医学微生物第12次实验课件

白喉杆菌结核杆菌芽胞杆菌 2020 2 28 2 实验目的 通过感性认识 加深对白喉杆菌 结核杆菌 芽胞杆菌生物学性状的印象和记忆 通过实验掌握两种染色法 一 白喉杆菌 白喉杆菌 C diphtheriae 是棒状杆菌属中致病性最强的细菌 是白喉 diphtheria 的病原菌 白喉杆菌在患者鼻 咽 喉等部位繁殖并产生强烈外毒素 引起感染局部形成假膜和全身中毒症状 白喉杆菌实验内容 一 观察白喉杆菌的形态 阿尔伯染色 二 观察白喉杆菌在吕氏血清斜面上和亚碲酸钾培养基上的生长情况 示教 三 观察白喉杆菌毒力试验 示教 实验材料 阿尔伯 Albert 染色材料 接种环 酒精灯 生理盐水玻片1片 人白喉杆菌的吕氏血清斜面培养物1支 2人阿尔伯染色液1套 2人染色缸 染色架 胶瓶1套 2人吸水纸 显微镜 香柏油 擦镜纸 一 阿尔伯 Albert 染色实验方法 步骤涂片 干燥固定 阿尔伯 甲液 染7 10分钟后水洗 阿尔伯 乙液 染1分钟后水洗 将观察结果绘图 2020 2 28 7 二 观察白喉杆菌的生长情况 示教 亚碲酸钾培养基 吕氏血清斜面亚碲酸钾培养基 吕氏血清斜面 三 观察白喉杆菌毒力试验 示教 平板毒力试验 Elek平碟法 白喉外毒素原理 毒素抗毒素中和 双向琼脂扩散 2020 2 28 10 白喉杆菌毒力试验 Elek平碟法 二 结核杆菌 一 抗酸染色法 复染法 二 观察结核杆菌在罗氏培养基上的生长情况 示教 抗酸染色法原理 抗酸性菌体内含脂类物质较多 如结核杆菌 脂质占菌体干重的20 40 占胞壁干重的60 体内含有分枝菌酸 脂类 此物质具有抗酸的性质 染色时 它与石炭酸复红结合牢固 能抵抗酸性酒精的脱色作用 同时脂类又不易透过细胞膜 不能被脱色 因此抗酸菌能保持复红的颜色 相反 非抗酸性菌体内含脂类少 易被酸性酒精脱色 脱色时又易从细胞膜渗出而脱掉 最后被复染成蓝色 一 抗酸染色法 复染法 步骤 取痰涂片1片 固定 石炭酸复红染7 10分钟后水洗 3 盐酸酒精脱色3 5秒 重复3次 然后水洗 碱性美蓝复染2分钟后水洗 自干或用吸水纸吸干 然后在油镜下观察结核杆菌的形态 排列及染色性 将观察结果绘图 二 观察结核杆菌在罗氏培养基上的生长情况 示教 三 芽胞杆菌 G 一 观察炭疽杆菌的形态和菌落特点 示教 二 观察产气荚膜杆菌的形态和生长特点 示教 一 观察炭疽杆菌的形态和菌落特点 示教 形态 致病菌中最大的细菌菌体粗大 两端平截或凹陷 竹节状排列革兰氏染色阳性芽胞荚膜 2020 2 28 17 炭疽杆菌 2 观察炭疽杆菌在血平碟上的生长 专性需氧 灰白色粗糙菌落 边缘呈卷发状 周围无溶血环 细菌有致病性 与枯草杆菌对比 示教 对比观察枯草杆菌在血培养基上的生长情况 专性需氧 菌落周围有溶血环 细菌无致病能力 二 观察产气荚膜杆菌的形态和生长特点 示教 形态 复习 生长特点汹涌发酵现象 1 观察产气荚膜杆菌的形态结构 是G 大杆菌 菌体粗大 两端钝圆 散在排列 芽胞呈卵圆形 芽胞宽度不比菌体大 位于中央或末次端 培养时芽胞少见 须在无糖培养基中才能生成芽胞 位于菌体中央或近极端 菌体周围可形成荚膜 汹涌发酵现象在牛乳培养基中分解乳糖 产酸使酪蛋白凝固 产生大量气体 将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状 甚至冲开管口棉塞 气势汹猛 2020 2 28 22 1 显微镜 油镜 的使用和保护方法 1 提供一张细菌玻片标本 要求能正确使用油镜观察到细菌的基本形态 2 掌握显微镜 油镜 的保护方法2 血清对倍稀释法 1 用生理盐水将血清进行对倍稀释 终浓度达到1 2 1 4 1 8三个稀释度 2 掌握血清对倍稀释的原理和方法 能正确使用刻度吸管 3 玻片凝集试验 1 要求用伤寒诊断血清 采用玻片凝集试验的方法检测待检细菌是否为伤寒杆菌 2 要求操作方法 步骤正确 能准确判断结果 3 无菌操作正确 4 革兰染色法 1 口试回答细菌涂片的制作方法 2 将一张已涂好的细菌玻片进行革兰氏染色 3 要求染色步骤及各项染色时间正确 操作熟练 5 细菌划线分离培养技术 1 将细菌分区划线到普通琼脂平碟上 2 要求划线分区正确 接种划线手法正确 熟练 3 无菌操作正确6 液体培养基的细菌接种方法 无菌操作 1 将菌种接种到液体培养基内 2 要求各环节无菌操作正确7 细菌在培养基中生长情况及细菌特殊结构的观察 1 正确描述固体培养基的菌落 菌苔 2 正确描述半固体 液体培养基中的细菌生长情况 3 正确观察出镜下细菌的特殊结构8 抗酸染色 1 正确回答抗酸染色的各个步骤 包括用加热法或不加热法 初染时间 2 操作技术手法正确熟练 3 脱色程度控制较好 微生物学与免疫学实验考核办法 考核方式 按学号顺序逐一进场应考 考核内容共8项 每位同学通过抽签考其中一项 考核时间 每人限6分钟内完成