鱼腥草备用液（注射液用）细菌内毒素的干扰试验.doc

鱼腥草备用液（注射液用）细菌内毒素的干扰试验质量标准 细菌内毒素：取本品，依法检查（中国药典2005年版，附录XI E），每1ml鱼腥草备用液（注射液用）中含内毒素的量应小于50EU。起草说明一、 细菌内毒素限值的确定根据根据鱼腥草注射液说明书，本品的用法与用量中规定：成人一次2-4ml（肌内注射），一日4-6ml。 按本品的最大值计算，M为6ml/60kg.h K为5.0EU/（ kg.h）=50EU/ml 综合生产，临床用药和检验的实际情况，将本品的细菌内毒素限值规定为50EU/ml.即每1ml中含内毒素的量应小于50EU。 用灵敏度为0.25 EU/ml.的两个厂家的鲎试剂对3批热原检查合格的鱼腥草备用液（注射液用）进行细菌内毒素试验 二、供试品的干扰试验1试验材料 （1）细菌内毒素工作标准品（冻干）批号： （2）细菌内素检查用水批号：（3）鲎试剂批号：（4）供试品 批号： 生产厂家：2鲎试剂灵敏度复核试验 根据鲎试剂灵敏度的标示值（），将细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后制成2.0、1.0、0.5、0.25四种浓度的细菌内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟，按检查法下试验，每一浓度平行做4支，同时，用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管，如最大浓度2.0管均为阳性，最低浓度0.25管均为阴性，阴性对照管均为阴性，按下式计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值（c）。式中X为反应终点浓度的对数值（lg）。反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。复核结果如下：批号0.5EU/ml0.25EU/ml0.125EU/ml0.0625EU/ml水阴性c鲎试剂鲎试剂3干扰试验3.1干扰预试验根据本品的最大有效稀释倍数MVD为200倍，将本品供试品溶液制成1：25；1：50；1：100;1：200的系列稀释浓度，再分别用各个稀释浓度制成含有细菌内毒素的PPC系列和不含细菌内毒素的NPC系列，同时作两管水阴性、两管水阳性。结果如下：药品批号鲎试剂批号稀释倍数PPCNPC水阴性水阳性以上结果表明：实验结果有效，样品对鲎试剂的相容性好，0.25EU/ml灵敏度的鲎试剂在对应样品在1：100;1：200浓度下作鲎试剂三批都没有干扰。32干扰试验根据干扰预试验的结果，对1:100；1：200稀释浓度进行确认试验。用细菌内毒素检查用水和此浓度的稀释液分别将同一支（瓶）细菌内毒素工作标准品制成含细菌内毒素工作标准品2.0、1.0、0.5、0.25四种浓度的细菌内毒素溶液。每一浓度的细菌内毒素溶液平生作4支，另取细菌内毒素检查用水和此浓度的稀释液各做2支阴性对照管。如最大浓度2.0管均为阳性，最低浓度0.25管均为阴性，阴性对照管均为阴性时，按下式计算用细菌内毒素检查用水制成的细菌内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值（Es）和此两个浓度稀释液制成的细菌内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值（Et）。式中Xs，Xt分别为细菌内毒素检查用水和稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的对数值（lg）。当Es在0.52.0（包括0.5和2.0）时，且当Et在0.5Es2.0 Es（包括0.5Es和2.0 Es）时，则认为供试品在该浓度下不干扰试验。33干扰试验结果鲎试剂批号样品批号稀释倍数EsEt结果湛江博康海洋生物有限公司湛江安度斯生物有限公司三、结论 通过上述干扰试验的结果表明，供试品在1：100；1:200稀释浓度下，鲎试剂选用0.2 5EU/ml灵敏度对试验无干扰，可进行细菌内毒素检查。四、三批鱼腥草备用液（注射液用）细菌内毒素检验结果样品批号细菌内毒素检验结果此三批样品按此标准检验，结果均 -制药有限公司细菌内毒素检查干扰试验记录检品编号： 第 页共 页样品名 称生产单位供样单位批 号规格考察浓度实验材料细菌内毒素检查用水规 格批号生产单位鲎试剂1规 格批号生产单位复核灵敏度配 制每支加水 复溶后供试鲎试剂2规 格批号生产单位复核灵敏度配 制每支加水 复溶后供试细菌内毒素工作标准品规 格批号生产单位试验方法中国药典2005年版二部附录XI E试验日期一、细菌内毒素溶液的配制1、取一支细菌内毒素工作标准品1支细菌内毒素工作标准品 1.0ml细菌内毒素检查用水 1.0ml（ EU/ml）2、取 ml（ EU/ml） ml细菌内毒素检查用水 ml（ EU/ml）3、取 ml（ EU/ml） ml细菌内毒素检查用水 ml（ EU/ml）4、取 ml（ EU/ml） ml细菌内毒素检查用水 ml（ EU/ml）5、取 ml（ EU/ml） ml细菌内毒素检查用水 ml（ EU/ml）6、取 ml（ EU/ml） ml细菌内毒素检查用水 ml（ EU/ml）7、取 ml（ EU/ml） ml细菌内毒素检查用水 ml（ EU/ml）质检负责人： 复核员： 检验员： -制药有限公司细菌内毒素检查干扰试验记录检品编号： 第 页共 页检品名称： 二、供试品细菌内毒素溶液配制：1、取一支细菌内毒素工作标准品1支细菌内毒素工作标准品 1.0ml细菌内毒素检查用水 1.0ml（ EU/ml）2、取 ml（ EU/ml） ml 样品稀释液 ml（ EU/ml）3、取 ml（ EU/ml） ml 样品稀释液 ml（ EU/ml）4、取 ml（ EU/ml） ml 样品稀释液 ml（ EU/ml）5、取 ml（ EU/ml） ml 样品稀释液 ml（ EU/ml）6、取 ml（ EU/ml） ml 样品稀释液 ml（ EU/ml）7、取 ml（ EU/ml） ml 样品稀释液 ml（ EU/ml）三、实验方法按中国药典2005年版二部附录XI E检验四、实验结果样品批号系列细菌内毒素浓度NC效价Et/Es20.50.25PPPW注：“”为阳性，“”为阴性样品批号系列细菌内毒素浓度NC效价Et/Es20.50.25PPPW注：“”为阳性，“”为阴性五、结果分析质检负责人： 复核员： 检验员： -制药有限公司鲎试剂灵敏度复核记录编号：检品名称：鲎试剂（标示灵敏度 EU/ml） 规格： ml/支生产单位： 批号：复核方法：中国药典2005年版二部附录XI E 检验日期：【实验材料】1、细菌内毒素检查用水（规格： 产品批号： ）生产单位：2、细菌内毒素工作标准品（规格： 产品批号： ）生产单位： 【试液配制】1、鲎试剂配制：取鲎试剂 支，每支鲎试剂加水 溶解后供试。2、细菌内毒素溶液的配制：（1）取一支细菌内毒素工作标准品1支细菌内毒素工作标准品 1.0ml细菌内毒素检查用水 1.0ml（ EU/ml）（2）取 ml（ EU/ml） ml细菌内毒素检查用水 ml（ EU/ml）（3）取 ml（ EU/ml） ml细菌内毒素检查用水 ml（ EU/ml）（4）取 ml（ EU/ml） ml细菌内毒素检查用水 ml（ EU/ml）（5）取 ml（ EU/ml） ml细菌内毒素检查用水 ml（ EU/ml）（6）取 ml（ EU/ml） ml细菌内毒素检查用水 ml（ EU/ml）（7）取 ml（ EU/ml） ml细菌内毒素检查用水 ml（ EU/