实验常用试剂、缓冲液的配制方法.doc

实验常用试剂 缓冲液的配制方法实验常用试剂 缓冲液的配制方法 1 1M Tris HCl 组份浓度 1 M Tris HCl pH7 4 7 6 8 0 配制量 1L 配置方法 1 称量 121 1gTris 置于 1L 烧杯中 2 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 按下表量加入浓盐酸调节所需要的 pH 值 pH 值 浓 HCl 7 4 约 70mL 7 6 约 60mL 8 0 约 42mL 4 将溶解定容至 1L 5 高温高压灭菌后 室温保存 注意 应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值 因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差很大 温度每升高 1 溶液的 pH 值大约降低 0 03 个单位 2 1 5 M Tris HCl 组份浓度 1 5 M Tris HCl pH8 8 配制量 1L 配置方法 1 称取 181 7gTris 置于 1L 烧杯中 2 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 用浓盐酸调 pH 值至 8 8 4 将溶液定容至 1L 5 高温高压灭菌后 室温保存 注意 应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值 因为 Tris 溶液 的 pH 值随温度的变化差异很大 温度每升高 1 溶液的 pH 值 大约降低 0 03 个单位 3 10 TE Buffer 组份浓度 100 mM Tris HCl 10 mM EDTA pH 7 4 7 6 8 0 配制量 1L 配置方法 1 量取下列溶液 置于 1L 烧杯中 1 M Tris HCl Buffer pH7 4 7 6 8 0 100mL 500 mM EDTA pH8 0 20mL 2 向烧杯中加入约 800mL 的去离子水 均匀混合 3 将溶液定至 1L 后 高温高压灭菌 4 室温保存 4 3 M 醋酸钠醋酸钠 组份浓度 3 M 醋酸钠 pH5 2 配制量 100mL 配置方法 1 称取 40 8gNaOAc 3H2O 置于 100 200mL 烧杯 中 加入约 40mL 的去离子水搅拌溶解 2 加入冰乙酸调节 pH 值至 5 2 3 加入去离子水将溶液定容至 100mL 4 高温高压灭菌后 室温保存 5 PBS Buffer 组份浓度 137 mM NaCl 2 7mM KCl 10 mM Na2HPO4 2 mM KH2PO4 配制量 1L 配置方法 1 称量下列试剂 置于 1L 烧杯中 NaCl 8 g KCl 0 2g Na2HPO4 1 42 g KH2PO4 0 27g 2 向烧杯中加入约 800 mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 滴加 HCl 将 pH 值调节至 7 4 然后加入去离子水将溶液定 容至 1L 4 高温高压灭菌后 室温保存 注意 上述 PBS Buffer 中无二价阳离子 如需要 可在配方 中补充 1mM CaCl2 和 0 5 mM MgCl2 6 10 M 醋酸铵醋酸铵 组份浓度 10 M 醋酸铵 配制量 100mL 配置方法 1 称量 77 1g 醋酸铵置于 100 200 mL 烧杯中 加 入约 30 mL 的去离子水搅拌溶解 2 加去离子水将溶液定容至 100mL 3 使用 0 22 m 滤膜过滤除菌 4 密封瓶口于室温保存 注意 醋酸铵受热易分解 所以不能高温高压灭菌 7 Tris HCl 平衡苯酚平衡苯酚 配置方法 1 使用原料 大多数市售液化苯酚是清亮无色的 无需重蒸 馏便可用于分子生物学实验 但有些液化苯酚呈粉红色或黄色 应避免使用 同时也应避免使用结晶苯酚 结晶苯酚必须在 160 对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物 这些氧化产物可引 起磷酸二酯键的断裂或导致 RNA 和 DNA 的交联等 因此 苯酚 的质量对 DNA RNA 的提取极为重要 我们推荐使用高质量的 苯酚进行分子生物学实验 2 操作注意 苯酚腐蚀性极强 并可引起严重灼伤 操作时 应戴手套及防护镜等 所有操作均应在通风橱中进行 与苯酚接 触过的皮肤部位应用大量水清洗 并用肥皂和水洗涤 忌用乙醇 3 苯酚平衡 因为在酸性 pH 条件下 DNA 分配于有机相 因 此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其 pH 值达到 7 8 以上 苯酚 平衡操作方法如下 液化苯酚应贮存于 20 此时的苯酚呈现结晶状态 从 冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温 然后在 68 水浴中使苯酚充分溶解 加入羟基喹啉 8 Quinolinol 至终浓度 0 1 该化合物 是一种还原剂 RNA 酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂 同时因其呈黄色 有助于方便识别有机相 加入等体积的 1M Tris HCl pH8 0 使用磁力搅拌器 搅拌 15 分钟 静置使其充分分层后 除去上层水相 