PCR仪 凝胶成像仪使用说明.doc

ABI Veriti 梯度PCR仪使用说明(简版)操作步骤：1、 打开PCR仪的热盖，放入0.2ml的样品管（热盖平稳），盖好热盖。2、 打开PCR仪的电源，仪器程序开始初始化，需等待几分钟（此步可提前）。3、 初始化完成后，显示主菜单。4、 点“Browse/New Methods”，进入PCR程序列表：5、 可以直接点一个PCR程序，选择“Start Run”运行；点右边的“文件夹”符号，可以选择不同的文件夹。如要新建一个PCR程序，点“New”，出现PCR程序。6、 添加一段程序：点上方的“Stage”，该位置变红；再点“Add”，软件将加入一段新的程序。7、 修改循环数、温度、时间：点中循环次数、温度或时间位置，下方出现数字键。依次点数字键，出现合适数字后，点“Done”确定。8、增加一个步骤：点“Step”位置，该位置变红；再点“Add”，软件将加入一个新的步骤。9、删除一个步骤：点“Step”位置，在点“Delete”，软件将该步骤删除。8、 建立梯度模式：点中一个步骤，再点“Option”键，出现选项。点“VeriFlex step”，出现梯度创建窗口：输入6个梯度温度，温度下方的“12”是指对应的1、2两行加热孔，全部输好后，点“Done”确定。注意：相邻的两个梯度温度之差最大不能超过5！11、建立渐变模式(如需要请参考使用说明详版)。12、增加暂停步骤(如需要请参考使用说明详版)。13、编辑PCR程序完成后，点“Save”保存。14、回到PCR程序列表界面，选择新建的PCR程序。15、点“Start Run”，设置参数（反应体积和热盖温度），点“Start Run Now”运行PCR程序。16、仪器运行选中的PCR程序，显示运行监视窗口。17、暂停运行：点“Pause Run”，仪器暂停，出现暂停选项栏。18、终止运行：点“Stop”可以终止整个PCR程序。19、反应报告：PCR程序结束后，仪器会自动生成反应报告，显示当次反应的各项指数。20、反应结束后，打开热盖取出样品，关闭电源。并开盖放置，使热盖和加热模块正常降温。（使用说明详版在A605门口处吊柜中）。A:运行状态栏，显示运行温度和剩余时间B:加热警示标记 C:阶段指示 D:步骤温度 E:步骤时间 F:步骤指示G:状态报告，显示日期、时间和仪器状态H:延伸箭头，点箭头可以显示更多的步骤请大家注意保持PCR仪的清洁，定期对PCR仪进行清理（两周一次）！BioRad公司出品PCR仪使用说明1、 开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”，10秒后，显示主菜单：准备执行程序。2、放入样本管，关紧盖子。 3、如果要运行已经编好的程序，则直接按“Run”，选择已储存的程序，按“ENTER”，选择PCR槽（A/B），再设置PCR体系，最后开始执行程序。 4、如果要输入新的程序，则在主菜单上选择“NEW”，命名新的程序，最多8个字母，输入后按“ENTER确认。输入程序步骤： 名字输入后，显示“STEP1 TEMP GOTO OPIT ON END”，按ENTER则可以输入温度（0100 ），按ENTER确认后，则可以输入孵育时间，输入数字，完成后按ENTER确认，跳到下一步，输入方式同上。选择GOTO，输入循环步骤时链接到第几步（循环数最多可达 9999次）（为实际循环数-1)。选择option，显示“STEP EXTENDI NCREMENT SLOPE”再选择increment，按ENTER”确认，输入初始的温度，确认后输入时间，按“ENTER”确认，然后输入每个循环增加或减少的温度，增加用正值，减少用负值（-0.1 6），按“ENTER”确认。选择extend，按“ENTER”确认，输入每个循环增加或减少的时间（-60 60秒），按“ENTER”确认。选择slop（指温度上升或下降的速率），输入温度的改变值（-0.1 1.5）。