第二章 药物的鉴别试验.ppt

第二章药物的鉴别试验 第一节概述 药物分析主要有三大项 鉴别 检查和含量测定 依据 根据药物的化学结构和它的理化性质 分别采用化学 物理化学或生物学方法来判断药物的真伪 适用范围 已有标识的已知药物的真伪 第二节鉴别试验项目 一 性状1 外观 聚集状态 晶形 色泽以及臭 味等例 药典对盐酸吗啡的描述为 本品为白色 有丝光针状结晶或结晶性粉末 无臭 遇光易变质2 溶解度 在一定程度上反映了药物的纯度 晶型或粒度 溶解度测定方法 准确称取研成细粉的供试品或量取液体供试品 准确度为 2 加入一定量的溶剂 在25 2 下 每隔5min强力振摇30秒 观察30min内的溶解情况 如看不到溶质颗粒或液滴时 即视为完全溶解药典中采用 极易溶解 易溶 溶解 略溶 微溶 极微溶 几乎不溶或不溶 描述药品在不同溶剂中的溶解性能 3 物理常数 1 熔点 定义 熔点是指一种物质按照规定方法测定 由固体熔化成液体的温度 熔融同时分解的温度 或在熔化时从初熔到全熔的一段温度 是多数固体有机药物的重要物理参数 重要的指标 适用范围 测定熔点的药品应该是遇热晶型不转化 它的初熔点和终熔点容易分辩的药品 测定方法 第一种 易粉碎的固体药品第二种 不易粉碎的固体药品 如脂肪第三种 凡士林或其他类似的物质测定熔点的装置 升温速度 药品放入传温液中时的温度 熔点测定管内径的大小 药物的干燥程度 传温液 观察的要求等不同都会影响熔点测定的结果 未注明者指第一法 严格按药典规定要求操作 注意事项 毛细管管径的影响 内径过大 偏高0 2 0 4 测温用温度计要校正 注意加热方式 升温速度过快 熔点偏低约1 三个概念 初熔 供试品在毛细管内开始局部液化 出现明显液滴时的温度全熔 供试品全部液化时的温度熔融同时分解 指某一个药品在一定温度产生气泡 变色或浑浊等现象 2 比旋度 基本概念 旋光度 直线偏振光通过含有某些光学活性的化合物液体或溶液时 能引起旋光现象 使偏振光的平面向左或向右旋转 旋转的度数 称为旋光度 分子结构中具有不对称的碳原子 并以单一对映体形式存在的有机物 大都具有旋光作用 比旋度 偏振光透过长ldm且每lml中含有旋光性物质1g的溶液 在一定波长与温度下测得的旋光度称为比旋度 比旋度的应用A 用于鉴别药物或检查药物的纯杂程度B 用于含量测定 基本原理中国药典 2010年版 规定 除另有规定 采用钠光谱的D线 589 3nm 测定旋光度 测定管长度为1dm 测定温度为20 公式一 对液体供试品 则 公式二 对固体样品 则 d 液体的相对密度 C 每100ml溶液中含有被测物质的中重量 g 测定方法 读数方法 用相同法读取旋光度3次 取3次的平均数 按公式计算供试品的比旋度 注意事项 重复校正 温度 调节温度至20 0 5 保证溶液澄清 3 折光率测定 基本原理i 光的入射角r 折射角可进行鉴别 检查纯杂程度或测定其含量 测定方法 注意事项采用钠光D线 589 3nm 测定供试品相对于空气的折光率 除另有规定外 供试品温度为20 折光计读数至0 0001 测量范围 1 3 1 7 4 粘度测定 粘度 粘度系指流体对流动的阻抗能力 中国药典把粘度分为以下三种 动力粘度 运动粘度 特性粘数 平氏粘度计 适于测定牛顿流体的动粘度或动力粘度 测定方法旋转式粘度计 适于测定非牛顿流体的动力粘度乌氏粘度计 适于测定高聚物溶液的特性粘度 5 吸收系数 在给定的波长 溶剂和温度等条件下 吸光物质在单位浓度 单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数 是吸光物质的重要物理常数 有两种表示方式 