高中生物：1.2 植物组织培养技术 课件（3）（苏教版选修1）.ppt

植物组织培养的基本技术 一 植物组织培养实验室的结构及设计要求 完整的植物组织培养室通常包括洗涤室 化学实验室 接种室 培养室 细胞学实验室等部分 可以根据实际需要和条件进行设计 但从功能上至少包括化学实验室或准备室 接种室以及培养室三部分 并且按顺序排列 在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间 实验室结构 仪器设备及操作技术 一 化学实验室 准备室 1 主要功能 用于培养器皿的清洗 培养基的配制 分装和灭菌 试管苗的出瓶及整理等工作 2 主要仪器设备及用品 冰箱 天平 高压灭菌锅 ph计 干燥箱 实验台 水槽 凉干架 药品柜 离心机 水浴锅 微波炉 电炉 磁力搅拌器 蠕动泵 移液器 各种玻璃器皿 烧杯 量筒 容量瓶 试剂瓶 三角瓶等 及培养基分装用品等 百分之一天平 千分之一天平 万分之一天平 各种型号的高压灭菌锅 移液器 二 接种室 无菌操作室 1 功能 植物材料的灭菌 接种以及培养物的继代转接等 接种室要求保持洁净 与化学实验室之间应设置缓冲室 2 仪器设备及用品 超净工作台 紫外灯 小推车 搁架 磁盘 接种工具 各种镊子 解剖刀 手术剪 普通剪刀接种针 酒精灯 手持喷雾器 细菌过滤器等 等 超净工作台 三 培养室 1 功能 主要用于植物材料的培养 要求室内洁净并能保持一定的温度 光照以及湿度以适合植物材料的生长和分化 2 仪器设备及用品 培养架及灯管 摇床 振荡器 空调 自动定时器 加湿及除湿器 光照培养箱 温湿度计灯等 培养架 光照培养箱 恒温振荡器 多用振荡器 四 细胞学实验室 1 功能 主要用于培养材料的显微观察及照相等 2 仪式设备及用品 体视显微镜 普通显微镜 倒置显微镜 荧光显微镜 配套显微照相装置 普通相机或数码相机 切片机及配套制片及染色用品等 体视显微镜 普通光学显微镜 倒置显微镜 倒置荧光显微镜 二 实验室基本操作 一 洗涤 1 普通器皿 采用洗衣粉 洗洁精等中性洗涤剂洗涤 2 难清洗器皿及移液管等 用水清洗后再用重铬酸钾洗液浸泡 最后清水冲洗 或用超声波仪清洗 二 灭菌 1 器具灭菌 培养皿 解剖刀 镊子等用品 1 干热灭菌 铝箔包好后 放于恒温干燥箱内 150 保温2小时 成本较高 2 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌锅内120 15 20分钟 3 灼烧灭菌 接种时 解剖刀及镊子等浸入95 乙醇 然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌 2 培养基灭菌 采用高压蒸汽灭菌 120 15 20分钟 培养基体积越大 灭菌时间越长 3 不耐高温化合物 采用过滤灭菌 如iaa等 4 外植体的表面灭菌 采用70 75 乙醇 10 30秒 有效氯1 的次氯酸钠 5 30分钟 0 1 0 2 的氯化汞 2 15分钟 等 杀菌剂中加入几滴吐温 20或80 tween 20或80 效果较好 三 无菌操作 1 保持接种室的无污染环境 定期熏蒸或喷雾处理 进行消毒 接种前打开超净工作台及紫外灯照射20 30分钟 关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作 2 保持超净工作台的洁净 接种前用70 乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾 操作前 将手和手臂用70 乙醇消毒 所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台 3 点燃酒精灯 进行操作 接种材料前后 灼烧瓶口 工具要灼烧彻底 防止交叉污染 4 保持培养室的洁