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实验九抗酸染色 临床病原生物学教研室 一 实验目的 掌握抗酸染色的原理和方法掌握结核分枝杆菌痰涂片的结果报告 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质 包围在肽聚糖的外面 一般水溶性染料不易进入 所以分枝杆菌一般不易着色且一旦染色后不易脱色 所以要经过加热和延长染色时间来促使其着色 因分枝菌酸与染料结合后 很难被酸性脱色剂脱色 故分枝杆菌又称抗酸杆菌 二 实验原理 三 实验材料 细菌 结核杆菌染液 石炭酸复红液 3 盐酸酒精 碱性美兰溶液其它 接种环 酒精灯 载玻片等 四 实验方法1 细菌涂片的制备1 涂片 20mm 15mm厚涂片 竹签挑取 涂2 3遍2 干燥 自然干燥 或火焰3 固定 火焰固定 必须 2 染色1 初染 滴加石炭酸复红适量 在火焰高处徐徐加热 切勿沸腾 出现蒸汽暂时离开火焰 若染液蒸发减少 应再加染液 以免干涸 加热5min 可延长 待标本冷却后用水冲洗 2 脱色 3 盐酸酒精脱色30sec 1min至无红色液体流下 再用水冲洗 3 复染 用碱性美兰溶液复染1min 用水冲洗后用吸水纸吸干 3 油镜观察 五 实验结果 1 结核杆菌呈红色 常堆积成团 排列无序 偶呈分枝状生长 2 背景及非抗酸性细菌呈兰色 六 注意事项 1 涂片要充分研磨 防止细菌成团2 涂片大小 厚度要适中3 固
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