按“ENTER”确认，然后输入加热或致冷的速度，按“ENTER”确认，选择End，输入结束步骤。 5、 输入完成的程序后，到主菜单，选择新程序，开始运行。 6、 其它：用“pause”可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程序。用“stop”或“Cancel”可停止运行的程序。（注意：使用梯度PCR程序时，相邻的两个梯度温度之差最大不能超过5！） 两台BioRad公司的PCR仪的操作规范基本一致，请大家规范操作。请大家注意保持PCR仪的清洁，定期对PCR仪进行清理（两周一次）！PCR仪保养篇1样品池的清洗 先打开盖子，然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡样品池5min，然后清洗被污染的孔；用微量移液器吸取液体，用棉签吸干剩余液体；打开PCR仪，设定保持温度为50的PCR程序并使之运行，让残余液体挥发去除。一般510min即可。2热盖的清洗 对于荧光定量PCR仪，当有荧光污染出现，而且这一污染并非来自样品池时；或当有污染或残迹物影响到热盖的松紧时，需要用压缩空气或纯水清洗垫盖底面，确保样品池的孔镜干净，无污物阻挡光路。3仪器外表面的清洗 清洗仪器的外表面可以除去灰尘和油脂，但达不到消毒的效果。选择没有腐蚀性的清洗剂对PCR仪的外表面进行清洗。4更换保险丝 先将PCR仪关机，拔去插头，打开电源插口旁边的保险盒，换上备用的保险丝，观察是否恢复正常维修：1)PCR仪器需要定期检测，视制冷方式而定一般半年至少一次。2)PCR反应的要求温度与实际分布的反应温度是不一致的，当检测发现各孔平均温度差偏离设置温度大于12时，可以运用温度修正法纠正PCR实际反应温度差。3)PCR反应过程的关键是升、降温过程的时间控制，要求越短越好，当PCR仪的降温过程超过60s，就应该检查仪器的制冷系统，对风冷制冷的PCR仪要较彻底地清理反应底座的灰尘；对其他制冷系统应检查相关的制冷部件。4)一般情况如能采用温度修正法纠正仪器的温度时，不要轻易打开或调整仪器的电子控制部件，必要时要请专业人员修理或利用仪器电子线路详细图纸进行维修。BioRad凝胶成像系统操作规范操作步骤：1、打开成像仪器电源，将样品放入工作台。2、双击桌面上图标，打开Quantity One 软件，或从开始-程序-The Discovery Series/Quantity One进入。3、从File下拉菜单中选择ChemiDox XRS，打开图像采集窗口。4、Select Application 选择相关应用： a：UV Transillumination 透射UV：针对DNA EB胶或其他荧光； b：White Transillumination 透射白光：针对透光样品如蛋白凝胶，X-光片； c：White Epillumination 侧面白光：针对不透光样品或蛋白凝胶； d：Chemiluminescnece 化学发光，不打开任何光源。5、单击Live/Focus按钮，激活实时调节功能，此功能有三个上下键按钮：IRIS（光圈），ZOOM（缩放），FOCUS（聚焦），可在软件上直接调节或在仪器面板上手工调节，调节步骤： a调节IRIS至适合大小； b点ZOOM将胶适当放大； c调节FOCUS至图像最清晰。6、如是DNA EB胶或其他荧光，单击Auto Expose，系统将自动选择曝光时间成像，如不满意，单击Manual Expose，并输入曝光时间（秒），图像满意后保存。如是蛋白凝胶，接第5步骤直接将清晰的图像保存即可；如是化学发光样品，将滤光片位置换到Chemi位（仪器上方右侧），将光圈开到最大，输入Manual Expose时间，可对化学发光的弱信号进行长时间累积如30min，或单击Live Acquire 进行多帧图像实时采集，在对话框内定义曝光时间长短，采集几帧图像，在采集的多帧图像中选取满意的保存。注意事项：1、请勿将潮湿样品长期放在暗箱内，以防腐蚀滤光片，更不要将液体溅到暗箱底板上，以免烧坏主板。2、使用后将