重复操作步骤 加入等体积的 0 1M Tris HCl pH8 0 使用磁力搅拌器 搅拌 15 分钟 静置使其充分分层后 除去上层水相 重复操作步骤 稍微残留部分上层水相 使用 pH 试纸确认有机相的 pH 值大于 7 8 将苯酚置于棕色玻璃瓶中 4 避光保存 8 苯酚 苯酚 氯仿氯仿 异戊醇异戊醇 配置方法 1 说明 从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯 酚 氯仿 异 戊醇 25 24 1 氯仿可使蛋白 25 24 1 质变性并有 助于液相与有机相的分离 而异戊醇则有助于消除抽提过程中出 现的气泡 2 配置方法 将 Tris HCl 平衡苯酚与等体积的氯仿 异戊醇 24 1 均匀混合后 移入棕色玻璃瓶中 4 保存 9 10 W V SDS 组份浓度 10 W V SDS 配制量 100mL 配置方法 1 称量 10g 高纯度的 SDS 置于 100 200mL 烧杯中 加入约 80mL 的去离子水 68 加热溶解 2 滴加数滴浓盐酸调节 pH 值至 7 2 3 将溶液定容至 100mL 后 室温保存 10 2 N NaOH 组份浓度 2N NaOH 配制量 100mL 配置方法 1 量取 80mL 去离子水置于 100 200mL 塑料烧杯中 NaOH 溶解过程中大量放热 有可能使玻璃烧杯炸裂 2 称取 8g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中 边加边搅拌 3 待 NaOH 完全溶解后 用去离子水将溶液体积定容至 100mL 4 将溶液转移至塑料容器中后 室温保存 11 2 5 N HCl 组份浓度 2 5 N HCl 配制量 100mL 配置方法 1 在 78 4mL 的去离子水中加入 21 6mL 的浓盐酸 11 6N 均匀混合 2 室温保存 12 5 M NaCl 组份浓度 5 M NaCl 配制量 1L 配置方法 1 称取 292 2g NaCl 置于 1L 烧杯中 加入约 800mL 的去离子水后搅拌溶解 2 加去离子水将溶液定容至 1L 后 适量分成小份 3 高温高压灭菌后 4 保存 13 20 W V Glucose 组份浓度 20 W V Glucose 配制量 100mL 配置方法 1 称取 20g Glucose 置于 100 200mL 烧杯中 加入 约 80mL 的去离子水后 搅拌溶解 2 加去离子水将溶液定容至 100mL 3 高温高压灭菌后 4 保存 14 Solution I 组份浓度 25 mM Tris HCl pH8 0 10mM EDTA 50mM Glucose 质粒提取用 配制量 1L 配置方法 1 量取下列溶液 置于 1L 烧杯中 1M Tris HCl pH8 0 25mL 0 5 M EDTA pH8 0 20mL 20 Glucose 1 11M 45mL dH2O 910mL 2 高温高压灭菌后 4 保存 3 使用前每 50 mL 的 Soliution I 中加入 2mL 的 RNase A 20mg mL 15 Solution II 组份浓度 250mM NaOH 1 W V SDS 质粒提取用 配制量 500mL 配置方法 1 量取下列溶液置于 500mL 烧杯中 10 SDS 50mL 2N NaOH 50mL 2 加灭菌水定容至 500mL 充分混匀 3 室温保存 此溶液保存时间最好不要超过一个月 注意 SDS 易产生气泡 不要剧烈搅拌 16 Solution III 组份浓度 3M KOAc 5M CH3COOH 质粒提取用 配制量 500mL 配置方法 1 量取下列溶液置于 500mL 烧杯中 KOAc 147g CH3COOH 57 5mL 2 加入 300mL 去离子水后搅拌溶解 3 加去离子水将溶液定容至 500mL 4 高温高压灭菌后 4 保存 17 0 5M EDTA 组份浓度 0 5 M EDTA pH8 0 配制量 1L 配置方法 1 称取 186 1g Na2EDTA 2H2O 置于 1L 烧杯中 2 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌 3 用 NaOH 调节 pH 值值 8 0 约 20g NaOH 注意 pH 值至 8 0 时 EDTA 才能完全溶解 4 加去离子水将溶液定容至 1L 5 适量分成小份后 高温高压灭菌 6 室温保存 18 1 M DTT 组份浓度 1 M DTT 配制量 20mL 配置方法 1 称取 3 09g DTT 加入到 50mL 塑料离心管内 2 加 20mL 的 0 01 M 的 NaOAc pH5 2 溶 解后使用 0 22 m 滤器过滤除菌 3 适量分成小份后 20 保存 19 10mM ATP 组份浓度 10mM ATP 配制量 20mL 配置方法 1 称取 121mg Na2ATP 3H2O 加入到 50mL 塑料离 心管内 2 加 20mL 的 25mM Tris HCl pH8 0 搅拌溶解 3 适量分成小份 20 保存 分子生物学实验常用培养基的配制方法分子生物学实验常用培养基的配制方法 1 Ampicillin 组份浓度 100mg ml Ampicillin 100mg ml 配制量 50mL 配置方法 1 称量 5g Ampicillin 置于 50mL 离心管中 2 加入 40mL 灭菌水 充分混合溶解后 定容至 50mL 3 用 