调控皮肤癌的启动生长和分化课件

基因的研究进展 2 3 1 赵鑫文益阳刘庆茹何秋瑜陈丽丽韩燕燕 11级研究生一班 专业 病理学与病理生理学 VEGF调控皮肤癌的启动 生长和分化 在人类皮肤癌中 鳞状细胞癌的发病率第二 世界上每年有500 000人发病 DMBA TPA化学诱导小鼠皮肤癌 小鼠的鳞状细胞癌和人类极其相似 CD34 CSCs存在于血管壁 在脑肿瘤中 血管微环境影响CSC的功能 但皮肤癌中CD34 TEC是否存在以及血管微环境是否调控CSC的功能仍未知 CD34 TEC在小鼠皮肤癌中看做CSC依据 1 克隆性增殖潜能2 移植到免疫缺陷的小鼠可形成肿瘤 在小鼠皮肤鳞状细胞癌模型中 以皮肤乳突状瘤的数量及生长率估计皮肤肿瘤的启动和生长 为研究皮肤乳突状瘤中CSCs是否存在于血管周围三种CSCmarkers CD34 Hmga2免疫TECmarkers K5 K14染色ECmarkers endoglin CD31 皮肤的CSCs可以显示CSC和TEC的markers 但是不显示内皮细胞的markers 以此来区别血管内皮细胞 大多数CSC分布在距内皮细胞30um 分化越好的肿瘤细胞距离内皮细胞越远结论 皮肤乳突状瘤的CSC存在于血管周围 DC101封闭性阻断VEGFR2 皮肤癌小鼠模型里敲除Vegfa基因 皮肤癌小鼠模型里过表达VEGF 一 DC101封闭性阻断VEGFR2 为确定血管微环境对肿瘤生长的作用 用抗体阻断方法抑制血管再生 通过qRT PCR 免疫荧光证明VEGFR2表达于内皮细胞 welcometousethesePowerPointtemplates NewContentdesign 10yearsexperience DC101是VEGFR2的封闭性抗体 强烈抑制肿瘤血管再生 DC101作用于乳突状瘤的小鼠 可见内皮细胞增殖大幅度减少 肿瘤血管密度降低 CD34 CSCs的比例降低 CD34 CSCs的减少与肿瘤血管密度降低有关 并且这种细胞的减少不是由于其凋亡增加而是因为其增值减少 我们进一步从基因学的角度考虑 是否VEGF直接影响CD34 CSCs的某些基因的表达来调控其增殖 上皮细胞里敲除Vegfa基因可以阻止皮肤癌的生长 转基因过表达VEGF可以促进皮肤癌的增长和恶化 VEGF调控肿瘤的启动 但是VEGF对肿瘤的生长分化的作用机制仍不清楚 qRT PCR表明VEGFa在CD34 CSCs中得表达高于正常上皮细胞和CD34 CSCs 二 皮肤癌小鼠模型里敲除Vegfa基因 为了探究TEC分泌的VEGF是否调控皮肤CSCs的自我更新和分化 维持肿瘤的生长 我们在已经建立皮肤乳突状瘤的小鼠模型中敲除Vegfa基因 在用三苯氧胺处理一周后 大多数乳突状瘤已经萎缩到原来的60 两周后大多数乳突状瘤完全消失 肿瘤的退化与内皮细胞增殖减少和血管密度减少相关 但是在癌症的治疗的过程中 单纯的血管抑制剂不能使已经建立的肿瘤完全消失 TECs中VEGF的缺失导致CD34 TECs显著减少 基底细胞的增殖也大幅度减少 表明TEC分泌的VEGF对皮肤的CSCs也有一定的影响 从CSCs对称性细胞分裂与非对称性分裂来分析这种假设是否成立 对称性细胞分裂代表细胞正在进行自我更新 非对称性分裂表明细胞的分化 在肿瘤生长的过程中 大约40 的TEC处于对称性分裂 自我更新的状态 但是在敲除VEGFa的小鼠皮肤癌模型里 处于更新状态的TEC比例大幅度降低 因此TECs分泌的VEGF对皮肤CSCs的增殖和自我更新是很重要的 三 皮肤癌小鼠模型里过表达VEGF 在已经建立皮肤癌的小鼠模型里 特异性使TEC内过表达VEGF来研究VEGF的增加是否增加CSCs的自我更新能力 结果表明 VEGF过表达促进肿瘤的生长 并且伴随着血管内皮细胞的增殖和血管密度的增加 TECs过表达VEGF可见CD34 CSCs大量增殖 对称性细胞分裂的CSC比例增加 总之 VEGF的过表达促进肿瘤的生长不仅是促进血管的再生 还促进了CSC的更新增殖 VEGF改变CD34 CSCs的自我更新和分化能力以及其分子机制 我们从基因水平研究获得 1 regulatestemness Sox Hmga2 proliferation Ccnd1 Ccng13 通过血管微环境调控肿瘤细胞之Genes间的相互作用 Col1 Col3a14 鳞状细胞癌中表达的基因 Krt13 Ano1 在VEGF过表达的皮肤癌小鼠模型中 这些已知功能的基因在CD34 CSCs中表达提高 通过qRT PCR 流式细胞仪分析 免疫荧光染色三种方法分析 50 的上调是由于VEGF的过表达 因此 VEGF从转