常用抗凝剂及其配置法.docVIP

常用抗凝剂的配制及用法 在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。 一、肝素 （1）肝素抗凝作用原理 肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。 （2）配制和用量 纯的肝素10mg能抗凝65125 ml血液(按lmg等于125U，1020U能抗1 ml血液计)。但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1肝素生理盐溶液，用时取01毫升于试管内，100烘干，每管能抗凝510ml血液。也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2530mg/200300g体质量，兔10mgkg体质量，狗510mgkg体质量。肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。 （3）注意事项 做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！ 二、草酸盐合剂 （1）原理 草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。 （2）配制方法及用量 草酸铵12g、草酸钾08g、福尔马林10ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂01ml(即相当草酸铵12mg，草酸钾08mg)。根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。如取05ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。 （3）注意事项 草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。 三、枸櫞酸钠 常配成35%水溶液。也可直接加粉剂，每毫升血加35mg，即可达到抗凝目的。 枸櫞酸钠可使钙失去活性，防止凝血。但其抗凝作用较差，碱性较强，不宜作化学检验之用。仅可用于红细胞沉降速度测定。急性血压测定实验所用枸櫞酸钠为56溶液。 四、草酸钾 （一）原理和注意事项 草酸钾为最常用的抗凝剂。其与血液混合后可迅速与血液中的钙离子结合，形成不溶解的草酸钙，使血液不凝固。常用于非蛋白氮测定，但不适用于测定钾和钙。草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故应注意。 （二）配制及使用方法 取草酸钾10g，加蒸馏水少许使溶解，再加蒸馏水至100ml。配制成10水溶液，如每管加0.1ml则可使510ml血不凝。一般如作微量检验，用血量较少，可配制成2溶液，如每管加01ml可使12ml血液不凝。 五、乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA） EDTA对血液中钙离子有很大的亲和力，能与钙离子络合而使血液抗凝。每0.8mg可抗凝1ml血液。除不能用于血浆中钙、钠及含氮物质之测定外，适用于多种抗凝。 六、（酸性）柠檬酸葡萄糖溶液B（ACD）（用于新鲜抽提或者是冻存的血样品，实验室常用） 柠檬酸钠：1.32%（M/V） 柠檬酸：0.48%（M/V） 葡萄糖：1.47%（M/V） ACD抗凝剂为：柠檬酸0.48g、柠檬酸钠1.32g、葡萄糖1.47g，加水至100ml，灭菌后备用 一般20ML新鲜血液中加入3.5ML ACD抗凝剂。比例依次类推！ 血液可以在0度条件下保存数天，或者是零下70度条件下无限期保存！ 从全血中制备基因组DNA，ACD做为抗凝剂要优于EDTA，因为他更加能保存高分子质量的DNA，然而，血样常常被收集于用定量EDTA作为抗凝剂的小管中。 在大多数美国的医院中，收集血样的小管均用颜色标明是否含有抗凝剂，紫色顶管盖的小管一般含有抗凝剂，通常是EDTA的干粉。黄色顶盖的小管不含抗凝剂。 在分子克隆实验中，前者一般用于收集血样用于制备基因组的DNA，后者用于收集血样作为用EB病毒的永生化淋巴细胞的来源。这些永生化