0 22 m 滤膜过滤除菌 4 小份分装 1mL 份 后 20 保存 2 IPTG 组份浓度 24mg mL IPTG 24mg mL 配制量 50mL 配置方法 1 称量 1 2g IPTG 置于 50mL 离心管中 2 加入 40mL 灭菌水 充分混合溶解后 定容至 50mL 3 用 0 22 m 滤膜过滤除菌 4 小份分装 1mL 份 后 20 保存 3 X Gal 组份浓度 20mg mL X Gal 20mg mL 配制量 50mL 配置方法 1 称取 1g X Gal 置于 50mL 离心管中 2 加入 40mL DMF 二甲基甲酰胺 充分混合 溶解后 定容至 50mL 3 小份分装 1mL 份 后 20 保存 4 LB 培养基培养基 组份浓度 1 W V Tryptone 0 5 W V Yeast Extract 1 W V NaCl 配制量 1L 配置方法 1 称量下列试剂 置于 1L 烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 滴加 5N NaOH 约 0 2mL 调节 pH 值至 7 0 4 高温高压灭菌后 4 保存 5 LB Amp 培养基培养基 组份浓度 1 W V Tryptone 0 5 W V Yeast Extract 1 W V NaCl 0 1mg mL Ampicillin 配制量 1L 配置方法 1 称量下列试剂 置于 1L 烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 滴加 5N NaOH 约 0 2mL 调节 pH 值至 7 0 4 加去离子水将培养基定容至 1L 5 高温高压灭菌后 冷却至室温 6 加入 1mL Ampicillin 100mg mL 后均匀混合 7 4 保存 6 TB 培养基培养基 组份浓度 1 2 W V Tryptone 2 4 W V Yeast Extract 0 4 V V Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 配制量 1L 配置方法 1 配制磷酸盐缓冲液 0 17M KH2PO4 0 72M K2HPO4 100mL 2 称取下列试剂 置于 1L 烧杯中 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 4 加去离子水将培养基定容至 1L 后 高温高压灭菌 5 待溶液冷却至 60 以下时 加入 100mL 的上述灭菌 磷酸盐缓冲液 6 4 保存 7 TB Apm 培养基培养基 组份浓度 1 2 W V Tryptone 2 4 W V Yeast Extract 0 4 V V Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0 1mg mL Ampicillin 配制量 1L 配置方法 1 配制磷酸盐缓冲液 0 17M KH2PO4 0 72M K2HPO4 100mL 溶解 2 31g KH2PO4 和 2 54g K2HPO4 于 90mL 的去离子 水中 搅拌溶解后 加去离子水定容至 100mL 高温高压灭菌 2 称取下列试剂 置于 1L 烧杯中 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 4 加去离子水将培养基定容至 1L 后 高温高压灭菌 5 待溶液冷却至 60 以下时 加入 100mL 的上述灭菌磷酸盐缓 冲液和 1mL Ampicillin 100mg mL 6 均匀混合后 4 保存 8 SOB 培养基培养基 组份浓度 2 W V Tryptone 0 5 W V Yeast Extract 0 05 W V NaCl 2 5mM KCl 10mM MgCl2 配制量 1L 配置方法 1 配制 250mM KCl 溶液 在 90mL 的去离子水中溶解 1 86g KCl 后 定容至 100mL 2 配制 2M MgCl2 溶液 在 90mL 的去离子水中溶解 19g MgCl2 后 定容至 100mL 高温高压灭菌 3 称取下列试剂 置于 1L 烧杯中 Tryptone 20g Yeast Extract 5g NaCl 0 5g 4 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 5 量取 10mL 250 mM KCl 溶液 加入到烧杯中 6 滴加 5N NaOH 溶液 约 0 2mL 调节 pH 值至 7 0 7 加入去离子水将培养基定容至 1L 8 高温高压灭菌后 4 保存 9 使用前加入 5mL 灭菌的 2M MgCl2 溶液 9 SOC 培养基培养基 组份浓度 2 W V Tryptone 0 5 W V Yeast Extract 0 05 W V NaCl 2 5mM KCl 10mM MgCl2 20mM 葡萄糖 配制量 100mL 配置方法 1 配制 1M 葡萄糖溶液 将 18g 葡萄糖溶于 90mL 去离子水中 充分溶解后定容至 100mL 用 0 22 m 滤膜过滤除菌 2 向 100mL SOB 培养基中加入除菌的 1M 葡萄糖溶液 2mL 均 匀混合 3 4 保存 10 2 YT 培养基培养基 组份浓度 1 6 W V Tryptone 1 W V Yeast Extract 0 5 W V NaCl 配制量 1L 配置方法 1 称取下列试剂 