医药卫生霍乱检测课件

弧菌属 Vibrio 侯珏临床微免教研室 目的与要求1 掌握霍乱弧菌及副溶血弧菌的主要生物学性状 微生物鉴定方法2 熟悉霍乱弧菌及副溶血弧菌致病性 一 概述 弧菌科包括4个菌属弧菌属气单胞菌属邻单胞菌属发光杆菌属共性 革兰氏染色阴性氧化酶阳性发酵糖类具有极端单鞭毛 弧菌属 分布广泛 水中最多共36个种 引起人类致病的14种短小弧形 革兰阴性菌单鞭毛能发酵葡萄糖氧化酶阳性对弧菌抑制剂O 129 二氨基二异丙基喋啶 敏感钠离子能刺激其生长 一霍乱弧菌 Vibriocholerae 霍乱弧菌是霍乱的病原菌我国 传染病防治法 甲类传染病国际检疫的烈性传染病到目前为止共发生了七次霍乱世界大流行 流行情况1817 1923年六次大流行 均从印度恒河三角洲发源地 古典生物型1961年第七次大流行ElTor生物型1992年亚洲流行 印度 盂加拉 泰国 O139群 一 生物学特性 形态与染色 革兰氏染色阴性弧型或逗点状 米泔水样粪便涂片镜检 可见 鱼群样排列 单端单鞭毛 无荚膜 无芽胞活菌悬滴镜检 可见 穿梭或流星状运动 霍乱弧菌 革兰染色 1000倍 Vibriocholeraewithitssinglepolarflagellum 营养要求不高 生长较快兼性厌氧最适生长温度 37 怕酸嗜碱 最适pH 7 2 7 4pH 7 4 9 6快速生长 培养特性 培养特性 选择性的增菌培养基 碱性蛋白胨水pH8 5常用的强选择性培养基 庆大霉素琼脂 GTA pH8 4 8 5四号琼脂pH8 4硫代硫酸盐 枸橼酸盐 胆盐 蔗糖琼脂平板 TCBS琼脂 pH8 6常用的弱选择性培养基 碱性琼脂pH8 4碱性胆盐琼脂pH8 4 培养特性 菌落特征TCBS琼脂 形成圆形 微凸 表面光滑湿润整齐 大黄色菌落庆大霉素培养基 扁平 湿润 半透明菌落中心呈灰褐色血琼脂上形成的菌落较大 ELTor生物型可形成 溶血 霍乱弧菌培养于TCBS琼脂 37 18小时 发酵蔗糖产酸而使菌落呈黄色 生化反应 发酵葡萄糖 甘露醇 蔗糖 产酸不产气能分解色氨酸赖氨酸 鸟氨酸脱羧酶 精氨酸双水解酶 氧化酶 抗原性 O抗原 耐热 耐受100 2h特异性高 分群和分型的基础H抗原 不耐热 特异性低 抗原性 根据O抗原不同 霍乱弧菌分155个血清群根据与O1抗血清凝集与否 O1群 与O1抗血清凝集 非O1群 与O1抗血清凝集 O1群根据表型差异 古典生物型ELTor生物型菌体抗原 A B C 不同 小川型 AB 稻叶型 AC 彦岛型 ABC 血清型 O1群霍乱弧菌的菌体抗原由A B C三个抗原成份组成 性状 生物型古典型ELTor 组噬菌体裂解 组噬菌体裂解 对多粘菌素B的敏感性 鸡RBC凝集 羊RBC溶血 V P 霍乱弧菌两个生物型的鉴别 生物型 根据表型差异 O1群霍乱弧菌有古典生物型和E1Tor生物型之分 鸡红细胞凝集试验 在玻片上滴加生理盐水一滴 取被检菌18 24h培养物少许在盐水中制成浓厚菌悬液 然后加一滴2 5 鸡红细胞悬液 充分混匀 1min内出现凝集者为阳性 红细胞呈均匀分散者为阴性 ElTor生物型为阳性 古典型为阴性 分型和分群 一 血清學分群 型 血清群生物型血清型古典型小川型 AB 稻叶型 AC 彦岛型 ABC O1群小川型 AB ElTor型稻叶型 AC 彦岛型 ABC 非O1群 O2 群 变异性 抵抗力水中存活20天怕酸耐碱庆大霉素耐药消毒漂白粉 吐泻物 1 4 1hr 二 临床意义 致病物质侵袭力 鞭毛菌毛霍乱肠毒素 choleraenterotoxin CE 致病机理 霍乱弧菌 胃 对酸敏感 很快被杀死 肠 胃酸降低或缺乏 菌体增多 鞭毛 菌毛 粘液素酶 绒毛上大量繁殖 CT的B亚单位结合神经节苷脂受体 形成膜通道 A1肽链进入细胞 ATP cAMP 大量体液和电解质进入肠腔而发生剧烈吐泻 大量脱水和失盐 发生代谢性酸中毒 血循环衰竭 甚至休克或死亡 激活腺苷酸环化酶系统 粘膜细胞分泌亢进 Na Cl 吸收抑制 二 临床意义 所致疾病霍乱 烈性肠道传染病我国的法定传染病 甲类 表现为剧烈的上吐下泻泻出物呈 米泔水样 并含大量弧菌 此为本病典型的特征 微生物学检查 标本采集粪便 主 肛拭子呕吐物尸体肠内容物采得的标本应立即接种于培养基不能立即检查的 要放入碱性蛋白胨水或插入Cary Blair运送培养基中标本与保存液比例约为1 5 检验程序 