实验五白细胞分类计数.ppt

2020 3 7 1 白细胞分类计数 differentioncountofleukocyte 实验二 谢海啸 2020 3 7 2 一 白细胞分类计数 白细胞分类计数是将血液制备成涂片 瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数 通常分类100个白细胞 计算得出各种白细胞所占百分比 2020 3 7 3 瑞氏染料溶于甲醇 离解为带正电的碱性美兰 M 和带负电的酸性伊红 E 离子 细胞的染色既有物理的吸附作用 又有化学的亲和作用 各种细胞成分的化学性质不同 对染料的亲和力也不一样 故可呈不同的着色特点 瑞氏染色原理 2020 3 7 4 血红蛋白 嗜酸性颗粒均为碱性物质 故与酸性染料伊红结合而染成红色 呈嗜酸性 细胞核的核蛋白为酸性物质 故与碱性染料美兰结合 染成深蓝色或深紫红色 呈嗜碱性 中性颗粒与美兰和伊红同时结合而染为淡紫红色 呈嗜中性 染色原理 2020 3 7 5 器材 光学显微镜推片 载玻片 试剂 Wright染液Wright1 0g甲醇600ml磷酸盐缓冲液 PH6 4 6 8 香柏油 标本来源 EDTA K2抗凝全血 2020 3 7 6 操作 1 推片 血膜厚薄适中 边缘整齐 外观呈舌形 头 体 尾分明 2 干燥3 标记 1 制备血涂片 2020 3 7 7 2 染色1 准备 血膜干透后 用蜡笔在两端划线 以防止染色时染液外溢 将血涂片放染色架上 2 加染液 在涂片上滴加瑞氏染液数滴 以染液覆盖整个血膜为度 稍静置1min 3 加缓冲液 滴加缓冲液等量或多些 与上述染液充分混匀 4 染色 染色10min 5 冲洗 不要先倒掉染液 平持血涂片用流水缓缓冲洗干净 6 干燥 直立血涂片 使其自然干燥 2020 3 7 8 血涂片制作 2020 3 7 9 良好血涂片外观 羽 子弹头 状尾部 周边有空白 无划痕 羽状尾部 2020 3 7 10 不良血涂片 2020 3 7 11 2 瑞氏染色操作 2020 3 7 12 3 白细胞分类 先用低倍镜选择厚薄适宜 染色良好 细胞分布均匀的体尾交界处 滴加香柏油一滴 油镜下分类计数 分类时要有秩序的连续进行 避免主观选择视野 通常分类计数100个白细胞 计算并报告各种白细胞所占比例 低倍镜下所见 结果记录方式 Ne正一Ly正Mo正Eo正Ba正 2020 3 7 13 体尾交界处 理想区域 细胞重叠细胞太稀 理想区域 2020 3 7 14 各类成熟白细胞的形态学 中性粒细胞 Ne 在瑞氏染色血涂片上呈圆形 直径10 13 m 胞浆染粉红色 核形一叶 杆状核 至五叶不等 以三叶者多见 染成深紫红色 胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒 2020 3 7 15 嗜酸性粒细胞 Eo 较中性粒细胞稍大 胞核多为两叶 呈眼镜 八字形 核染色质粗糙染深紫红色 胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒 瑞氏染色时呈桔红色 有折光性 2020 3 7 16 嗜碱性粒细胞 Ba 胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒 瑞氏染色时呈兰黑色 于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡 乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致 核呈淡紫红色常看不清 呈杆状或分叶状 2020 3 7 17 淋巴细胞 Ly 胞体呈圆形 直径介于6 15 m之间 在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见 直径6 9 m 核大呈深紫色致密而浓染 胞浆量极少 大淋巴细胞胞浆量较多 呈清澈的淡蓝色 可见少量嗜苯胺蓝颗粒 胞核圆或椭圆 常偏向细胞一侧 染色较深 2020 3 7 18 单核细胞 Mo 在瑞氏染色涂片上为12 20 m 胞体圆形 椭圆形或不规则形 核形多种多样 最重要的特点是染色质较细致疏松 呈丝网状或条缕状 着色较淡胞浆较多 淡兰色 含大量细小尘土样颗粒 2020 3 7 19 正常成人外周血白细胞分类参考值 Ne50 70 Ly20 40 Mo3 8 Eo0 5 5 Ba0 1 参考值 2020 3 7 20 1 血涂片制备要厚薄适宜 均匀 头体尾分明 无溶血 无空洞 2 很多因素影响涂片时血膜的厚度 血滴大 血粘度高 推片角度大 速度快则血膜厚 反之则血膜薄 3 按一定顺序 有秩序地连续进行 避免选择视野 4 分类计数时应同时报告RBC和WBC的形态是否有异常 退化细胞不计数 注意事项 2020 3 7 21 RBC异