高产淀粉酶菌株的分离与酶活性检测 2(1) 2.doc

高产淀粉酶菌株的分离与酶活性检测西南大学生命科学学院 2011级5班第3小组自主实验摘要：土壤是微生物的良好生境，土壤中有多种类群的微生物，它们对自然界物质的转化和循环起着极为重要的作用，对农业生产和环境保护有着不可忽视的影响。目的:从土壤中分离筛选高产淀粉酶菌株,方法:通过碘比色法比较水解圈的直径大小测酶活性高低,从而从土壤中分离筛选到高产淀粉酶的菌株关键词：土壤 淀粉酶 分离 水解圈 碘液淀粉酶是催化淀粉水解的一类酶的总称，广泛存在于动物、植物和微生物中，是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。本实验从土壤中分离高产淀粉酶菌株并通过碘比色法比较水解圈的直径大小测酶活性高低。一、实验材料1.1、实验取材从学校枯叶堆积处取土层下5-10cm处的土壤1.2、培养基配方淀粉培养基: 称取牛肉膏5 g、蛋白胨10 g、NaC l 5 g、可溶性淀粉2 g 溶于900 m l蒸馏水中, 再加入25 g琼脂粉并搅拌至充分溶解, 调pH 至7. 2, 最后加蒸馏水定容至1000 m ,l 高压蒸汽灭菌; 种子培养基( LB): 除不加琼脂粉外, 其它成分和淀粉培养基配置相同。1.3、试剂与仪器碘液、烧杯（500ml）、锥形瓶（250ml）、酒精灯、培养皿、涂布棒、移液枪、无菌枪头、试管、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、摇床培养箱、接种环、记号笔等二、实验方法2.1、样品稀释 称取酒曲样品10g溶于90mL 无菌水中,在37摄氏度摇床（200r/min）培养箱中培养2-3个小时，使菌体充分扩散到无菌水中。静置，取上清至富集培养基的锥形瓶中。在37摄氏度摇床（200r/min）培养箱中培养一天，使菌体富集。将富集后的菌液分别用无菌水梯度稀释至 1 10 -6倍。2.2、分离 分别取10-2 、10-3、10-4 、10-5 、10-6菌液0.2ml均匀涂布在10个淀粉培养基上，在37摄氏度培养箱培养2天，平板培养基表面便形成了若干菌落。 2.3、筛选 用滴管将碘液均匀滴洒在培养基上，菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉酶的菌株，根据淀粉遇碘变蓝的原理，有明显淀粉水解圈则说明该菌产酶能力强，蓝色越深说明产酶活力越弱，进而挑取出产酶能力高的菌株接种到淀粉培养基试管斜面上，在37摄氏度条件下培养2天。2.4、酶活力检测 用接种环挑取一环菌到液体培养基中进行摇床发酵培养（250ml三角瓶内装50ml液体培养基，统一采用28，150r/min）24小时后将菌液进行离心，再在超净工作台上倒两个平板，待培养基凝固后在每个平板上放上3个牛津杯并用移液枪取0.1ml上清液加入到每个牛津杯中。24小时后，用滴管把碘液滴洒到平板中观察水解圈的大小，水解圈越大就说明淀粉酶的活性越高，取活性最高的菌株作为目的菌株，对其进行培养,即得到高产淀粉酶的菌株。3、 实验结果3.1、筛选结果 利用筛选培养基从土样中筛选产淀粉酶的菌株。其菌落在滴加碘液后出现水解圈。即淀粉被水解成了不被碘液着色的物质，如糊精、麦芽糖和葡萄糖。水解圈的大小在一定程度上反映了菌株产生淀粉酶的能力，水解圈越大产说明淀粉酶越多。用接种环从平板上挑取出来2种不同的产淀粉酶的菌（一种产色素，一种不产色素）。PS:不产色素高产淀粉酶菌PS:产色素高产淀粉酶菌3.2、酶活力检测结果将筛选到的有水解圈的2株高产淀粉酶菌作发酵培养试验,通过碘比色法用牛津杯测量其所产淀粉酶的活力。PS:不产色素高产淀粉酶菌PS:产色素高产淀粉酶菌4、 实验总结通过本次试验，我们成功地从土壤中分离出来高产淀粉酶的菌株并测定了其所产淀粉酶的活力大小。虽然结果还算理想，但在实验过程中我们也遭受了很多失败。比如培养基的配置失误，操作行为不恰当导致杂菌污染等使得我们组的实验进程一度停滞不前。所以在做实验时要有严谨性，操作要得当，尤其是微生物的实验接触的都是细菌、真菌、病毒等微生物更是要操作小心。与此同时，在做实验时也更应该加强团队合作的意识。参考文献：1徐琛.产淀粉酶芽孢杆菌的筛选和分离J.齐鲁师范学院学报,2011.