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文档简介
根瘤菌的分离与鉴定 1 照相 2 挖掘和根瘤保存 根瘤选取 大个 新鲜 粉红色 尽量多取 根瘤采集 1 主根上可以剥取少量根皮以保证根瘤完整 2 侧根上的可带少许根 采集 采集 农大豆2号 保豆3号 保存 每个单株植物的根瘤收集在一个卫生纸包中 每个采集点的多个植株放在一个装有硅胶的自封袋中 分离及纯化 用无菌水浸泡干燥根瘤菌直至其复原 2 用95 的酒精浸泡3 5分钟 用5 的NaClO3浸泡1分钟 用无菌水清洗5 7次 换水 在超净台上操作 并且在酒精灯附近 防止染菌 分离及纯化 1 根瘤浸泡 2 根瘤消毒 分离及纯化 3 用牙签 灭菌时尖头朝上 平头朝下 的平头端在灭菌的玻璃平皿上将根瘤刺破 必要时可以滴加一滴无菌水 用灭菌接种环蘸取菌液在YMA固体培养基上划线 用灭菌接种环蘸取同种菌液 在载玻片上进行革兰氏染色 镜检 分离及纯化 消毒 刺破 划线 分离及纯化 4 待平板出现菌落后 观察 选取目的菌落再次划线纯化 镜检 5 纯化后的菌划线在试管斜面培养基上 供保菌 分离及纯化 挑菌 摇菌 稀释1万倍 稀释2万倍 稀释100万倍 保菌 使用YMA液体 20 甘油 吹打斜面上的菌 吸取保存 使用YMA液体 20 甘油 吸取摇好的单个菌斑菌液 提取基因组DNA 260 280 1 97260 230 2 02浓度 570ng l 鉴定 16SrDNA序列测定 方法同书 其中 dNTP 2 5mm引物 10 m测序后 在N
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