标本直接检查碱胨水增菌培养直接荧光抗体染色CT测定直接涂片凝集试验动力及制动试验TCBS等分离培养血清学鉴定药敏试验初步报告生化鉴定 分型确诊报告 检验方法一 直接检查1 直接涂片镜检 革兰氏染色阴性 鱼群状排列的弧菌2 动力及制动试验动力观察 采取病人 米泔水样 大便或呕吐物制成悬滴片 观察细菌动力 可见流星或穿梭状动力的细菌 制动试验 标本 霍乱多价诊断血清 效价1 64 用暗视野镜观察 3分钟内运动被抑制的即为阳性快速而特异操作简便 但必须有数量较多的弧菌才检出3 直接荧光抗体染色4 CT测定 检验方法二 分离培养 分离用的培养基有强 弱2种选择培养基 弱选择培养基 碱性琼脂和碱性胆盐琼脂 强选择培养基 常用的有庆大霉素琼脂 4号琼脂和TCBS琼脂等现多采用碱性蛋白胨水增菌 再用强选择培养基进行分离 检验方法三 鉴定以血清学 玻片凝集 为主 结合形态学 生化反应作出判断1 玻片凝集试验 试剂 O1群霍乱弧菌多价和单价诊断血清O139群诊断血清方法 从分离培养基上挑取可疑菌落于霍乱弧菌多价诊断血清作玻片凝集试验 诊断血清应稀释成1 32 1 64的效价使用 立即出现凝集者为阳性 同时设生理盐水和阳性细菌株对照 2 形态学检查取纯培养物涂片革兰氏染色 观察菌体形态及染色性用悬滴法或半固体穿刺法检测动力 3 生化反应分解葡萄糖 蔗糖 产酸不产气 氧化酶试验 吲哚 赖氨酸 鸟氨酸脱羧酶 精氨酸双水解酶 霍乱红试验 粘丝试验 O 129敏感试验 耐盐试验 3 NaCl 6 NaCl 0 NaCl 10 NaCl 红色 硝酸盐亚硝酸盐色氨酸靛基质浓硫酸 霍乱红反应 choleraredtest 5 分型鉴定 1 使用小川型及稻叶型的单价血清作玻片凝集反应小川型单价血清凝集稻叶型单价血清小川型 稻叶型 彦岛型 2 古典型和埃尔托型的鉴别我国流行以ElTor 小川型霍乱弧菌为主 鉴定依据 1 形态学G 弧菌或杆菌 具有活泼动力 制动试验阳性 2 培养特点弧菌选择培养基上菌落形态典型 3 血清学能与霍乱弧菌诊断血清发生明显凝集 4 生化反应分解葡萄糖 蔗糖 产酸不产气氧化酶试验 霍乱红试 粘丝试验 O 129敏感试验 报告方式 1 标本直接镜检 见形态典型 运动活泼 制动试验 可作初报 2 若确定为霍乱弧菌时 可报告 经培养有霍乱弧菌生长 139型霍乱弧菌O139血清群它是已发现的第一个能引起霍乱流行的非 1群霍乱弧菌目前世界卫生组织规定 霍乱病原菌包括O1群霍乱弧菌与O139群霍乱弧菌与 1群霍乱弧菌O抗原不同 O22群与O155群有交叉反应对弧菌抑制剂 129的低浓度和高浓度均具有抗性具有荚膜对多种抗生素耐药 副溶血弧菌Vibrioparahaemolyticus 概述 副溶血弧菌隶属于弧菌科弧菌属 是一种具有嗜盐性的细菌 需在NaCl浓度较高 3 4 左右 的环境中才能生长繁殖 是沿海地区食物中毒和急性腹泻的主要病原菌 生物学性状 形态与染色 革兰阴性菌杆状无荚膜 无芽胞单鞭毛 培养特性 具有嗜盐性 氯化钠的最适浓度为3 5 增菌培养基 1 NaCl碱性蛋白胨水或4 NaCl蛋白胨水TCBS琼脂 菌落圆形 隆起 光滑 湿润 不透明 蓝绿色SS琼脂 2 3mm 扁平 无色 半透明 蜡滴状 菌落不易挑起我妻琼脂培养集 溶血 神奈川现象 KP 生物学性状 生物学性状 生化反应 1 耐盐试验3 NaCl 7 NaCl 0 NaCl 10 NaCl 2 神奈川现象 3 氧化酶 蔗糖 吲哚试验 赖氨酸脱羧酶 鸟氨酸脱羧酶 抗原构造与血清学分型 1 鞭毛 H 抗原 2 菌体 O 抗原是分群的依据 3 表面 K 抗原 生物学性状 抵抗力 抵抗力弱不耐冷不耐热65 30min即被杀死耐碱怕酸 生物学性状 二 临床意义 1 致病因素 粘附因子和毒素 1 菌毛 2 毒素1 耐热性溶血素细胞致死活性溶血作用肠毒性作用心脏毒性2 耐热相关溶血素2 所致疾病食物中毒 急性胃肠炎 三 微生物学检测1 标本采集取粪便 肛拭子和可疑食物 2 检验程序标本增菌培养 4 NaCl蛋白胨水 分离培养 TCBS 可疑菌落 绿色 纯培养 营养琼脂 毒素测定鉴定 生化 血清学检验 3 检验方法 1 增菌培养 1 NaCl的碱性蛋白胨水4 NaCl的蛋白胨水35 6 8h 2 分离培养 标本 增菌培养物 TCBS琼脂35 18 24h 3 鉴定 嗜盐性试验 3 NaCl 7 NaCl 0 NaCl 10 NaCl 氧化酶阳性 蔗糖阴性 赖氨酸 鸟氨酸脱羧