医学与科技学院 学生设计性实验申请表.doc

遵义医学院医学与科技学院 机能学实验 学生设计性实验申请表 实验名称 不同时间给予绿茶多酚对大鼠急性酒精性肝损伤影响 年级 2012 班级 K-4班 专业 临床 申请学生姓名及学号 杜红会（1220150435） 曾静（1220150434） 齐小雄（1220150436） 实验小组组别 第五组 所在实验室 第三实验室 指导教师 邓媛媛 金凤 填表日期 2014年11月16 立项背景（研究现状、趋势、研究意义等） 随着人们生活水平的提高，酒的消费量逐年的增多，酒精性肝损伤也越来越引起人们高度的重视。肝脏是重要的物质代谢器官，是酒精在体内代谢的主要场所，也是酒精作用的主要靶器官之一1。 酒的主要成分是乙醇，适度的饮酒能够消除疲劳，扩张血管，使脑血流增加，刺激中枢神经兴奋，加快血液循环。但过量饮酒则会给机体带来许多危害2。如酒精性肝病（Alcoholic liver disease，ALD），是由于长期大量饮酒所致的肝脏疾病。在病理组织学上按照肝细胞发生脂肪病变的程度分为：酒精性脂肪肝（Alcoholic fatty，AF）、酒精性肝炎（Alcoholic hepatitis，AH）、酒精性肝纤维化 （Alcoholic hepatic fibrosis）及酒精性肝硬化（Alcoholic Hepaticcirrhosis），四者是渐进性的过程，亦可不同类型同时存在3。我国由酒精所致肝损害的发病率呈逐年上升趋势，调查亦显示酒精性肝病在人群中属多发病和常见病不容忽视。酒精在体内经肝脏代谢后，产生的一些代谢产物直接影响体内正常的糖代谢途径，从而产生氧自由基，引起肝细胞损伤，甚至肝细胞坏死、肝纤维化和肝硬化4,5。大量乙醇进入机体后，在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化，使三羧酸循环产生障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢6。乙醇可致磷酸甘油增多而促进甘油三酯合成，致使脂肪在肝细胞内沉积，同时乙醇能激活氧分子，产生氧自由基导致肝细胞膜的脂质过氧化及体内还原型谷胱甘肽的耗竭，同时乙醇中毒可以直接引起肝脏纤维化7。丙二醛（MDA）是脂质过氧化反应的终产物，MDA含量也可以间接反映机体细胞受自由基攻击的程度，MDA的增加表明组织细胞脂质过氧化物量的增加。总巯基的含量也与酒精性肝病的发生、发展有着密切的联系。血清转氨酶活性被认为是肝细胞损伤的敏感指标。谷丙转 氨酶（ALT）主要分布于肝脏、肾脏和肌肉，血清中的ALT主要来自胞浆，当肝脏受损时，此酶可释放入血，导致血中酶活性浓度增加， 血清中ALT活性的升高在一定程度上反映了肝细胞受损伤的程度8。 茶多酚是从茶叶中提取的有效成分之一，由多种酚性物质组成，是一种多酚类化合物，具有清除自由基和抗氧化等生物活性作用9。茶多酚（Tea Polyphenols）是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。其中以黄烷醇类物质（儿茶素）最为重要。茶多酚又称茶鞣或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。有研究发现10茶多酚能有效抑制乙醇小鼠的兴奋性，降低其共济失调能力，提高其乙醇半数致死量，提示茶多酚可能具有解酒作用，中国历代医学文献也多处记载茶可以解酒毒。茶多酚有众多的生物学活性，研究表明茶多酚对兔酒精性肝损伤有一定的预防和治疗效果，具有广泛的临床应用价值11。也有研究表明茶多酚对酒精性肝损伤具有一定保护作用12。从上所述我们能够得到酒精性肝损伤的研究很多，但茶多酚对急性酒精性肝损伤的研究很少，所以我们的实验研究对治疗急性酒精性肝损伤和茶多酚的开发有重要意义。