摩尔吸收系数和百分吸收系数 测定方法 采用精制品 用5台不同的仪器测定溶剂要求 对供试品化学惰性 所用溶剂在测定波长处符合透光限度要求 避免使用低沸点 易挥发的溶剂常用溶剂 水 缓冲液 稀酸或稀碱溶液使用配对的比色皿使用配制供试品溶液同批溶剂做空白 采用低浓度测定时A为0 3 0 4 高浓度测定A为0 6 0 8 6 pH值的测定 注意事项 1 测定前 按各品种项下的规定 选择两种pH值约相差3个pH单位的标准缓冲液 并使供试液的pH值处于两者之间 2 取与供试液pH值较接近的第一种标准缓冲液对仪器进行校正 定位 使仪器示值与表列数值一致 3 仪器定位后 再用第二种标准缓冲液核对仪器示值 误差应不大于 0 02pH单位 若大于此偏差 则应小心调节斜率 使示值与第二种标准缓冲液的表列数值相符 重复上述定位与斜率调节操作 至仪器示值与标准缓冲液的规定数值相差不大于0 02pH单位 4 每次更换标准缓冲液或供试液前 应用纯化水充分洗涤电极 然后将水吸尽 也可用所换的标准缓冲液或供试液洗涤 5 配制标准缓冲液与溶解供试品的水 应是新沸过并放冷的纯化水 pH值应为5 5 7 0 6 标准缓冲液一般可保存2 3个月 但发现有浑浊 发霉或沉淀等现象时 不能继续使用 二 一般鉴别试验 一般鉴别试验 是依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征 通过化学反应来鉴别药物的真伪 特点为 是证实药品是某一类药物的依据 是根据药物所具有的性质或结构进行药物的真伪鉴别例 无机药物 根据其组成的阴 阳离子的特殊反应有机药物 采用典型官能团反应 只能确定供试品为某一类药物 而不能证实它是哪一种药物 一般鉴别试验的项目 丙二酰脲类 托烷生物碱类 芳香第一胺类 有机氟化物类 无机金属盐类 钠盐 钾盐 锂盐 钙盐 钡盐 铵盐 镁盐 铁盐 铝盐 锌盐 铜盐 银盐 汞盐 铋盐 锑盐 亚锡盐 有机酸盐 水杨酸盐 枸橼酸盐 乳酸盐 苯甲酸盐 酒石酸盐 无机酸盐 亚硫酸盐或亚硫酸氢盐 硫酸盐 硝酸盐 硼酸盐 碳酸盐与碳酸氢盐 醋酸盐 磷酸盐 氯化物 溴化物 碘化物 有机氟化物的鉴别 第一步 有机氟化物 无机氟化物第二步 无机氟化物 不同试液 呈色的配位化合物例 F 西素氟蓝 硝酸亚铈 蓝紫色配位化合物 pH4 3 注意 必须做空白对照试验 消除干扰 氧瓶燃烧法 碱性溶液吸收 茜素氟蓝 硝酸亚铈 有机酸盐 1 水杨酸盐 两种方法 第一法 三氯化铁的呈色反应 鉴别方法 注意 A 该反应极灵敏B pH值对反应的呈色有影响 中性时呈红色弱酸性时呈紫色强酸性溶液中 溶液褪色 有机酸盐 1 水杨酸盐 两种方法 第二法 沉淀生成反应反应原理 利用水杨酸盐和水杨酸溶解性质的差异来鉴别提示 苯甲酸盐和水杨酸盐属于同类药物 试验方法相似 有机酸盐 2 酒石酸盐 反应原理 鉴别方法 取供试品的中性溶液 置洁净的试管中 加氨制硝酸银试液数滴 置水浴中加热 银即游离并附在试管内壁成银镜 中性 芳香第一胺类 反应原理 奈酚试液要现用现配 不同的供试品 会生成橙黄色到猩红色沉淀 无机金属盐 钠盐 钾盐 钙盐的鉴别试验 1 焰色反应测定原理 不同的金属离子的火焰光谱的谱线不同 所以呈色有所区别 鉴别方法 取铂丝 用盐酸湿润后 在无色火焰中燃烧不呈色后 再蘸取供试品 燃烧 火焰即显各离子的特征颜色 无机金属盐 2 其它鉴别试验 钠盐 供试品 醋酸氧铀锌试液黄色沉淀 钾盐供试品 0 1 四苯硼钠溶液与醋酸白色沉淀 钙盐供试品 草酸铵试液白色沉淀不溶于醋酸溶于盐酸 中性溶液 炽灼 以除去可能含有的铵盐 甲基红指示液2滴 用氨试液中和 再滴加盐酸至呈酸性分离 pH 4 三 专属鉴别试验 