神经母细胞瘤与fish检课件

神经母细胞瘤与FISH检测FISH产品事业部 专注病理诊断产品的研发 生产与服务 page1 神经母细胞瘤 概述流行病学临床分期常用检测方法FISH检测的靶点及意义 page2 概述 神经母细胞瘤 neuroblastoma NB 又称成神经母细胞瘤 是威胁儿童生命的多见的恶性肿瘤之一 据文献报告它在儿童恶性肿瘤中排列第四位 NB是从原始神经嵴细胞演化而来 交感神经链 肾上腺髓质是最常见的原发部位 恶性程度高 预后差 page3 IzbickiT MazurJ IzhickaE eta1 Epidemiologyofneuroblastoma analysisofasingleinstitution AnticancerRes 2003 23 2 1933 1938 流行病学 NB是儿童最常见的颅外实体瘤 占所有儿童肿瘤的8 10 约75 的NB患者在5岁以下96 的病例10岁前发病 3 5 在10 20岁发病男性女性比例2 4 1年发病率0 3 5 5 10万IzbickiT etaEpidemiologyofneuroblastoma analysisofasingleinstitution AnticancerRes 2003 23 2C 1933 1938 page4 NB的INSS国际临床分期 page5 常用的检测方法 组织病理学检查 HE染色蛋白质组检测 免疫组化 IHC page6 page7 鉴别诊断 指导预后判断都有困难 寻找新的方法 NB有关的癌基因 NB细胞的细胞遗传学研究 证实约80 病例出现染色体异常表现 1p缺失 主要发生缺失是1p36区段MYCN基因扩增和蛋白过表达11q缺失 主要发生缺失是11q23区段MDM4基因扩增和蛋白过表达 page8 分子生物学检测 反转录 聚合酶反应技术 RT PCR southern印迹杂交 southernblot 聚合酶链式反应 杂合型缺失 PCR LOH 荧光原位杂交 FISH page9 反转录 聚合酶反应技术 RT PCR RT PCR是将RNA的反转录 RT 和cDNA的聚合酶链式扩增 PCR 相结合的技术 首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA 再以cDNA为模板 扩增合成目的片段 RNA提取 反转录 RNA cDNA PCR扩增 电泳 显示结果 southern印迹杂交 page11 聚合酶链式反应 杂合型缺失 PCR LOH 原理 通过PCR扩增DNA某多态位点来确定该位点的杂合性缺失 LossofHeterozygosity 即PCR LOH page12 检测方法比较 page13 FISH FluorescenceInSituHybridization 一项快速 准确 高灵敏度的细胞分子生物学技术在恶性肿瘤相关基因 染色体区域的大片段缺失 扩增 转位等方面具有重要诊断价值是常规分子诊断技术的重要补充 page14 FISH技术原理 荧光原位杂交FluorescenceInSituHybridization原理采用体外荧光标记的DNA探针 利用探针与被检测的目的基因碱基互补配对的原则 探针与目的基因经高温变性杂交后 通过荧光显微镜检测荧光信号而得出结果 从而检测细胞 组织样本中的染色体或基因异常 page15 FISH技术原理 page16 NB中FISH检测的靶点 SRD基因缺失检测探针 MYCN基因扩增检测探针 page17 MDM4基因扩增检测探针 MLL基因检测探针 page18 NB中FISH检测的靶点 1p缺失 期NB中80 100 有1p缺失 与临床预后差 生存期短相关 是NB的特征基因改变之一 1p36的缺失一般都是杂合型缺失 LOH 1p缺失的主要区段发生在1p36 3 它的缺失是NB易复发的因素之一 1p36区上含有肿瘤抑制因子CHD5 JNatlCancerInst2008 100 940 949Oncogene 2005 24 2684 2694 page19 1p36 3缺失 FISH阳性 荧光原位杂交 FISH 检测1p36 3缺失 SRD基因缺失检测试剂盒 正常型 FISH阴性 page20 MYCN基因 定位于2号染色体2p24区段的原癌基因 25 以上的NB患者出现MYCN基因扩增 MYCN基因扩增和过度表达与NB的浸润 转移和不良预后密切相关 MYCN基因拷贝数增多在NB中较早期 I II IVS期 多见 MYCN基因扩增每单倍基因组大于10个拷贝被认为是预后不良的标志 page21 陈霞静 儿童神经母细胞瘤36例诊断分析 右江民族医学院学报 2003 25 2 225 226 ClinCancerRes2009 15 2085 2090 page22 FISH检测结果中 MYCN基因的扩增形式有两种一种在均质染色区扩增 HSR 一种是双微体扩增 DMs 荧光原位杂交 FISH 检测MYCN扩增 MYCN基因扩增检测试剂盒 page23 Neoplasia Vol 3 No 2 2001 pp 105 109 FISH阳性的检测结果 FISH阳性 DMs FISH阳性 HSR page24 FISH阳性判断标准 红色众多信号连接成簇 扩增表现为均质染色区 红色信号出现双微体扩增红绿信号比 1 5 page25 MDM4基因 定位于1q32区段是p53上游重要的调节因子MDM4扩增或 和过表达在65 的NB中出现可作为NB肿瘤的特异性化疗靶点可成为肿瘤潜在的治疗靶点 JinG CookS eta1 HDMXregulatesp53activityandconferschemoresistanceto3 bis 2 chloroethyl 1 nitrosourea NeuroOncol 2010 12 956 966 国际遗传学杂志20112年4月15日第35卷第二期 page26 11q缺失 11q缺失在原发性NB中出现在未出现MYCN扩增的NB恶性进展过程中 出现定位于11q23 3 MLL 失活 扩增或者缺失 NEnglJMed2005 353 2243 53 page27 FISH检测靶点的临床意义 page28 FISH技术在NB诊断中的应用 使疾病的诊断从肉眼 到细胞学 再到基因异常 分子水平 不断完善 各种检测方法的有效结合 能更好的提高敏感性和特异性 诊断结果更靠 对NB临床诊断 预后判断和指导治疗都重要意义 page29 谢谢 CancerRes2008 68 8 April15 2008 CHD5是1p36区上的一种蛋白 CHD5通过p19ARF p53信号通路调控细胞的增值 衰老和凋亡 是一种很强的肿瘤抑制基因 NB细胞系CHD5启动子发生甲基化 导致CHD5表达缺乏或低表达 导致肿瘤细胞恶性增殖 研究表明 CHD5基因的甲基化状态与肿瘤的无事件生存率和总体生存率有关 均质染色区 Homogeneouslystainingregions HSR 均质染色区扩增是指扩增的DNA片断位于染色体内 形成大段的基因组区域 染色体显带染色