00g10.00g，置于蒸发皿中，加入约20g海砂于沸水浴上蒸干后，在1005干燥，研细，全部移入滤纸筒内。蒸发皿及附有试样的玻璃棒，均用沾有乙醚的脱脂棉擦掉，并将棉花放人滤纸筒内。5.2抽提将滤纸筒放入脂肪抽提器的抽提筒内，连接已干燥至恒量的接收瓶，由抽提器冷凝管上端加入无水乙醚或石油醚至瓶内容积的2/3 处，于水浴上加热，使乙醚或石油醚不断回流提取（6次/h8次/h），一般抽提6h12h。5.3称量取下接收瓶，回收乙醚或石油醚，待接收瓶内乙醚剩1mL2mL 时在水浴上蒸干，再于1005干燥2h，放干燥器内冷却0.5h后称量。重复以上操作直至恒量。6.结果计算试样中脂肪的含量计算结果表示到小数点后一位。X=（m1-m0)*100/m2式中：X试样中粗脂肪的含量，单位为克每百克（g/100g）；m1接收瓶和粗脂肪的质量，单位为克（g）；m0接收瓶的质量，单位为克（g）；m2试样的质量（如是测定水分后的试样，则按测定水分前的质量计），单位为克（g）。7.精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均的10。第二法 酸水解法8.原理试样经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得总脂肪含量。酸水解法测得的为游离及结合脂肪的总量。9.试剂9.1盐酸。9.2乙醇（95%)。9.3乙醚。9.4石油醚（3060沸程）。10.仪器100mL具塞刻度量筒11.分析步骤11.1按以下方法进行试样处理。11.1.1 固体试样：称取约2.00g 按5.1.1 制备的试样置于50mL 大试管内，加8mL水，混匀后再加10mL盐酸。11.1.2液体试样：称取10.00g，置于50mL 大试管内，加10mL盐酸。11.2将试管放入7080水浴中，每隔5min10mi 以玻璃棒搅拌一次，至试样消化完全为止，约40min50min。11.3 取出试管，加入10mL 乙醇，混合。冷却后将混合物移入100mL 具塞量筒中，以25mL 乙醚分次洗试管，一并倒入量筒中。待乙醚全部倒入量筒后，加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，再塞好，静置12min，小心开塞，并用石油醚-乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪。静置 10min20min，待上部液体清晰，吸出上清液于已恒量的锥形瓶内，再加5mL