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第一节 2008 7 25 工具酶的发现和基因工程的诞生 基因工程的基本工具 准确切割dna的工具 分子手术刀 限制性核酸内切酶dna片段的连接工具 分子缝合针 dna连接酶基因转移工具 分子运输车 基因进入受体细胞的载体 质粒 基因的大小以纳米计算 要对它进行剪切 拼接等操作 没有非常精细的工具是不行的 进行基因操作最少需要以下三种工具 思考 什么是限制性核酸内切酶 作用是什么 对基因工程诞生的意义是什么 限制性核酸内切酶的作用 能识别特定核苷酸序列 从特定部位的两个核苷酸之间切开 限制性核酸内切酶 分子手术刀 限制酶切割dna后形成的末端 黏性末端 平末端是如何形成的 重播 dna被限制酶切断后有两个反向互补的 黏性末端 被同一种限制切断的几个dna具有相同的黏性末端 能够通过互补进行配对 基因的针线 dna连接酶 切断的dna片段要与受体细胞的dna连接 你觉得可以用什么酶 思考 dna连接酶是什么 作用是什么 对基因工程诞生的意义是什么 dna聚合酶和dna连接酶有何相同和不同点 p224表 连接酶的作用是 将互补配对的两个黏性末端连接起来 使之成为一个完整的dna分子 阅读思考 限制酶切割后有两种不同的结果 一种产生黏性末端 一种产生平末端 那么恢复它们的连接时 所用dna连接酶是否可以不加选择 p225例1 基因进入受体细胞的载体 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达 首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去 能将外源基因送入细胞的工具就是载体 思考 质粒是什么 作用是什么 为什么基因工程需要质粒 作为载体的必要条件 能自我复制有切割位点能与目的基因结合能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达 有遗传标记基因对受体细胞无害 容易分离比较容易得到 3 基因的运输工具 运载体 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在 将来可用含青霉素的培养基鉴别 练习 在基因工程中 切割运载体和含有目的基因的dna片段 需使用 同种限制酶b 两种限制酶同种连接酶d 两种连接酶基因工程常用的受体细胞有 1 大肠杆菌 2 枯草杆菌 3 支原体 4 动植物细胞a 3 4 b 1 2 4 c 2 3 4 d 1 2 3 不属于质粒被选为基因运载体的理由是a 能复制 b 有多个限制酶切点c 具有标记基因d 它是环状dna d 练习 3 基因工程是在dna分子水平上进行设计施工的 在基因操作的基本步骤中 不进行碱基互补配对的步骤是 a 人工合成目的基因b 目的基因与运载体结合c 将目的基因导入受体细胞d 目的基因的检测和表达 c 练习 感受高考 已知某种限制性内切酶在一线性dna分子上有3个酶切位点 如图中箭头所指 如果在该线性dna分子在3个酶切位点上都被该酶切断 则会产生a b c d四种不同长度的dna片段 现有多个上述线性dna分子 若在每个dna分子上至少有1个酶切位点被该酶切断 则
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