置于 1L 烧杯中 Tryptone 16g Yeast Extract 10g NaCl 5g 2 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 滴加 1N KOH 调节 pH 值至 7 0 4 加水离子水将培养基定容至 1L 5 高温高压后 4 保存 11 b broth 培养基培养基 组份浓度 2 W V Tryptone 0 5 W V Yeast Extract 0 5 W V MgSO4 7H2O 配制量 1L 配置方法 1 称取下列试剂 置于 1L 烧杯中 Tryptone 20g Yeast Extract 5g MgSO4 7H2O 5g 2 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 滴加 1N KOH 调节 pH 值至 7 5 4 加水离子水将培养基定容至 1L 5 高温高压后 4 保存 12 NZCYM 培养基培养基 组份浓度 0 5 W V Yeast Extract 0 1 W V Casamino Acid 1 W V NZ 胺 0 5 W V NaCl 0 2 W V MgSO4 7H2O 配制量 1L 配置方法 1 称取下列试剂 置于 1L 烧杯中 Yeast Extract 5g Casamino Acid 1g NZ 胺 10g NaCl 5g MgSO4 7H2O 2g 2 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 滴加 5N NaOH 溶液 约 0 2mL 调节 pH 值至 7 0 4 加水离子水将培养基定容至 1L 5 高温高压后 4 保存 13 NZYM 培养基培养基 组份浓度 0 5 W V Yeast Extract 1 W V NZ 胺 0 5 W V NaCl 0 2 W V MgSO4 7H2O 配置方法 NZYM 培养基除不含 Casamino Acid 酪蛋白氨基酸 外 其他成份与 NZCYM 培养基相同 14 NZM 培养基培养基 组份浓度 1 W V NZ 胺 0 5 W V NaCl 0 2 W V MgSO4 7H2O 配置方法 NZM 培养基除不含 Yeast Extract 酵母提取物 外 其他成份与 NZYM 培养基相同 15 一般固体培养基的 一般固体培养基的 配置方法 1 按照液体培养基配方准备 好液体培养基 在高温高压灭菌前 加入下列试剂中的一种 配制配制 Agar 琼脂 铺制平板用 15g L Agar 琼脂 配制顶层琼脂用 7g L Agarose 琼脂糖 铺制平板用 15 g L Agarose 琼脂糖 配制顶层琼脂用 7g L 2 高温高压灭菌后 带上手套取出培养基 摇动容器使 琼脂或琼脂糖充分混匀 此时培养基温度很高 小心烫伤 3 待培养基冷却至 50 60 时 加入热不稳定物质 如 抗生素 摇动容器充分混匀 4 铺制平板 30 35mL 培养基 90mm 培养皿 16 LB Amp X Gal IPTG 组份浓度 1 W V Tryptone 平板培养基平板培养基 0 5 W V Yeast Extract 1 W V NaCl 0 1mg mL Ampicillin 0 5 W V IPTG 0 04mg mL X Gal 1 5 W V Agar 配制量 1L 配置方法 1 称取下列试剂 置于 1L 烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 滴加 5N NaOH 溶液 约 0 2mL 调节 pH 值至 7 0 4 加水离子水将培养基定容至 1L 后 加入 15gAgar 5 高温高压灭菌后 冷却至 60 左右 6 加入 1mL Ampicillin 100mg mL 1mL IPTG 24mg mL 2mL X Gal 20mg mL 后均匀混合 7 铺制平板 30 35mL 培养基 90mm 培养基 8 4 保存平板 17 TB Amp X Gal IPTG 组份浓度 1 2 W V Tryptone 平板培养基平板培养基 2 4 W V Yeast Extract 0 4 W V Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0 1mg mL Ampicillin 0 024mg mL IPTG 0 04mg mL X Gal 1 5 W V Agar 配制量 1L 配置方法 1 配制磷酸盐缓冲液 0 17M KH2PO4 0 72M K2HPO4 100mL 2 称取下列试剂 置于 1L 烧杯中 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 4 加水离子水将培养基定容至 1L 后 加入 15gAgar 5 高温高压灭菌后 冷却至 60 左右 6 加入 100mL 的上述灭菌磷酸盐缓冲液 1mL Ampicillin 100mg mL 1mL IPTG 24mg mL 2mL X Gal 20mg mL 后均匀混合 7 铺制平板 30 35mL 培养基 90mm 培养基 8 4 保存平板 生物化学实验常用试剂的配制方法生物化学实验常用试剂的配制方法 1 0 5mol L 氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液 组份浓度 0 5mol L 