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课题2多聚酶链式反应扩增dna片段 自学提纲 知识回顾 1 dna分子的结构 外侧 内侧 基本单位 2 dna复制过程和特点 3 pcr技术概念及应用 基本概念 变性 复性 taqdna聚合酶 引物理解pcr技术的原理掌握pcr技术的全过程比较pcr技术和体内dna复制的异同点 1 dna分子的3 端与5 端 oh端为3 磷酸基团的末端为5 2 dna分子由两条反向平行的脱氧核苷酸链根据碱基互补配对原则形成氢键连接而成 解旋酶 dna母链 4种脱氧核苷酸 dna聚合酶 引物 rna 打开dna双链 模板 合成子链原料 催化子链合成 使dna聚合酶能从引物3 端开始连接脱氧核苷酸 思考 3 体内dna复制的条件是什么 体外扩增dna如何提供相似环境 变性 80 100 taq聚合酶 耐高温 15 30个核苷酸构成dna或rna dna双链 单链 变性 加热80 100 复性 缓慢冷却 4 dna分子的热变性原理 变性的目的 复性的目的 解开双链 有利于引物 和引物 与两条单链的结合 一 pcr技术的原理 利用dna分子的热变性原理 通过控制温度来控制双链的解聚与结合 从而完成体外dan分子的扩增 体外dna复制的条件 四种脱氧核苷酸 耐高温的聚合酶 引物 模板 缓冲溶液和严格控制温度的温控设备 复制的方向 子链的5 端向3 端延伸 二 pcr的反应过程 每个循环包括 变性 复性 延伸 从第二轮循环开始 上一次循环的产物也可以作为模板参与反应 并且由引物 延伸而成的dna单链会与引物 结合 进行dna的延伸 这样 dna聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的dna序列 使这段固定长度的序列呈指数扩增 三 实验步骤 准备好pcr反应体系的配方 注意事项 详见操作提示 四 结果分析与评价 dna含量的测定 稀释 对照调零 测定 计算 公式见p63 波长260nm处读数 蒸馏水做对照 50倍 pcr技术与体内dna复制的区别 1 pcr不需要解旋酶 体内dna复制需要 2 pcr需要耐热的dna聚合酶 常用taqdna聚合酶 而生物体内的聚合酶在高温时会变性 3 pcr一般要经历三十多次循环 而生物体内dna复制需要生物体自身的复制 练习巩固 1 关于pcr技术的应用 错误的一项是a古生物学 刑侦破案 dna序列测定b诊断遗传疾病 基因克隆 古生物学cdna序列测定 基因克隆 刑侦破案 d诊断遗传疾病 合成核苷酸 dna序列测定 2 dna的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸 3 pcr技术最突出的优点是a原理简单b原料易找ctaqdna聚合酶有耐热性d快速 高效 灵活 易于操作 4 做pcr使用的
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