实验动物(包括动物的种类、体重、数量、性别、健康状况、提供单位等要求)健康雄性SD大鼠，50 只，体重200g左右，由遵义医学院实验动物中心提供。主要仪器全自动生化分析仪，Thermo Scientific Varioskan Flash 酶标仪，电子天平，冷冻离心机，解剖器械，生物显微镜等。 主要试剂和药品绿茶多酚、血清谷草转氨酶（ Aspartate aminotransferase，AST）、谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、总巯基测定试剂盒。研究方案1、 分组：健康雄性SD大鼠，适应喂养7 d后随机分为对照组、乙醇组、绿茶多酚 2 h 给予组（提前组）、绿茶多酚与乙醇同时给予组（同时组）和绿茶多酚推后给予组（推后组），每组10只。2、 建立模型：本试验采用一次性给予酒精的方式建立急性模型。3、 方法：先给予提前组绿茶多酚2ml(一般大鼠灌胃剂量是1ml/100g)，2h 后分别给予正常组蒸馏水4mL、乙醇组体积分数为 60% 的食用酒精2 mL和蒸馏水2mL、提前组等体积的食用酒精2mL、同时组等体积分数等量的食用酒精和等量的绿茶多酚、推后组等量的酒精；再过2 h 给予推后组小鼠等量的绿茶多酚（本试验采用等量的蒸馏水灌胃作空白对照，并使小鼠处于同等处理条件下）。4、 观察：观察大鼠活动及食量，6h之后开始禁食，禁食12 h，称体重并处死大鼠取其肝脏并称肝重，眼眶取血分离血清测定ALT、AST。取适量肝组织制成10%匀浆，测定MDA、总巯基的含量；取肝最大叶片采用石蜡切片技术进行HE染色观察肝组织损伤情况。 5、统计分析：采用 SPSS18.0 统计软件,应用单因素方差分析进行统计学处理，组间比较采用最小显著差法（LSD）法，P0.05，认为具有统计学差异，结果用（s）表示。观察指标肝脏重量比较，ALT、AST 与对照组的变化水平，MDA、总巯基的含量测定，石蜡切片HE染色观察情况。预期结果 3个时间点给予一定剂量的绿茶多酚均能不同程度的抑制急性酒精性肝损伤，可能表现为肝脏重量减少，血清中 ALT、AST 含量或活性降低以及肝组织中MDA 含量的减少和总巯基含量的提高；给予绿茶多酚肝脏组织 HE 染色肝细胞结构较整齐，水肿现象有所减轻。数据的收集及处理方法 统计分析：采用 SPSS18.0 统计软件,应用单因素方差 分析进行统计学处理，组间比较采用最小显著 差法（LSD）法，P0.05，认为具有统计学差异，结果用（s）表示。参考文献1肖丽霞，王慧晶，顾瑞霞，等乳酸茵对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用J扬州大学学报：农业与生命科学版，2008(4)：37-412 邓源，班春林，武晓琼.乙醇诱导肝损伤作用机制的研究进展J 华北国防医药,2005,17(4);242-244.3 黄哲, 田德录, 原爱红. 酒精性肝病的实验动物模型的研究J. 华人消化杂志, 1998, 6(8): 712-713. 4张利霞，安建钢，罗绥兰绿葛沙解酒饮对酒精性肝损伤保护作用的实验研究J包头医学院学报，2009，25(4)：34-35 5 田德录丁霞酒精性肝病研究述评J北京中医药大学学报，1999，22(1)-146 陈雪龙. 实验性肝损伤动物模型的研究进展J.实验动物科学,2008,25(3);48-59.7何映，邱银生，汪晖，等体内外急性酒精性肝损伤模型的研究中国药师，2006，9(2)：115-1178 赵敏, 杜艳秋, 李长喻. 葛根素对急性酒精中毒大鼠保护作用的实验研究J. 中国现代医学杂志, 2006, 16(17): 2610-2615. 9焦蓓蓓茶多酚的药理作用研究进展J亚太传统医药，2009，5(1)：131-13310曹丹，刘仲华，黄建安，等不同时间给予大红袍水提物对小鼠急性酒精性肝损伤的影响.茶叶科学,2013，33（4）