根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性的不同 选用某些特有的灵敏定性反应 来鉴别药物真伪的 是证实药物是某一种药物的依据 能区别同类药物或具有相同化学结构部分的各药物单体 达到最终确认药物真伪的目的 例 巴比妥类药物的鉴别 一般的鉴别试验 利用药物所具有丙二酰脲母核 专属的鉴别试验 各种药物的取代基不同 可用于鉴别 苯巴比妥含有苯环 可以和NaNO2 H2SO4反应 司可巴比妥含有双键 可以使碘液褪色 硫喷妥钠含有硫原子 有硫元素的反应 第三节鉴别方法 要求 专属性强 耐用性好 灵敏度高 操作简便快速方法 化学法 光谱法 色谱法 生物学法适用范围 原料药 化学法 光谱法 色谱法等制剂 一般同原料药 注意制剂中辅料的干扰 主药含量低方法的灵敏度等 一 化学鉴别法要求 反应迅速 反应现象明显1 干法鉴别 焰色反应 利用药物中所含有的某些元素所具有的特异焰色 使火焰显出特殊的颜色 加热分解 在适当的温度条件下 加热使供试品分解 生成有特殊气味的气体 2 湿法鉴别 1 利用呈色反应鉴别 三氯化铁呈色反应 含有酚羟基或水解后产生酚羟基的药物 异羟肟酸铁反应 芳酸及其酯类 酰胺类药物 茚三酮呈色反应 化学结构中含有脂肪氨基药物 重氮化 偶合反应 含有芳伯氨基或能产生芳伯氨基的药物 氧化还原显色反应及其它颜色反应 2 湿法鉴别 2 沉淀生成反应鉴别法 与重金属离子的沉淀反应 与硫氰化铬铵 雷氏盐 的沉淀反应 其它沉淀反应 2 湿法鉴别 3 利用气体生成反应鉴别 可经强碱处理后加热产生氨气 用于胺类 酰脲类以及某些酰胺类药物 可经强酸处理后加热产生硫化氢气体 用于化学结构中含硫的药物 经直火加热 可生成紫色碘蒸气 含碘有机药物 经硫酸水解后加醇可产生醋酸乙酯的香味 含醋酸酯和乙酰胺类药物 2 湿法鉴别 4 荧光反应鉴别法 药物本身可在可见光下发射荧光 药物溶液加硫酸使呈酸性后 在可见光下发射荧光 药物和溴反应后 于可见光下发射出荧光 药物和间苯二酚反应后 发射出荧光及药物经其它反应后 发射荧光 5 测定生成物的熔点 6 使试剂褪色 二 光谱鉴别法 1 紫外光谱鉴别法 1 测定最大吸收波长 或同时测定最小吸收波长 max min 2 规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度 在C和 max处 A应为某一值 3 规定吸收波长和吸收系数法 在某 处 E或 应为某一值 4 规定吸收波长和吸收度比值法 A1 A2应在某一范围内 5 经化学处理后 测定其反应产物的吸收光谱特性 2 红外光谱鉴别法 红外光谱法专属性高 特征性强 是用于鉴别单一组分 结构明确的原料药的首选方法 尤其适用于同类药物的不同药物单体的鉴别标准图谱对照法 中国药典 2005年版 制样方法 压片法 糊法 膜法 溶液法 三 色谱鉴别法 原理 利用不同物质在不同色谱条件下 有各自不同的特征色谱行为 保留时间或保留体积 进行鉴别试验 1 薄层色谱鉴别法 2 高效液相色谱和气相色谱鉴别法 3 质谱法 4 高效毛细管电泳法 四 显微鉴别法五 生物学法生物学法是利用微生物或实验动物进行鉴别的方法 六 指纹图谱与特征图谱鉴别法 第四节鉴别试验条件 1 溶液的浓度例 对离子反应颜色 如被测离子的浓度太低 与试剂作用产生的颜色太浅 不易鉴别 可以浓缩 如供试品的浓度太高 与试剂作用产生的颜色过深 也不易鉴别 可以稀释 水杨酸及盐与三氯化铁反应 供试品浓度过大时 颜色不易判断 要稀释 2 溶液的温度温度对化学反应的影响主要通过改变反应的速率产生的 一般温度每升高10 可以使反应速度增加2