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文档简介

杨飞城 谢谢聆听 HE染色操作步骤苏木精 伊红染色法 hematoxylin eosinstaining 简称HE染色法 石蜡切片技术里常用的染色法之一 苏木精染液为碱性 主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 伊红为酸性染料 主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 HE染色法是组织学 胚胎学 病理学教学与科研中最基本 使用最广泛的技术方法 工具 原料固定液 甲醛 福尔马林 脱水剂 酒精透明剂 二甲苯石蜡脱蜡剂 二甲苯至水剂 酒精染色剂 苏木精水溶液 酒精伊红染色液生理盐水 蒸馏水 PBS实验必备溶剂 适用范围组织学 胚胎学 病理学教学与科研 he染色实验具体步骤1取材 固定 固定液 甲醛 福尔马林 从人或动物新鲜尸体上取下组织块 一般厚度不超过0 5厘米 投入预先配好的固定液中 10 福尔马林 Bouin氏固定液等 使组织 细胞的蛋白质变性凝固 以防止细胞死后的自溶或细菌的分解 从而保持细胞本来的形态结构 修剪 脱水 透明 脱水剂 酒精透明剂 二甲苯不同组织固定时间不同 固定成功后需要修剪25px 25px 5px 放入包埋盒中 流水冲洗 去除组织中的固定液 30分钟 至于不同浓度的酒精脱水 一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂 逐渐脱去组织块中的水份 再将组织块置于既溶于酒精 又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明 以二甲苯替换出组织块的中酒精 才能浸蜡包埋 浸蜡 包埋 石蜡将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中 放入溶蜡箱保温 待石蜡完全浸入组织块后进行包埋 冷却凝固成块即成 包埋好的组织块变硬 才能在切片机上切成很薄的切片 切片 展片 烤片 将包埋好的蜡块固定于切片机上 切成薄片 一般为5 8微米厚 切下的薄片往往皱折 要放到加热的水中烫平 再贴到载玻片上 放45 恒温箱中烘干 脱蜡 至水 染色 脱蜡剂 二甲苯脱水剂 酒精染色剂 苏木精水溶液 酒精伊红染 染色液染色前 须用二甲苯脱去切片中的石蜡 再经由高浓度到低浓度酒精 最后入蒸馏水 就可染色 苏木精 Hematoxylin H 是一种碱性染料 可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色 被碱性染料染色的结构具有嗜碱性 伊红 Eosin E 是一种酸性染料 能将细胞质染成红色或淡红色 被酸性染料染色的结构具有嗜酸性 HE染色过程 1将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟 2酸水及氨水中分色 各数秒钟 3流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻 4入70 和90 酒精中脱水各10分钟 5入酒精伊红染色液染色2 3分钟 脱水 透明 染色后的切片经纯酒精脱水 再经二甲苯使切片透
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