水中细菌总数测定.ppt

水中的细菌总数测定 培养基的配制消毒与灭菌水中细菌总数的测定菌落计数法 一 实验目的 二 实验原理 三 实验器材 四 实验方法 五 实验作业 培养基的制备与灭菌 一 实验目的 1 明确培养基的配制原则 2 掌握配制培养基的一般方法和步骤 3 了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围 4 掌握高压蒸汽灭菌技术 了解几种常用灭菌方法 二 实验原理 培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质 用人工方法配制而成的一种基质 它包括碳源 氮源 能源 生长因子 无机盐和水六类营养要素 由于不同微生物细胞组成不同 因而所需营养基质不同 为了分离 培养和鉴定不同的微生物 必须根据其需要 配制合适的培养基 培养基的种类繁多 根据培养基的成分 物理性状不同 可分为天然培养基 合成培养基 半合成培养基 固体培养基 半固体培养基和液体培养基 常用加热灭菌法 1 干热灭菌 用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌2 湿热灭菌 高压蒸汽灭菌法 间歇灭菌法 煮沸消毒法 灭菌是指应用物理或化学的方法 杀灭物体表面和内部一切微生物营养体 芽孢和孢子 灭菌方法很多 可分为加热 过滤 照射和化学药品法等 三 实验器材 1 药品和试剂 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 10 NaOH溶液 10 盐酸溶液 2 器材 天平 药匙 瓷缸 玻璃棒 电炉 PH试纸 试管 三角瓶 分装漏斗 牛皮纸 棉花 线绳 干燥箱 高压锅 1 称量按照培养基配方 准确称量各成份放于瓷缸中 配方 牛肉膏5 0g 蛋白胨10 0g NaCl5 0g 琼脂20 0g 蒸馏水1000ml pH7 0 四 实验方法 培养基的制备过程称量 溶解 调节pH值 过滤 分装及包扎 灭菌 灭菌后试管摆放斜面 2 溶解向上述瓷缸中加入所需要的水量 搅拌 加热使其溶解 如是配制固体培养基 在琼脂的熔化过程中 需不断搅拌 并控制火力不要使培养基溢出或烧焦 待完全熔化后 补足所失水分 3 调节pH值用玻璃棒沾少许液体 测量PH值 用氢氧化钠和盐酸调节PH 4 过滤用滤纸或多层纱布过滤 一般无特殊要求可省去 5 分装及包扎根据不同的需要 可将制好的培养基分装入试管内 用分装漏斗 或三角瓶内 管 瓶 口塞上棉塞 最后用牛皮纸将棉塞部分包好 6 灭菌 高压蒸汽灭菌 1210C灭菌20分钟 7 灭菌后试管摆放斜面 注意事项 1 称取药品时严防药品混杂 一把牛角匙称一种药品 2 蛋白胨极易吸湿 称取时动作要迅速 2 配制固体培养基时 先将其他药品加热溶解到快沸时 再将称好的琼脂加入 继续加热至琼脂完全熔化 此过程要不断搅拌 以免琼脂糊底 并控制火力 防止沸腾外溢 4 分装量根据试管大小和实际需要而定 固体培养基装量约为管高的1 5 液体培养基的装量约为管高的1 4 三角瓶的装量不超过瓶体的1 2 5 分装过程中注意不要将培养基沾在管 瓶 口上 以免沾污棉塞而引起污染 返回 五 实验作业 为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效 消毒与灭菌 1 干热灭菌法2 高压蒸汽灭菌3 紫外线灭菌法 二 高压蒸汽灭菌1 原理利用加热一个密闭的加压灭菌锅 使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气 由于蒸气不能溢出 而增加了灭菌锅内的压力 从而使沸点增高 得到高于100 的温度 导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的 一般培养基用0 1Mpa 121 5 15 30min2 步骤 加水 装待灭菌物品 加盖 加热 灭菌时间到后断电源 压力降为零开箱取物 三 紫外线灭菌法1 原理紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联 从而抑制了DNA的复制 另一方面 由于辐射能使空气中的氧电离成 O 再使O2氧化生成臭氧或使水氧化生成H2O2 O3和H2O2均有杀菌作用 适用于无菌室 接种箱 手术室内的空气及物体表面的灭菌 2 步骤1 单用紫外灯在无菌室内或在接种箱内打开紫外线灯开关 照射30min 将开关关闭 2 化学消毒剂与紫外线照射结合使用在无菌室内 先喷洒化学消毒剂溶液 再用紫外线灯照射15imn 水中细菌总数测定 一 水样的采集 1 采水容器 采样瓶 具磨口玻塞的500mL广口瓶 采样瓶的洗涤 采样瓶的灭菌 160 170 干热灭菌2h 或用高压蒸汽灭菌器 121 灭菌15min 一 水样的采集 2 采样步骤及注意事项 1 去氯和高浓度重金属 灭菌前按500mL采样瓶加入0 3mL10 Na2S2O3溶液 2 采集江 河 湖 库等地表水样时 可握住瓶子下部直接将已灭菌的带塞采样瓶插入水中 约距水面10 15cm处采集 3 采集一定深度的水样时 可使用单层采水器或深层采水器 4 从自来水龙头采集样品时 采水前可先将水龙头打开至最大 放水3 5min 用酒精灯火焰灼烧约3min灭菌 5 在同一采样点进行分层采样时 应自上而下进行 以免不同层次的搅扰 同一采样点与理化监测项目同时采样时 应先采集细菌学检验样品 6 采样完毕 做好记录 二 样品保存 采好的水样 应迅速运往实验室 进行细菌学检验 一般从取样到检验不宜超过2h 否则应使用10 以下的冷藏设备保存样品 但不得超过6h 细菌总数的测定 细菌总数 指lmL水样在营养琼脂培养基中 于37 培养24h后 所生长细菌菌落的总数 一 细菌总数测定的意义 可以反映水体有机污染的程度