配制量 2L 配置方法 1 准确称取氢氧化钠 40g 2 用去离子水溶解并稀释至 2L 2 0 5mol L 盐酸溶液盐酸溶液 组份浓度 0 5mol L 配制量 2L 配置方法 1 准确量取盐酸 83 4mL 2 用去离子水稀释至 2L 4 0 2 葡萄糖标准溶液 葡萄糖标准溶液 组份浓度 0 2 配制量 1L 配置方法 1 称取葡萄糖 2 5g 置于称量瓶中 在 70 干燥 2 小 时 2 干燥器中冷却至室温 重复干燥 冷却至恒重 3 准确称取葡萄糖 2 000g 4 用去离子水溶解并定容至 1L 5 于 4 保存 5 250 g mL 牛血清牛血清 组份浓度 250 g mL 白蛋白标准液 配制量 2L 配置方法 1 准确称取 250mg 标准牛血清白蛋白 2 用 0 03mol LpH7 8 的磷酸缓冲液溶解并定容至 1L 3 4 保存 6 Folin 试剂甲试剂甲 配置方法 1 称取 10g 氢氧化钠溶于 400mL 去离子水中 加入 50g 无水碳酸钠 溶解 待用 2 称取 0 5g 酒石酸钾钠 溶于 80mL 去离子水中 加入 0 25g 硫酸铜 5 水 溶解 3 将 1 2 去离子水按 20 4 1 的比例混合即可 4 4 保存 可用一周 7 Folin 试剂乙试剂乙 配置方法 1 在 500mL 的磨口回流装置内加入钨酸钠 2 水 25 0359g 钼酸钠 2 水 6 2526g 去离子水 175mL 85 磷酸 12 5mL 浓盐酸 25mL 充分混合 2 回流 10 小时 再加硫酸锂 37 5g 去离子水 12 5mL 及数滴溴 3 然后开口沸腾 15min 以驱除过量的溴 冷却后定容到 250mL 4 于棕色瓶中保存 可使用多年 注意 上述制备地 Folin 试剂乙地贮备液浓度一般在 2mol L 左 右 几种操作方案都是把 Folin 试剂乙稀释至 1mol L 的 浓度作为应用 液 我们这时是把贮备液于使用前稀释 18 倍 使之浓度为 0 1mol L 略高 这种稀释 18 倍后的 Folin 试剂乙就是上文称之为 的 应用液 Folin 试剂乙贮备 液浓度的标定 一般是以酚酞为 指示剂 用 Folin 试剂乙去滴定 1mol L 左右的标准氢氧化钠溶液 当溶液颜色由红变为紫灰 再突然变成墨绿即为终点 如果用氢 氧化钠去滴定 Folin 试剂乙 终点不太好掌握 溶液地颜色是由浅 黄变为浅绿 再变为灰紫色为终点 8 DNS 试剂试剂 配置方法 1 取 3 5 二硝基水杨酸 10g 加入 2mol L 氢氧化钠溶 液 200mL 3 5 二硝基水杨酸试剂 2 将 3 5 二硝基水杨酸溶解 然后加入酒石酸钾钠 300g 3 待其完全溶解 用去离子水稀释至 2000mL 棕色瓶保存 9 5 蔗糖溶液 蔗糖溶液 组份浓度 5 配制量 1L 配置方法 称取蔗糖 50g 用去离子水溶解定容至 1L 10 0 1mol L 蔗糖溶液蔗糖溶液 组份浓度 0 1mol L 配制量 1L 配置方法 称取蔗糖 34 230g 用去离 子水溶解并定容至 1L 11 20 乙酸溶液 乙酸溶液 组份浓度 20 配制量 1 2L 配置方法 量取冰乙酸 300mL 用去离子水稀释至 1200mL 12 30 W V Acrylamide 组份浓度 30 W V Acrylamide 0 05 配制量 1L 配置方法 1 称量下列试剂 置于 1L 烧杯中 Acrylamide 290g BIS 10g 2 向烧杯中加入约 600mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 加入去离子水将溶液定容至 1L 用 0 45 m 滤膜滤去杂 质 4 于棕色瓶中 4 保存 注意 丙稀铣胺具有很强的神经毒性 并可通过皮肤吸收 其作用有积累性 配制时应戴手套等 聚丙烯酰胺无 毒 但也应谨慎操作 因为有可能含有少量的未聚合成 份 13 40 W V Acrylamide 组份浓度 40 W V Acrylamide 0 05 配制量 1L 配置方法 1 称量下列试剂 置于 1L 烧杯中 Acrylamide 380g BIS 20g 2 向烧杯中加入约 600mL 的去离子水 充分搅拌溶 解 3 加入去离子水将溶液定容至 1L 用 0 45 m 滤膜滤 去杂质 4 于棕色瓶中 4 保存 注意 丙稀铣胺具有很强的神经毒性 并可通过皮肤吸收 其作 用有积累性 配制时应戴手套等 聚丙烯酰胺无 毒 但也应谨慎 操作 因为有可能含有少量的未聚合成份 14 10 W V 过硫酸铵 过硫酸铵 组份浓度 10 W V 过硫酸铵 配制量 10mL 配置方法 1 称取 1g 过硫酸铵 2 加入 10mL 的去离子水后搅拌溶解 3 贮存于 4 注意 10 过硫酸胺溶液在 4 保存时间可使用 2 周左右 超过期限会失去催化作用 15 考马斯亮蓝 考马斯亮蓝 R 250 染色液染色液 组份浓度 0 1 W V 考马斯亮蓝 R 250 25 V V 异丙醇 10 V V 冰醋酸 配制量 1L 配置方法 1 称取 1g 考马斯亮蓝 R 250 置于 1L 烧杯中 2 量取 250mL 的异丙醇加入上述烧杯中 搅拌溶 解 3 加入 100mL 的冰乙醋酸 均匀搅拌 4 加入 650mL 的去离子水 均匀搅拌 5 用滤纸出去颗粒物质后 室温保存 16 考马斯亮蓝染色脱色液 考马斯亮蓝染色脱色液 组份浓度 10 V V 醋酸 5 V V 乙醇 配制量 1L 配置方法 1 量取下列溶液 