重点地区项目内暴露检测实验室要求-胡小键PPT课件.pptx

重点地区环境与健康专项调查内暴露检测质量控制 中国疾控环境所胡小键2016 7 28 2020 3 5 1 生物监测分析基本要求 人员 人员固定 培训合格仪器 经过校准 定期核查标准品 试剂耗材 统一品牌 空白试验测定方法 方法确证 过程质控实验环境 保持整洁 避免污染生物安全 实验防护 废弃物处理 2020 3 5 2 内暴露检测能力 血中挥发性有机物测定 20样 天尿中多环芳烃代谢物测定 15样 天 2020 3 5 3 样品接收条件 血样 样品量足够样品保存于2 6 之间血液充分抗凝编号与清单对应带有采样空白管 5 尿样 样品量足够保存条件合适无细菌繁殖无样品洒漏编号与清单对应带有采样空白管 5 记录样品拒绝原因 2020 3 5 4 样品保存 血样 储存于2 6 不超过10周 尿样 短期保存于 20 长期保存于 70 2020 3 5 5 样品解冻 血样测定时应将样品放置于室温下恢复至常温测定 如果长时间不测定则放置于冰箱保存 冰冻尿样放置于冰箱4 条件下避光过夜解冻 2020 3 5 6 方法确证 空白试验标准曲线精密度准确度检出限 2020 3 5 7 空白试验 试剂空白以纯水为样品加入相同的试剂和内标 进行前处理测定 空白结果应小于检出限 2020 3 5 8 标准曲线 标准工作曲线 标准曲线 配制5个点以上的标准曲线不包括S0线性范围不宜过宽 与待测样品中的浓度匹配 血中VOC标准曲线范围在0 006 5 76ng mL 尿中多环芳烃代谢物标准曲线范围在0 021 200ng mL 相关系数 R 0 995 2020 3 5 9 精密度 取空白基体加标配制低 高两个浓度水平的样品各6 7个 加入相同的试剂和内标 进行前处理测定 计算相对标准偏差 RSD 应 20 个别化合物可放宽至 30 2020 3 5 10 准确度 采用上述精密度的样品计算平均回收率平均回收率在70 120 之间 个别化合物可放宽到60 120 之间 2020 3 5 11 检出限 配制6 7个基体空白加标样品 加标后浓度为预估的检出限浓度 此浓度的信号强度为基线噪音的2 5倍 加入相同的试剂和内标 前处理后测定 计算结果的3倍标准偏差 3S 为方法检出限 如果空白中检出目标物 则定性检出限计算方法为空白均值 3S 检出限要求不低于作业指导书提供的检出限 2020 3 5 12 实验室外部质控 实验室可参加样品比对实验 样品测定结果与真值偏差在20 以内 2020 3 5 13 过程质控 空白实验仪器灵敏度标准曲线质控样品化合物确认 2020 3 5 14 空白试验 每一批样品前处理带一个实验室试剂空白 如果试剂空白中有干扰物 则应查找原因 把干扰物浓度降至检出限以下才能测定样品 如果干扰物在试剂空白中的浓度高于检出限 则此批样品中该分析物数据作废 2020 3 5 15 标准工作曲线 采用低浓度标准溶液考查仪器灵敏度 每天新做一组标准工作曲线 测定过程中通过标准曲线中间点溶液监控标准曲线稳定性 监控频率为每10个样品加入一个标准溶液 2020 3 5 16 标准工作曲线 标准溶液校正点测定结果与其真值的偏差在 15 以内 查找原因 排除故障后重新测定标准曲线及样品 如果样品无法复测 则上报结果并在结果上标注可疑 如果校准点与真值的偏差在130 以上 且样品中均未检出 则无需进行复测 2020 3 5 17 质控样品 如果有可获得的有证参考物质 则优先选择有证参考物质作为质控样品 如果没有可获得的有证参考物质 则由实验室自己配制加标样品 选择混合人血样或尿样 分别配制低浓度和高浓度两个水平的样品基体加标 做加标回收实验 2020 3 5 18 质控样品 每批次样品须包括1个低浓度质控和1个高浓度质控样品 质控样品分布于该批次的开始和结束 低 