维生素b1的测定课件

维生素B1的测定 营养0901徐燕萍张晶荧赵莎莎赵小娟 结构与性质 嘧啶亚甲基噻唑连成的季铵盐化合物 维生素B1 又称硫胺 分子式C12H17ClN4OS 它是人体必需的13种维生素之一 是一种水溶性维生素 属于维生素B族 为无色结晶体 溶于水 在酸性溶液中很稳定 在碱性溶液中不稳定 易被氧化和受热破坏 测定意义 由于人体不能自行合成维生素B1 必须从食物中摄取 因此 人体需依赖食物提供足够的维生素B1 测定各种食品维生素B1含量多少将对食品营养价值评价十分重要 如果由于食物摄入量不足 或因食物的加工 运输 储存 烹饪不当 使维生素B1受到破坏或损失 都会造成维生素B1的缺乏 因此 食品中的维生素B1测定对指导食品加工 保存 膳食营养配比等都有一定的意义 维生素B1是人体能量代谢 特别是糖代谢所必需的 故人体对它的需要量通常与摄取的热量有关 当人体的能量主要来源于糖类时 维生素B1的需要量最大 成人的建议每日摄取量是1 0 1 5mg 妊娠 哺乳期每天摄取1 5 1 6mg 在生病 生活紧张 接受手术时 要增加必要用量 来源简介维生素B1广泛存在于天然食物中 含量较丰富的有 动物内脏 肝 心及肾 肉类 豆类 花生及精细加工的谷物类 谷物类是我国人民的主食 也是维生素B1的主要来源 但过分去除麸皮与糠 维生素B1损失很多 烹调加碱可使维生素B1损失增高 维生素B1的测定方法 分光光度法 HPLC法 荧光分光光度法等 分光光度法 分光光度法是将维生素B1生成游离型后 与重氮化试剂对氨基苯乙酮反应 生成紫红色色素 移至二甲苯中测定其浓度 本法灵敏度差 只适用于食品中维生素B1含量高的试样 高效液相色谱法 把维生素B1衍生化后导入高效液相色谱仪 经柱分离 通荧光检测器测定 本法适用于体系复杂的样品 干扰严重时采用此法 荧光法 这里我们主要介绍荧光法参考GB T5009 84 2003食品中硫胺素 维生素B1 的测定 方法原理 试样在酸性溶液中加热 提取维生素B1 经蛋白分解酶处理 使维生素B1成为游离型 再经层析柱纯化 去除荧光淬灭物质 同时浓缩 用碱性铁氰化钾溶液将其氧化成硫色素 在紫外线下 硫色素发出荧光 再给定的条件下以及没有其他物质干扰时 此荧光之强度与硫色素量成正比即与溶液中维生素B1量成正比 操作步骤 1 样品处理样品采集后用匀浆机打成匀浆于低温冰箱中冷冻保存 用时将其解冻后使用 2 样品提取 3 净化 a 脱脂棉铺于盐基交换管的交换柱底部 再加约1g活性人造浮石使之达到交换柱的1 3高度 b 用移液管加入提取液20 60ml c 加入约10ml热蒸馏水冲洗交换柱 弃去洗液 重复三次 d 加入20ml50g L酸性Kcl 收集此液于25ml刻度试管内 凉至室温 用250g L酸性Kcl定容至25ml 即为净化液 做空白试验重复上述操作 将20ml维生素B1标准使用液加入盐基交换管以代替试样提取液 即得到标准净化液 4 氧化 将5ml试样净化液分别加入A B两个反应瓶 同时将5ml标准净化液分别加入A1 B1两个反应瓶中 Maizel Gerson反应瓶 氧化流程 反应瓶要同时振摇 准确计时90s 5 测定 荧光测定条件 激发波长365nm 发射波长435nm 激发波狭缝5nm 发射波狭缝5nm 依次测定下列荧光强度 a 样品空白荧光强度 样品反应瓶A b 标准空白荧光强度 标准反应瓶A1 c 样品荧光强度 样品反应瓶B d 标准荧光强度 标准反应瓶B1 6 计算 式中 X 样品中硫胺素含量 mg 100g U 样品荧光强度 Ub 样品空白荧光强度 S 标准荧光强度 Sb 标准空白荧光强度 c 硫胺素标准工作液浓度 g ml V 用于净化的硫胺素标准工作液体积 ml V1 样品水解后定容之体积 ml V2 样品用于净化的提取液体积 ml m 样品质量 g 试剂作用 1 蛋白分解酶 用于试样的蛋白分解 2 盐酸 水解样品 3 氯化钾 该热溶液可从盐基交换管中的浮石里解析出维生素B1 4 铁氰化钾碱性溶液 氧化游离的维生素B1 生成硫色素 5 正丁醇 溶解紫外荧光物质 硫色素试剂 注意事项 1 加热酸性Kcl时不能使其沸腾 热Kcl滤速较快 而不沸则是使其不至因过饱和而在洗涤中结晶析出阻塞交换柱 2 紫外线会分解破坏维生素B