置于 1L 烧杯中 醋酸 100mL 乙醇 50mL dH2O 850mL 2 充分混合后使用 17 凝胶固定液 凝胶固定液 组份浓度 50 V V 甲醇 10 V V 醋酸 SDS PAGE 银氨染色用 配制量 100L 配置方法 1 量取下列溶液 置于 1L 烧杯中 甲醇 500mL 醋酸 100mL dH2O 400mL 2 均匀混合后室温保存 18 凝胶处理液 凝胶处理液 组份浓度 50 V V 甲醇 10 V V 戊二醛 SDS PAGE 银氨染色用 配制量 1L 配置方法 1 量取下列溶液 置于 1L 烧杯中 甲醇 50mL 戊二醛 10mL dH2O 40mL 2 均匀混合后室温保存 19 凝胶染色液 凝胶染色液 组份浓度 0 4 W V 硝酸银 1 V V 浓氨水 SDS PAGE 银氨染色用 0 04 W V 氢氧化钠 配制量 100L 配置方法 1 量取下列试剂 加入 100 200mL 试剂瓶中 20 硝酸银 2mL 浓氨水 1mL 4 氢氧化钠 1mL dH2O 96mL 2 均匀混合 该溶液应为无色透明状 如氨水浓度过低时溶 液 会呈现混浊状 此时应补加浓氨水 直至透明 3 本染色液应现用现配 不宜保存 20 显影液 显影液 组份浓度 0 005 V V 柠檬酸 0 02 V V 甲醛 SDS PAGE 银氨染色用 配制量 1L 配置方法 1 称取下列试剂 置于 1L 试剂瓶中 柠檬酸 50mg 甲醛 0 2mL 2 加入 1L 去离子水后 摇动混合后溶解 3 室温保存 21 45 乙醇溶液 乙醇溶液 组份浓度 45 配制量 1L 配置方法 量取无水乙醇 450mL 加入去离子水 550mL 混匀 22 5 的十二烷基硫酸钠溶液 的十二烷基硫酸钠溶液 组份浓度 5 W V 配制量 0 1L 配置方法 称取 5 0g 十二烷基硫酸钠 溶于 100mL4 的乙醇溶液中 23 三氯甲烷 三氯甲烷 异戊醇混合试剂异戊醇混合试剂 配置方法 取 500mL 三氯甲烷试剂 加入 21mL 异戊醇试剂 混 匀 24 1 6 乙醛溶液 乙醛溶液 组份浓度 1 6 配制量 0 1L 配置方法 取 47 乙醛 3 4mL 用去离子水定容至 100mL 25 二苯胺试剂 二苯胺试剂 配置方法 1 称取二苯胺试剂 0 8g 溶解于 180mL 冰乙酸中 2 再加入 8mL 高氯酸混匀 3 临用前加入 0 8mL 1 6 乙醛溶液 注意 配制完成后试剂应为无色 26 15 三氯乙酸溶液 三氯乙酸溶液 组份浓度 15 配制量 2L 配置方法 称取三氯乙酸 300g 用去离子水溶解定容至 2000mL 27 1 谷氨酸溶液 谷氨酸溶液 组份浓度 1 配制量 0 5L 配置方法 1 称取 5g 谷氨酸 先用适量得用去离子水溶解 2 再用氢氧化钾溶液中和至中性 3 最后用去离子水定容至 0 5L 28 1 丙酮酸溶液 丙酮酸溶液 组份浓度 1 配制量 0 5L 配置方法 1 称取 5g 丙氨酸 先用适量得用去离子水溶解 2 再用氢氧化钾溶液中和至中性 3 最后用去离子水定容至 0 5L 29 0 1 的碳酸氢钾溶液 的碳酸氢钾溶液 组份浓度 0 1 配制量 0 5L 配置方法 称取碳酸氢钾 0 5g 用去离子水溶解定容至 0 5L 30 0 05 的碘乙酸溶液 的碘乙酸溶液 组份浓度 0 05 配制量 0 25L 配置方法 称取 0 125g 碘乙酸 用去离子水溶解定容至 0 25L 31 Locke 氏溶液氏溶液 配制量 2L 配置方法 称取 18g 氯化钠 0 84g 氯化钾 48g 氯化钙 0 3g 碳酸 氢钠 2g 葡萄糖 用去离子水溶解定容至 2000mL 32 0 2mol L 的丁酸溶液的丁酸溶液 组份浓度 0 2mol L 配制量 1L 配置方法 1 量取 18mL 正丁酸试剂 2 用 1mol L 的氢氧化钠中和 3 再用去离子水定容至 1L 33 0 1mol L 的硫代硫酸钠溶液的硫代硫酸钠溶液 组份浓度 0 1mol L 配制量 10L 配置方法 称 248 17g 硫代硫酸钠 用去离子水溶解并定至 10L 34 0 1mol L 的碘溶液的碘溶液 组份浓度 0 1mol L 配制量 1L 配置方法 1 称取碘 12 7g 和碘化钾 25g 2 用去离子水溶解并定容至 1L 3 用 0 1mol L 的硫代硫酸钠标定 35 10 氢氧化钠溶液 氢氧化钠溶液 组份浓度 10 配制量 2L 配置方法 称取 200g 氢氧化钠 用去离子水溶解并定容至 2L 36 10 盐酸溶液 盐酸溶液 组份浓度 10 配制量 0 2L 配置方法 量取浓盐酸 49 3mL 用去离子水定至 0 2mL 37 0 1 标准丙氨酸溶液 标准丙氨酸溶液 组份浓度 0 1 配制量 0 5L 配置方法 称取丙氨酸 0 5g 用去离子水溶解并定容至 0 5mL 38 0 1 标准谷氨酸溶液 标准谷氨酸溶液 组份浓度 0 1 配制量 0 5L 配置方法 称取谷氨酸 0 5g 用去离子水溶解并定容至 500mL 39 0 1 水合茚三酮乙醇溶液 水合茚三酮乙醇溶液 组份浓度 0 1 配制量 1L 配置方法 称取 1g 水合茚三酮试剂 溶于 1000mL 无水乙醇 中 40 酚溶液 酚溶液 配置方法 在大烧杯中加入 80mL 去离子水 再加入 300g 苯酚 在水 浴中加热搅拌 混合至苯酚完全溶解 将该溶液倒入盛有 200mL 去离子水的 1000mL 分液漏斗内 轻轻振荡混合 使其成 为乳状液 静止 7 