高两个浓度加标样品回收率在70 120 之间 2020 3 5 19 平行样测定 每批样品加入一个平行样 平行样测定结果相对偏差小于30 如果没有平行样 可选择两个加标样品作为平行样 2020 3 5 20 化合物确认 虽然仪器能自动积分 但应该逐个检查仪器积分 必要时进行手动积分 有对应同位素内标化合物 相对保留时间应在标准系列中相对保留时间平均值的 0 15 以内 无同位素内标的保留时间与标准系列保留时间平均值偏差在 0 05min GC MS 和 0 2min LC MS MS 2020 3 5 21 化合物确认 化合物相对离子强度须满足下表要求 2020 3 5 22 操作手册 各实验室制定操作手册 操作手册内容包括但不限于 仪器与试剂 前处理过程 仪器条件及分析过程 标准曲线配制 定性与定量 检出限 精密度 回收率 仪器清洗与维护 质控要求 2020 3 5 23 实验记录 为方便实验结果的查询和追溯 建议实验记录包括以下内容 样品编号 前处理日期 分析日期 分析序列名 样品重量或体积 稀释倍数 色谱柱批号 仪器维护时间等 2020 3 5 24 全血中卤代烃和苯系物测定方法 2020 3 5 25 测定原理 全血挥发性有机化合物测定采用吹扫捕集 气相色谱 同位素稀释质谱法 2020 3 5 26 样品采集与保存 玻璃血糖采血管 7mL 内含肝素钠和氟化钠 用于防止凝固和抑制细胞代谢 采用异丙醇作为消毒剂 皮肤表面消毒后要干燥5 10s 采集静脉血于7mL真空采血管中 立刻轻轻颠倒混匀30次 转移血样至4mL样品瓶中 装满 盖上聚四氟乙烯盖 置于4 冰箱保存 于10周内测定完 2020 3 5 27 样品采集与保存 4度保存不超过10周 2020 3 5 28 样品前处理 40mL棕色进样瓶中装满纯水 在氮气环境下 取出10mL水样 打开4mL样品瓶瓶盖 将血样倒入棕色进样瓶中 在4mL进样瓶中加入2 5mL纯水后震荡 将进样瓶中水样倒入40mL棕色进样瓶中 依次加入一滴 0 039g 消泡剂 同位素内标 用纯水将样品瓶加满后 盖上瓶盖 放置在超声震荡器中震荡1min 上机测定 2020 3 5 29 样品前处理 样品放置一段时间后 消泡剂会沉淀在进样瓶底部 消泡剂不能进入吹扫装置 此时再进行吹扫 会产生泡沫 堵塞仪器 建议在测定样品时 7个样品为一组进样 待7个样品进样完毕后 再取7个样品 超声震荡1min后上机测定 2020 3 5 30 仪器条件 吹扫捕集条件 以高纯氦气 99 999 为吹扫气 吹扫流速40mL min 吹扫时间 11min 解吸温度 225 解吸时间 4min 柱温 柱温起始温度为35 保持5min 以6 min升至160 保持6min 20 min升至210 保持2min 载气 氦气 110mL min 恒流方式 质谱条件 SIM监测模式 2020 3 5 31 气相色谱图 2020 3 5 32 定性与定量 定性 离子对 相对保留时间定性 定量 内标标准曲线定量 2020 3 5 33 方法学评价指标 检出限 方法检出限0 003 0 14 g L精密度 RSD0 995 2020 3 5 34 注意事项 样品瓶体积测定 4mL x4 93mL RSD0 8 40mL x42 8 RSD0 9 样品采集完后现场分装到4mL小瓶里 4mL样品瓶 40mL进样瓶及棕色玻璃瓶附螺旋盖及白色聚四氟乙烯垫片 采样前 需在80 真空烘箱中烘烤24h 待烘箱冷却至室温后 使用高纯氮气将烘箱压力将至大气压 标准品 内标和血样从冰箱里拿出来 放置室温后才能使用 标准曲线配制及样品的前处理在氮气的正压环境下进行 2020 3 5 35 注意事项 测定过程中 连接进样器和吹扫管的PEEK管中残留血液会发生凝结 堵塞管路 建议观察此管路 若发生堵塞 用一次性注射器插入管路 注入