结直肠癌患者外周血crdbprna表达的探索性研究

结直肠癌患者外周血CRD BPRNA表达的探索性研究 宁夏医学院附属医院尹莉宁夏回族自治区自然科学基金项目编号NZ0552 研究背景 大肠癌的发病现状全球结直肠癌每年发病新病例数达94万 每年近50万人死于结直肠癌 结直肠癌死亡居癌症死因第3位 结直肠癌在我国也是最常见的恶性肿瘤之一 目前居恶性肿瘤发病率第4位 近年来 结直肠癌的发病率呈明显上升趋势 此趋势在大中城市较明显 结直肠癌发病与生活方式的改变及膳食结构不合理密切相关 随着人们生活方式 饮食结构的改变 期望寿命的提高 大肠癌的发病率还将进一步提高 新发病数死亡数 Lung bronchus 1 35millionBreast 1 15millionColon rectum 1 02millionStomach 934 000Liver 626 000 Lung bronchus 1 18millionStomach 700 000Liver 598 000Colon rectum 529 000Breast 411 000 ParkinDM CACancerJClin 2005 Worldwide 2002 研究背景 研究背景TNM分期与结直肠癌存活率的关系 研究背景 结直肠癌的初治诊断分期 期占15 期占20 30 期占30 40 期占20 25 根据2006年9月出版的 中国肿瘤临床年鉴 2006年我国26所省级肿瘤医院共有140732人接受了肿瘤手术 住院病人共有375447人次 门诊病人314万人次 结直肠癌发病率持续上升 结直肠癌早期诊断意义重大 探索结直肠癌早期诊断以及预后判断的指标 研究背景 预后 发生 c myc基因 研究背景 结直肠癌 发展 不稳定编码区结合蛋白 CodingRegioninstabilityDeterminant BindingProtein CRD BP 1992年BersteinPL等国外学者发现CRD BP 1997年Rossa基因定位 17号染色体的q21 3 CRD BP 在c myc基因中发现的第一个遮盖蛋白 CRD BP受生长发育调节 正常情况下 CRD BP只在胚胎组织中表达 在成体组织中表达被抑制 既往组织病理的研究发现 CRD BP是一个癌胚蛋白 在乳腺癌 小细胞肺癌 结直肠癌中表达或过表达 因此有可能成为新的特异肿瘤标志物 CRD BP c myc基因 结直肠癌 CRD BPRNA 研究意义 CRD BP与c myc基因CRD区结合避免核酸内切酶对c myc的降解 延长其半衰期 本课题通过检测探讨CRD BPRNA在结直肠癌 良性肠道疾病及正常人群外周血的表达情况 探讨其在结直肠癌早期诊断 判断预后的临床价值 研究意义 材料和方法 结直肠癌实验组纳入标准 术前经结直肠镜初步诊断患者 术前未经过治疗 放疗 化疗 内分泌等治疗 实验组临床特征 选取宁夏医学院附属医院2006年1月 2006年4月收治结直肠癌患者32例 男18例 女14例 实验组临床特征 DukesA期7例 DukesB期13人 DukesC期10人 DukesD期2人 术后确定淋巴结转移12例 无淋巴结转移20例 实验组临床特征 高分化腺癌9例 中分化腺癌16例 低分化腺7例 术后确定肿块最大直径 5cm18例 5cm14例 选取宁夏医学院附属医院2006年1月 2006年4月门诊就诊者 经肠镜活检确诊良性肠道疾病患者15例 对照组 共35例 选取宁夏医学院附属医院2006年1月 2006年4月门诊就诊者健康体检者20例 对照组 试验方法 荧光定量巢式RT PCR FQ nRT PCR 实验操作步骤 病例选择 采集外周静脉血 离心提取淋巴细胞 RNA提取及定量 采用Trizol总RNA提取液提取细胞总RNA 巢式荧光定量PCR 结果 样本总RNA的提取质量和纯度图中28s 18s二条清晰的条带和稍欠清晰的5s条带 说明提取的RNA样品纯度较高 完整性较好 无DNA污染 无降解 图1RNA提取结果 定性检测结果 M DNAmarker0 RNAfragmentamplifiedfromsamples negative 1 10 CRD BPRNAfragmentamplifiedfromsamples positive Inner图2结直肠癌外周血CRD BPRNA检测阳性样本电泳图 CRD BPRNA阳性样本的动力曲线 图3荧光定量PCR检测样本CRD BPRNA动力曲线图 CRD BPRNA在结直肠癌患者及对照组的表达 CRD BPRNA在结直肠癌不同Dukes分期中的表达水平的比较 CRD BPRNA在有无淋巴结转移结直肠癌患者中的表达水平的比较 与无淋巴结转移患者比较 P 0 05 讨论 CRD BPRNA在结直肠癌患者外周血中的阳性表达率为31 25 10 32 20健康体检者和15例良性结直肠疾病患者外周血中均未检出 差异具有统计学意义 P 0 05 提示CRD BPRNA有可能成为新的结直肠癌肿瘤标记物 用于临床诊断 CRD BPRNA在不同年龄 不同性别结直肠癌患者外周血中的表达差异无统计学意义 P 0 05 提示CRD BPRNA表达与以上两个因素无关 CRD BPRNA在不同分化程度 不同浸润深度 不同肿瘤大小的结直肠癌患者外周血中的表达差异无统计学意义 P 0 05 提示CRD BPRNA表达可能与以上因素无关 CRD BPRNA的表达与淋巴结转移密切相关 同时也与临床分期相关 有淋巴结转移患者外周血中阳性表达率高于无淋巴结转移患者 在 期患者外周血中的阳性表达率明显高于 期 差异有统计学意义 P 0 05 提示CRD BPRNA在结直肠癌的发生发展中起重要作用 以上结果提示