10 小时 乳状液变成两层透明溶液 下层为 被水饱和的酚溶液 放出下层 贮存于棕色瓶中备用 41 0 5 淀粉溶液 淀粉溶液 组份浓度 0 5 配制量 0 1L 配置方法 称取淀粉 0 5g 用去离子水溶解定容至 0 1L 42 对羟基联苯试剂 对羟基联苯试剂 配置方法 称取对羟基联苯 1 5g 溶于 100mL0 5 氢氧化钠溶液 中 配制成 1 5 的溶液 若对羟基联苯颜色较深 应用丙 酮 或 无水乙醇重结晶 放置时间较长后 会出项针状结晶 应摇匀后使用 生物化学实验常用缓冲液的配制方法生物化学实验常用缓冲液的配制方法 1 0 2 mol L 磷酸缓冲液磷酸缓冲液 组份浓度 0 2mol L pH 6 0 配制量 1L 配置方法 1 称取磷酸氢二钠 12 水 8 82 g 2 称取磷酸二氢钠 2 水 27 34g 3 用去离子水溶解并定容至 1L 室温保存 注意 此为母液 使用时稀释 40 倍使用 2 洗脱液 洗脱液 组份浓度 0 15mol L 含 含 0 15mol L 氯氯 配制量 10L 化钠的化钠的 0 005mol L 配置方法 1 称取氯化钠 87 66g pH 6 0 的磷酸缓冲液 的磷酸缓冲液 2 用 0 2mol L pH6 0 的 磷酸缓冲液 250mL 溶解 3 用去离子水稀释至 10 L 室温保存 3 0 3mol L 磷酸缓冲液磷酸缓冲液 组份浓度 0 3mol L pH7 8 配制量 0 5L 配置方法 1 准确称取磷酸氢二钠 12 水 49 150g 2 磷酸二氢钠 2 水 2 000g 3 用去离子水溶解并定容至 0 5L 室温保存 注意 此为母液 使用时稀释 10 倍使用 4 0 2mol L 乙酸缓冲液乙酸缓冲液 组份浓度 0 2mol L pH4 6 配制量 2L 配置方法 1 准确称取乙酸钠 3 水 54 44g 2 加入 23mL 冰乙酸 溶解 3 用去离子水溶解并定容至 2L 4 保存 5 0 2mol L 磷酸磷酸 柠檬酸柠檬酸 组份浓度 0 2mol L 缓冲液缓冲液 配制量 各 1L pH 2 6 4 6 6 6 配置方法 1 母液 A 0 2mol L 的 Na2HPO4溶液 称取 Na2HPO4 12 水 143 256g 用去离子水定容至 2L 2 母液 B 0 1mol L 的柠檬酸溶液 称取柠檬酸 1 水 42 028g 用去离子水溶解定容至 2L 3 pH2 6 4 6 6 6 的三种缓冲液如下表配制 pH 值 A mL B mL 2 6 109 0 891 0 4 6 467 5 532 5 6 6 727 5 272 5 4 按上表混匀后 4 保存 6 20 SSC 缓冲液缓冲液 配制量 1L pH7 0 配置方法 1 准确称取 175 2g 氯化 钠 2 准确称取 88 2g 柠檬酸钠 2 水 3 溶解于 800mL 去离子水中 4 加入数滴 10mol L 氢氧化钠溶液调节 pH 值至 7 0 5 加去离子水定容至 1L 注意 按实验需要可分装后高压灭菌 10 SSC 5 SSC 1 SSC 可由 20 SSC 做相应稀释得到 7 0 15mol L 氯化钠氯化钠 组份浓度 0 15mol L 乙二胺四乙酸二钠乙二胺四乙酸二钠 配制量 1L 缓冲液缓冲液 配置方法 1 准确称取氯化钠 8 77g pH8 0 2 称取乙二胺四乙酸二钠 37 2g 3 溶于 800mL 去离子水中 4 用固体的氢氧化钠调 pH 值为 8 0 5 加去离子水定容至 1L 8 1 15mol L 的磷酸盐的磷酸盐 组份浓度 0 15mol L 缓冲液缓冲液 配制量 1L pH7 6 配置方法 1 溶液甲 1 15mol L 的 KH2PO4溶液 称取 KH2PO4 9 078g 用 去离子水溶解定容至 1L 2 溶液乙 1 15mol L 的 Na2HPO4溶液 称取 Na2HPO4 2 水 11 876g 或磷酸氢二钠 12 水 23 894g 用去离子水溶解定容至 1L 3 pH7 6 磷酸盐缓冲液 将 和 按 1 4 8 6 比例混合即可 9 5 Tris GlycineBuffer 组份浓度 0 125M Tris 1 25M Glycine 0 5 w v SDS SDS PAGE 电泳缓冲液 电泳缓冲液 配制量 1L 配置方法 1 称取下列试剂 置于 1L 烧杯中 Tris 15 1g Glycine 94g SDS 5 0g 2 加入约 800mL 的去离子水 搅拌溶解 3 加去离子水将溶液定容至 1L 后 室温保存 10 5 SDS PAGE 组份浓度 250mM Tris HCl pH6 8 Loading Buffer 10 W V SDS 0 5 W V BPB 50 V V 甘油 5 W V 巯基乙醇 配制量 5mL 配置方法 1 量取下列试剂 置于 10mL 塑料离心管中 1M Tris HCl 1 25mL SDS 0 5g BPB 25mg 甘油 2 5mL 2 加入去离子水溶解后定容至 5mL 3 小份 500 l 份 分装后 于室温保存 4 使用前将 25 l 的 2 ME 加到每小份中 5 加入 2 ME 的 Loading Buffer 可在室温下保存一个月左右 生生物物化化学学实实验验常常用用柱柱料料数数据据及及性性质质 1 DEAE 阴离子交换纤维素 1 纤维素的处理 取纤维素干品用蒸馏水浸泡 充分溶涨并搅拌均匀 过夜 次日再搅匀 静止 30min 留下沉集部分 重复 3 次 用真空泵抽干 然后用适量的 0 5mol L 的氢氧化钠溶液 浸泡 30min 抽干 蒸馏水洗至中性 再用适量的 0 5mol L 的盐酸溶液浸泡 30min 抽干 蒸馏水洗至中性 重复用 0 5mol L 的氢氧化钠溶液浸泡 30min 抽干 蒸馏 水洗至中性 最后用 0 005mol L pH6 0 的磷酸缓冲液浸泡 待用 2 纤维素的重生 回收的纤维素先用 0 5mol L 氯化钠 0 5mol L 氢氧化 钠溶液浸泡 再按上述 1 操作处理 即可再次投入使 用 3 纤维素的保存 回收后 用 0 5mol L 氢氧化钠溶液浸泡 30min 后 蒸馏水洗至中性 抽干 于鼓风干燥箱中 60 烘干后 保存 2 SephadexG 型葡聚糖凝胶 1 凝胶的特性要点 葡聚糖 G 后面的数字代表不同的交联度 数值越大交联度越小 吸水量越大 其数值大致为吸水量 X 的 10 倍 Sephadex 对碱和弱酸稳定 在 0 1mol L 盐酸中可以浸泡 1 2 小时 在中性时可以高压灭菌 不同型号中又有颗粒粗细之分 颗粒粗的分离效果差 流速快 颗粒越细分离效果越好 但流速也越慢 交联葡聚糖工作时的 pH 稳定在 2 11 的 范围内 葡聚糖 G 型凝胶分离的分子量分级范围为 700 8 105 SephadexG 型葡聚糖凝胶的数据见下表 本表数值取自 Pharmacia Biotech Biodirectory 1996 为 2 6 30cm 层析柱在 25 用蒸馏水测定之值 D Darcy s law 2 凝胶的溶胀 G 系交联葡聚糖凝胶亲水性强 只能在水中溶胀 仅有少量的有 机溶剂也可以使之溶胀 有机溶剂或含有有机溶剂较多的水溶 液会改变其孔隙 使之收缩失去或降低凝胶的分离能力 在水中 溶胀时如在室温则需要较长时间 才能达到充分溶胀的程度 但 可煮沸到 100 以缩短其溶胀时间 见下表 Sephadex G 型葡聚糖凝胶溶胀所需时间型葡聚糖凝胶溶胀所需时间 所需最小溶胀时间 凝胶型号 G 10 G 200 20 22 室温 100 沸 水浴 Sephadex G 10 3 1 G 15 3 1 G 25 3 1 G 50 3 1 G 75 24 3 G 100 72 5 G 150 725 G 200 72 5 溶胀时要将凝胶浸泡在过量的水或缓冲液中 在整个溶 胀过程中应避免剧烈地搅拌 尤其不能使用电磁搅拌 以免破坏了它的颗粒结构 以及产生许多碎末而影响洗 脱时的流速 3 凝胶的回收与保存 凝胶的再生最好不要在柱上进行 有些凝胶可以在 位清洗 可将凝胶在 0 5mol L 氯化钠及 0 5mol L 氢氧 化钠的混合溶液中浸泡 一般约需 30 分钟以上 然后用 蒸馏水洗至中性 最后用缓冲液平衡即可恢复使用 经常使用的凝胶 一般加入一些抗菌剂放在普通 冰箱中 即可保存较长的时间 如确切在相当长的时间里不准备 使用时 则以保存干凝胶为好 处理时可先用较浓的氯化钠浸泡 如 0 5mol L 在用 0 5mol L 的氢氧化钠处理并用蒸馏水洗至中 性 然后用递增百分比浓度的乙醇分多次作脱水处理 一般可从 30 的乙醇开始 每次均应让凝胶在乙醇中多浸泡一些时间 在 无水乙醇处理后 最后再用乙醚处理一次以加速乙醇的挥发 处 理后的凝胶宜在 80 以下的温度烘干 在进行凝胶的回收时 如 在每一步操作时 均使用布氏漏斗抽滤可大大地加快整个回收过 程 注意 a 凝胶在氢氧化钠溶液中浸泡的时间不要太长 b 不要图快过早地使用百分浓度太大地乙醇 以免凝胶颗粒收缩 太快 破坏了它地结构 因而影响了它地分离能力 c 在乙醚未充分挥发完以前 切不可将含有多量乙醚地凝胶放入 烘箱 以免发生危险 d 溶胀了地凝胶不可放入低温冰箱中冻结 以免其球形结构被破 坏 微生物学实验常用培养基的配制微生物学实验常用培养基的配制 1 牛肉膏蛋白胨培养基 培养细菌用 牛肉膏蛋白胨培养基 培养细菌用 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 氯化钠 10g 琼脂15 20g pH 7 0 7 2 水 1000mL 121 灭菌 20min 2 高氏 高氏 Gause 1 号培养基 培养放线菌用 号培养基 培养放线菌用 可溶性淀粉 20g 硝酸钾 1g 氯化钠 0 5g 磷酸氢二钾 0 5g 硫酸镁 0 5g 硫酸亚铁 0 01g 琼脂 20g 水 1000mL pH 7 2 7 4 配制时 先用少量冷水将淀粉调成糊状 倒入煮沸的水中 在 火上加热 边搅拌边加入其他成分 溶化后 补足水分至 1000mL 121 灭菌 20min 3 查氏 查氏 Czapek 培养基 培养霉菌用 培养基 培养霉菌用 硝酸钠2g 磷酸氢二钾1g 氯化钾0 5g 硫酸镁0 5g 硫酸亚铁0 01g 蔗糖30g 琼脂15 20g 水1000mL pH自然 121 灭菌 20min 4 马丁氏 马丁氏 Martin 琼脂培养基 分离真菌用 琼脂培养基 分离真菌用 葡萄糖10g 蛋白胨5g 磷酸二氢钾1g 七水合硫酸镁0 5g 1 3000 孟加拉红 rose bengal 玫瑰红水溶液 100mL 琼脂15 20g pH自然 蒸馏水800mL 112 灭菌 30min 临用前加入 0 03 链霉素稀释液 100mL 使每毫升培养基中含 链霉素 30 g 5 马铃薯培养基 简称 马铃薯培养基 简称 PDA 培养真菌用 培养真菌用 马铃薯200g 蔗糖 或葡萄糖 20g 琼脂15 20g pH自然 培养基的配制 马铃薯